- 缺血预处理通过增强自噬水平及抑制自噬性细胞死亡保护脊髓神经被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨缺血预处理保护脊髓神经的具体机制。方法 :50只成年SD大鼠随机分为假手术组(A组5只)、缺血再灌注组(B组20只)、缺血预处理组(C组5只)、缺血预处理+缺血再灌注组(D组20只)。A组动物麻醉后仅切开腹腔后关腹;B组和D组采用左肾下方0.5 cm处腹主动脉夹闭法夹闭0.5 h后松开,再灌注3、6、12、24 h,其中D组在缺血再灌注损伤前行缺血5 min、再灌注5 min缺血预处理,共3次;C组仅行3次缺血预处理。造模成功后,利用HE染色和免疫组化评估各组神经元的存活率,透射电镜观察自噬活性,免疫组化和蛋白印迹分析自噬标志物LC3-Ⅱ和自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况。结果:缺血再灌注组中,LC3-Ⅱ蛋白在再灌注3 h后显著升高达到峰值后明显下降,24 h后几乎无表达;Beclin-1蛋白于再灌注后3 h开始升高且在24 h达到峰值;再灌注24 h后实验动物表现出明显的脊髓损伤症状,脊髓神经细胞存活率明显降低。缺血预处理+缺血再灌注组中,LC3-Ⅱ蛋白表达从再灌注3 h开始升高并持续至再灌注24 h;Beclin-1蛋白在再灌注24 h后才开始升高;与缺血再灌注组相比,缺血预处理+缺血再灌注组脊髓神经元死亡率明显降低。结论:缺血预处理通过维持缺血再灌注后神经细胞自噬水平并抑制自噬性细胞死亡从而保护脊髓神经细胞。
- 顾军殷建殷照阳江涛杨海源黄瑶恽波凡进
- 关键词：脊髓缺血再灌注缺血预处理LC3BECLIN-1
- 缺血再灌注损伤时iNOS通过激活BAD诱发脊髓神经元凋亡被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨大鼠脊髓缺血再灌注损伤过程中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)调控脊髓神经元凋亡的具体机制。方法:42只SD大鼠随机分为假手术组(A组,6只)、缺血再灌注组(B组,18只)和iNOS抑制组(C组,18只)。A组动物麻醉后仅腹腔切开,B组及C组采用腹主动脉阻断法(夹闭腹主动脉1 h后松开,再灌注6、12、24 h)建立脊髓缺血再灌注损伤模型。手术后,A组及B组动物按5 ml/kg腹腔注射5%二甲基亚砜,C组动物按150 mg/kg腹腔注射同等量氨基胍。Tarlov运动功能评分法评估三组大鼠的后肢运动功能。取腰段脊髓组织,透射电镜观察脊髓神经细胞形态学变化,神经元特异性抗体NeuN免疫荧光计算各组脊髓组织中存活神经元数目,Western blot检测iNOS、Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动因子(Bcl-xL/Bcl-2 associated death promoter,BAD)、磷酸化BAD(p-BAD)、14-3-3及细胞色素C的表达,免疫共沉淀检测BAD与14-3-3的结合状态。结果:Tarlov运动功能评分显示A组大鼠后肢运动功能无损害,B组和C组大鼠后肢功能明显损害,但C组大鼠后肢功能好于B组(P<0.05)。NeuN免疫荧光结果显示B组和C组大鼠脊髓神经元数目明显减少,但C组大鼠脊髓神经元数目多于B组(P<0.05)。电镜结果示B组及C组中脊髓组织均有明显凋亡现象,但C组大鼠凋亡程度较轻。Western blot结果表明iNOS和细胞色素C表达量在B组及C组中随再灌注时间延长而增加,但相同再灌注时间C组表达强度明显弱于B组(P<0.05);p-BAD表达量则随着灌注时间延长而下降,但C组中下降程度明显小于B组(P<0.05)。免疫共沉淀结果表明:BAD与14-3-3结合力随着再灌注时间的延长在B组和C组中逐渐降低,但是C组程度更慢(P<0.05)。结论:脊髓缺血再灌注过程中,iNOS通过促进pBAD去磷酸化,降低BAD与14-3-3的结合力,进而诱发脊髓神经元的凋亡。
- 黄瑶李益明凡进李青青殷国勇
- 关键词：缺血再灌注损伤脊髓诱导型一氧化氮合酶BCL-XL
