吴阳
- 作品数：7 被引量：30H指数：3
- 供职机构：郑州轻工业学院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 猪瘟病毒E2蛋白A3BCD主要抗原结构域的原核表达被引量：3
- 2009年
- 目的:对猪瘟病毒E2蛋白A3BCD进行原核表达,以期获得具有抗原活性的表达产物。方法:利用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR)技术从河南省近期流行猪瘟病毒野毒株中扩增得到E2基因,并将其克隆至pUCm-T载体,构建克隆载体pUCm-TE2;利用PCR方法扩增E2基因的主要抗原域A3BCD,克隆至pET-32a(+)载体,构建表达载体pET-32aE2-2,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,对诱导产物进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果:SDS-PAGE结果显示在相对分子质量约35000处出现预期条带,表达产物主要以包涵体形式存在;Western-blotting检测表明,表达产物能与猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应,出现单一反应带;用8mol/L尿素(pH8.0)溶解包涵体,经Ni-NTA亲和层析法纯化,获得纯度较高的目的蛋白,ELISA检测表明能与猪瘟抗体阳性血清发生特异性反应。结论:重组质粒pET-32aE2-2转化大肠杆菌Rosetta(DE3),解除了由于稀有密码子造成的表达限制,表达量得到提高;表达产物为硫氧还蛋白和E2-2的融合蛋白,易于纯化,且具有活性,为研制猪瘟抗体ELISA检测试剂盒奠定了基础。
- 李春利王云龙李晨阳李玉林田璐王真吴阳
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白原核表达包涵体
- 猪β干扰素成熟蛋白编码基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达与纯化被引量：1
- 2006年
- 从猪肝脏中提取基因组DNA,利用PCR法直接扩增了猪β干扰素成熟蛋白编码基因。将PCR产物亚克隆至pGEM-7Zf(+)载体,转化入大肠埃希菌TG1,筛选出阳性菌株后进行测序。序列分析结果表明,克隆片段含编码猪β干扰素成熟蛋白质的495个核苷酸,与GenBank上(登录号:S41178)的序列同源性达到100%。在此基础上,构建了猪β干扰素原核表达载体pQE30/poIFN-β并转化入大肠埃希菌M15。该工程菌在37℃经0.03mmol/LIPTG诱导4h后,进行SDS-PAGE电泳,结果在分子质量约20ku的位置出现了明显的目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在。经凝胶分析软件Bandscan分析,表达产物约占菌体总蛋白的18%。包涵体用6mol/L盐酸胍溶解,经过Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白,为下一步对猪β干扰素进行复性及活性研究打下了基础。
- 吴阳李玲玲李玉林李晨阳王岁楼
- 关键词：基因克隆原核表达
- 猪血清白蛋白基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2007年
- 血清白蛋白融合技术是一种开发长效重组蛋白药物的新技术。为了获得猪血清白蛋白(PSA)基因,根据GenBank(登录号:AY663543)中PSA的基因序列,设计一对引物,采用RT-PCR从新鲜猪肝组织中扩增出PSA基因的全长cDNA,产物纯化后连接至pBS-T载体,转化大肠埃希菌TG1,采用PCR法及酶切鉴定法筛选出阳性菌株后进行测序。序列分析结果表明,成功克隆了PSA基因的1 821 bp全长cDNA,与GenBank中参照基因序列同源性为99.6%,氨基酸序列同源性为99.5%。本研究数据已提交至GenBank,并申请到一个登录号EF202601。
- 吴阳李晨阳李玲玲焦道忠李春利张宁宁王岁楼
- 关键词：融合技术
- 猪γ干扰素基因的合成、表达及纯化被引量：5
- 2007年
- 目的通过人工合成猪γ干扰素(poIFN-γ)基因的编码序列,提高目的蛋白的表达。方法根据poIFN-γ的氨基酸序列,选择大肠杆菌所偏爱的密码子,设计并合成了24个寡核苷酸片段。通过重叠区扩增法,利用PCR合成poIFN-的成熟蛋白编码基因,克隆入pGEM-7Zf(+)载体,转化大肠杆菌TG1。经测序证实后,构建原核表达载体pBV222/poIFN-γ并转化大肠杆菌DH5α,经诱导表达后,进行SDS-PAGE分析及纯化。结果酶切及测序结果表明表达载体构建成功,工程菌诱导表达后的电泳图谱在相对分子质量约16500的位置出现明显的目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的55%,占包涵体中总蛋白的80%,经Ni2+-NTA亲和层析纯化,纯度达90%以上。结论已获得了纯度较高的目的蛋白,为下一步对猪γ干扰素进行复性及活性研究奠定了基础。
- 王云龙李玲玲李晨阳吴阳
- 关键词：猪Γ干扰素基因合成纯化
- 日本脑炎病毒SA14-14-2株E基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2007年
- 根据GenBank公布的日本脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14-2减毒株E基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增其E基因全长cDNA,将扩增产物克隆入pUCm-T载体中,测序后亚克隆到原核表达载体pET-32a(+),筛选重组质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)宿主菌。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表达产物。结果获得了含全长日本脑炎病毒E基因的重组质粒,经测序证实,与GenBank上E基因序列的同源性达到100%。所表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,为制备JEV实验室诊断抗原打下了基础。
- 李玲玲李晨阳吴阳周净王云龙
- 关键词：日本脑炎病毒减毒活疫苗E基因
- 超高压在工业微生物诱变选育中的应用初探被引量：18
- 2005年
- 超高压对微生物有多方面的影响,它不仅可使微生物细胞组分、体积形态发生变化,还可使微生物的基因表达和核酸结构及其生物学功能发生改变。超高压的这些生物学效应,使其不仅可以应用到食品杀菌、保藏及某些加工过程,而且在微生物菌种诱变方面具有很大的应用潜力。
- 王岁楼吴晓宗郝莉花王琼波吴阳
- 关键词：超高压工业微生物诱变选育细胞形态核酸基因
- 酵母菌中超氧化物歧化酶的研究
- 王岁楼景建洲刘凤珠郑坚强高建奇张国超吴阳
- SOD的应用主要涉及医学、化妆品和食品等领域，虽然世界各国开发SOD的目标主要是用作药物，但随着人们的健康观念从传统药物治疗向食品保健方向的迅速转化，预计SOD在食品中的应用将会有很好的前景。据报道，日本有SOD糖出售，...
- 关键词：
- 关键词：酵母菌超氧化物歧化酶SOD
