尹晓光
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 供职机构：吉林大学白求恩医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金吉林省科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HSP65-PSA融合蛋白的体内外抗肿瘤活性研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究热休克蛋白65(HSP65)-前列腺特异性抗原融合蛋白在体外对人树突状细胞的活化作用以及在小鼠体内抑制PSA阳性肿瘤细胞生长的作用。方法:利用Westernblot方法对融合蛋白HSP65-PSA的特异性进行鉴定;利用共聚焦显微镜、流式细胞术(FCM)检测和斑点杂交的方法对PcDNA3-GFP-PSA稳定转染的B16细胞进行鉴定;用HSP65-PSA融合蛋白刺激来自于人外周血的未成熟树突状细胞,观察融合蛋白对树突状细胞的体外活化作用;用PcDNA3-GFP-PSA稳定转染的B16细胞种植C57BL/6小鼠,继而用HSP65-PSA融合蛋白来免疫小鼠以观察融合蛋白对PSA阳性B16肿瘤细胞生长的体内抑制作用。结果:Westernblot检测显示融合蛋白HSP65-PSA具有PSA蛋白特异性。共聚焦显微镜、FCM检测和斑点杂交结果均显示PcDNA3-GFP-PSA转染的B16细胞转染情况良好。体外细胞实验显示,将HSP65-PSA融合蛋白作用于人外周血树突状细胞后可以明显促进树突状细胞表面分子CD86的表达,其上调率为52.93%。动物体内实验显示,HSP65-PSA融合蛋白可以明显抑制PSA阳性B16肿瘤细胞在小鼠体内的生长。10μg蛋白免疫组的肿瘤体积(4.91±5.21)与对照组(10.56±6.10)相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HSP65-PSA融合蛋白可以在体外活化树突状细胞,在小鼠体内抑制PSA阳性B16肿瘤细胞的生长。HSP65-PSA融合蛋白可能具有应用于PSA阳性肿瘤的免疫治疗作用。
- 董博翰吴秀丽尹晓光王莉卫红飞孙陆果于永利王丽颖
- 关键词：免疫治疗肿瘤生长抑制
- Hsp65与HBV多表位融合基因的表达及其免疫应答研究被引量：4
- 2008年
- 目的用基因工程的方法构建并表达一种由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV表面抗原与核心抗原的多个表位组成的乙型肝炎治疗性疫苗(简称为Hsp65-HBV)。方法采用PCR方法人工合成由PADRE和HBV的多个表位组成的基因片段,将此片段克隆入原核表达质粒pET28a/Hsp65后,利用大肠杆菌进行融合蛋白的表达。用纯化后的蛋白免疫Balb/c小鼠。将小鼠脾细胞用HBsAg装载的P815细胞在体外刺激5d后,用流式细胞仪检测IFN-γ+细胞的频率。用ELISA方法检测小鼠血清中的特异性抗体(IgG1和IgG2a)的产生。结果由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白能在大肠杆菌中进行高水平的表达,能诱导小鼠产生IgG2a亚型的特异性抗体,并能诱导HBV特异性的IFN-γ+的淋巴细胞的产生。结论获得了大肠杆菌表达的由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白,并能被机体以MHC-Ⅰ途径递呈,为检测本融合蛋白是否能激发出HBV特异性CTL反应奠定了基础。
- 王华尹晓光张培因卫红飞于永利王丽颖
- 关键词：热休克蛋白65乙型肝炎病毒多表位
- 抗BCG Hsp65单克隆抗体的鉴定及应用研究
- 2008年
- 目的:对制备的5株抗BCG Hsp65单克隆抗体(Hsp65 mAb)做进一步鉴定和应用。方法:采用ELISA方法对mAb的效价、亚类和结合抗原表位特性进行鉴定,应用mAb对Hsp65融合蛋白进行了Western blot和免疫荧光检测。结果:5株mAb的类型均为IgG,其中ⅠC1和ⅡC3株mAb为IgG1亚类,ⅠA5、ⅠC3和ⅠD6株mAb为IgG2a亚类。抗原表位竞争结合分析显示,在配对的不同亚类mAb中,存在着结合Hsp65表面不同抗原表位的mAb。通过Western blot检测证实,Hsp65 mAb对Hsp65-MUC1检测结果,与MUC1 mAb的一致。细胞免疫荧光检测显示,制备的mAb能够识别通过蛋白装载进入树突状细胞内的Hsp65-PSA。结论:获得的Hsp65 mAb可做为检测工具,用于研究BCG Hsp65及其融合蛋白的功能和表达。
- 尹晓光吴秀丽万敏张培因王艳媚王丽颖于永利
- 关键词：BCG热休克蛋白单克隆抗体
- HSP65-HBV表位融合蛋白对人PBMC的激活作用
- 2006年
- 王华尹晓光吴秀丽王丽王燕媚于永利王丽颖
- 关键词：人PBMC融合蛋白抗原特异性CTLMHCI类辅助T细胞
- 抗O型口蹄疫病毒VP1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的:制备抗O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白VP1的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:以自行构建表达的O型FMDV-VP1表位重组蛋白(VP1epi)为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用Westernblot、间接ELISA和斑点免疫测定法对mAb的特异性进行鉴定。结果:成功地获得1株分泌抗VP1epi重组蛋白mAb的杂交瘤细胞株“C7”,其分泌的mAb为IgG1亚类,能特异性地识别VP1epi重组蛋白,其腹水效价可达1∶12800。斑点免疫测定法显示,该mAb能很好地识别灭活的FMDV。结论:VP1epi重组蛋白可代替FMDV制备抗天然FMDV-VP1的mAb。抗O型FMDV-VP1mAb的成功制备,为进一步研究开发新型FMDV的检测方法奠定了基础。
- 胡大利张培因尹晓光卫红飞王丽颖于永利
- 关键词：口蹄疫病毒重组蛋白单克隆抗体
- 柯萨奇B组病毒特异性IgM固相放免诊断试剂盒的研制
- 该研究采用杂交瘤技术制备了抗人IgM单克隆抗体,建立了固相放免检测试剂盒,应用于临床检测CBV-IgM,在相当程度上克服了上述缺点.人IgM采用硫酸铵沉淀,葡聚糖层析纯化,再经SPA吸附后免疫BALb/c鼠应用杂交瘤技术...
