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1株猪源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定被引量：20: 2012年; 从BVDV阳性仔猪病料中分离病毒,为开展猪源BVDV病原学研究奠定基础。将处理后BVDV阳性仔猪组织样品接种MDBK细胞,分离到1株猪源BVDV,命名为SD0803株。通过细胞培养、直接免疫荧光、5′-UTR与Npro PCR扩增、电镜观察、TCID50测定及对其分子进化特征加以分析。结果表明,该毒株在MDBK细胞上盲传至13代未出现细胞病变。在直接免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。PCR扩增分别获得5′-UTR与Npro预期大小DNA片段。电镜观察,病毒粒子略呈圆形,有囊膜,直径约50nm。病毒滴度为10-6.5 TCID50.0.2 mL-1。SD0803 5′-UTR、Npro序列进化分析显示,该分离株属于BVDV-1,与已知BVDV-1各亚型之间同源性较低,单独成一分支。结果表明,成功分离鉴定1株猪源BVDV SD0803,该毒株为非致病变型BVDV-1,极有可能为BVDV-1新的亚型。; 邓宇孙春清张宏彪蔺涛张荣龙进学黄律曹三杰袁世山文心田郑浩; 关键词：牛病毒性腹泻病毒进化分析

猪细小病毒4型在试验猪的感染进程及在组织中的分布研究被引量：1: 2012年; 研究猪感染猪细小病毒4型(porcine parvovirus type 4,PPV4)后的症状、血清中病毒DNA拷贝数的变化以及病毒在猪体内的分布,并研究病毒对猪器官组织的嗜性。对试验猪接种PPV4阳性血清,观察PPV4感染猪后的临床症状以及脏器病理变化,利用已建立的PPV4 Taqman荧光定量PCR检测方法,定量检测人工感染试验猪血清和各脏器中PPV4 DNA拷贝数。PPV4感染猪呈现病毒血症,在8d后血清中病毒含量最高,之后逐渐降低。试验猪感染PPV4后前期主要是呼吸道症状,之后好转,无其他症状。试验猪主要的病理变化在于肺脏淤血以及全身淋巴结肿大。PPV4可以侵害试验猪多个器官,前期在肺脏以及扁桃体中PPV4 DNA含量较高,后期在肠道以及泌尿道含量较高。血清富集PPV4病毒电镜观察可见疑似PPV4病毒粒子。试验证明,PPV4具有快速感染性,PPV4对猪并无致死性,主要影响生产性能,对肺脏以及肠道器官组织的嗜性最强。; 黄律龙进学张宏彪袁世山徐大为刘婷婷; 关键词：荧光定量 PCR

猪细小病毒四型的初步研究: 猪细小病毒4型(Porcine Parvovirus Type4,PPV4)属于细小病毒科,细小病毒亚科,博卡病毒属的新成员,于2009年由美国科学家Cheung等首次检测发现并报道。此后两年,许多科学家又检测到其他型的...; 黄律; 关键词：流行病学调查动物实验蛋白表达全基因组序列真核表达

猪源牛病毒性腹泻病毒SD0803株E2蛋白的表达及抗体制备被引量：1: 2012年; 表达去除SD0803E2基因跨膜疏水区的sE2蛋白并制备其抗体,为猪源BVDV诊断奠定基础。RT-PCR扩增SD0803株sE2基因,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-sE2,转化BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。采用间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光等方法鉴定获得的抗体。结果显示,抗体效价最高可达1∶256 000;制备的抗体可与rsE2蛋白特异性结合;该抗体可特异性识别BVDV感染MDBK细胞表达的E2蛋白,显示抗体高度的特异性。成功构建pGEX-4T-1-sE2原核表达质粒,诱导其表达的蛋白免疫家兔,成功制备的猪源BVDV SD0803株E2抗体。; 邓宇蔺涛孙春清张宏彪张荣龙进学黄律文心田曹三杰童光志袁世山郑浩; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白抗体制备

猪细小病毒4型Taq Man荧光定量PCR方法的建立与应用被引量：13: 2011年; 根据GenBank中发表的猪细小病毒4型(PPV4)全基因组序列,针对其结构蛋白VP2基因的保守序列,设计合成特异性引物及Taq Man探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了PPV4的Taq Man荧光定量PCR。反应条件优化后,该方法在6.73×109copies/μL^6.73×101copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.998;对PPV4的最低检测限为6.73×101copies/μL。特异性试验结果显示,用该方法检测其他基因型猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪圆环病毒2型等临床常见病毒,结果均为阴性。批内及批间变异系数均低于2%。用建立的荧光定量PCR方法和普通PCR方法对672份临床病料感染情况进行检测,阳性率为1.93%,而普通PCR检出率仅为1.63%。本研究首次报告在我国猪群中存在PPV4,同时建立的荧光定量方法为PPV4的检测、体外敏感细胞的筛选以及病毒器官嗜性的研究等提供了快速而敏感的分子检测技术。; 黄律龙进学翟少伦刘长龙张荣袁世山; 关键词：TAQ

猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用被引量：38: 2010年; 猪博卡病毒是最新发现的一种DNA病毒,于2009年首次在瑞典患仔猪断奶后多系统衰竭综合征的猪体内被鉴定。为了及时地评估其在我国的流行情况,本研究根据GenBank上递交的唯一一条猪博卡病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,并首次建立了猪博卡病毒的PCR检测方法。该方法特异性强,敏感度高,重复性好,对2009年我国部分省市猪场的191份临床样品进行检测,结果75份为猪博卡病毒阳性,这表明我国猪群中猪博卡病毒相当流行。本研究建立的PCR方法可以作为猪博卡病毒在临床上的一种诊断技术。; 翟少伦岳城韦祖樟冉多良龙进学蔺涛邓宇孙利厂黄律袁世山; 关键词：聚合酶链式反应

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黄律