- 尹晓光
- 关键词：柯萨奇病毒单克隆抗体
- 利用重组蛋白制备和鉴定分枝杆菌HSP65单克隆抗体被引量：1
- 2006年
- 目的制备针对牛分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)的单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以CpGODN1826/Alum为佐剂,不同的HSP65融合蛋白为免疫抗原和检测抗窄,用聚乙二醇(PEG)法制备杂交瘤细胞,ELISA检测杂交瘤细胞分泌抗体的效价和类型,Western blot分析抗体的特异性。结果获得5株稳定分泌抗HSP65蛋白的McAb,3株细胞分泌的mAb为IgG1亚类,2株为IgG2a。ELISA和Western blot结果显示,mAb能特异性结合HSP65-PSA-tag、HSP65-MUC1-tag和HSP65重组蛋白,但与Chaperon-PSA重组蛋白和宿主菌BL21的菌体裂解蛋白不发生结合。结论纯化的重组蛋白可代替的牛分枝杆菌,用于HSP65 mAb的制备和鉴定。获得的HSP65 mAb为HSP65及其重组蛋白的功能研究奠定基础。
- 尹晓光李大鹏万敏张培因胡晓平王丽颖于永利
- 关键词：HSP65重组蛋白单克隆抗体
- HSP65-PSA多表位融合蛋白疫苗的功能研究
- 分子量为65KD的卡介苗热休克蛋白（BCG HSP65）具有分子伴侣功能。在免疫应答过程中,HSP65与肿瘤表位抗原形成的融合蛋白,通过受体介导进入树突状细胞（dendritic cell, DC）,HSP65协助与之融...
- 尹晓光
- 关键词：蛋白疫苗
- 脂质体介导哺乳动物细胞转染的改良方法被引量：8
- 2007年
- 目的提高脂质体介导的细胞转染效率。方法在传统的脂质体生化转染过程中,介入了简单的物理转染技术,并应用有限稀释克隆技术和共聚焦荧光显微镜检测技术,对转染细胞进行了早期克隆筛选,用流式细胞术对转染细胞表达GFP的阳性率进行检测。结果流式细胞术检测显示,通过改良法获得转染pcDNA3-GFP-PSA质粒的B16、RM1和EL4细胞,表达报告蛋白GFP的阳性百分率(26%、24%和40%)高于传统法转染的细胞(16%、16%和18%)。改良法转染的B16、RM1和EL4经过克隆筛选、液氮冻存、水浴复苏和体外连续培养2周后,外源基因报告蛋白GFP表达的阳性百分率分别为77%、69%和83%。在转染流程上,通过改良法获得单克隆转染细胞株的时间明显缩短。结论改良的脂质体转染方法结合细胞克隆技术,能在最短时间内获得高表达外源基因的转染细胞株。
- 尹晓光吴秀丽万敏王艳媚王丽颖于永利
- 关键词：脂质体共聚焦显微镜流式细胞术
- 用线性载体稳定转染P815细胞的脂质体转染方法的优化被引量：2
- 2008年
- 目的:提高用线性载体进行的稳定转染哺乳动物细胞的脂质体转染方法的转染效率及转染稳定性。方法:将pcDNA3/GFP载体线性化,对复苏24h的P815细胞(10%铺满培养板板底)在96孔板上进行转染,优化DNA、脂质体的用量以及G418筛选浓度,设立复苏后培养1周的P815细胞(80%铺满培养板板底)在6孔板上进行常规转染条件的对照。用共聚焦荧光显微镜和流式细胞术检测阳性克隆。结果:采用优化的方法可将用线性化的pcDNA3/GFP质粒稳定转染P815细胞的实验周期由2个月缩短为2周,转染细胞株中GFP+细胞的比例、GFP的荧光强度、转染细胞的稳定性均显著高于常规方法所获得的转染细胞。结论:改进的脂质体转染方法能显著提高用线性载体进行的细胞转染的效率和稳定性,并能显著缩短实验周期。
- 王华尹晓光王莉吴秀丽于永利王丽颖
- 关键词：脂质体稳定转染绿色荧光蛋白
