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用8质粒病毒拯救系统产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒的研究: 2008年; 目的利用流感病毒8质粒病毒拯救系统，产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒，建立以冷适应流感病毒株为拯救骨架的反向遗传学技术平台。方法以冷适应、温度敏感、减毒的A／Ann Arbor／6／60（H2N2）流感病毒株作为拯救病毒的骨架，人工合成了该病毒株的6个内部基因片段，即PB2、PB1、PA、NP、M和NS，同时引入5个氨基酸突变作为标签。6个基因片段通过与改造后的转录载体pAD3000连接，构建6个基因的拯救载体，经测序获得序列准确的拯救质粒：pMDV-A-PB2、pMDV-A-PB1、pMDV-A-PA、pMDV-A-NP、pMDV-A-M、pMDV-A-NS。结果6质粒与PR8的表面基因HA和NA进行“6＋2”组合的病毒拯救，8个重组质粒共转染COS-1细胞，成功拯救出了具有血凝活性的冷适应减毒的重组A型人流感病毒，命名为rMDV-A。鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝（HA）效价为1：2^9～1：2^10。结论构建的A／Ann Arbor／6／60的6个内部基因的病毒骨架拯救系统，为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发提供了试验材料。; 杨鹏辉石辛甫颜艳罗德炎张钰邢丽龙进学刘秀梵王希良; 关键词：流感病毒反向遗传学

反向遗传操作技术在流感病毒中的应用研究被引量：1: 2007年; 反向遗传操作技术(reverse genetics,RG)是近年来比较热门的一门技术,该技术可以在DNA水平上对病毒基因组进行各种修饰或改造,然后通过拯救病毒的表型变化来判断这些基因操作的效果,从而可以对病毒基因组表达调控机制、病毒致病的分子机理等进行研究.我们通过对近年来国外有关文献的回顾,希望能够正确看待病毒拯救技术的利弊,注意生物安全性,希望能够为防治可能发生的流感病毒流散和传播提供新的思路.; 张钰罗德炎王希良孙建中; 关键词：流感病毒疫苗反向遗传技术

人用禽流感疫苗H5N1株三级毒种库的建立被引量：1: 2007年; 目的：建立人用禽流感疫苗H5N1株三级毒种库，为生产疫苗提供毒种。方法：用SPF鸡胚培养病毒，对型别、滴度和无菌等各项检测合格后，建立人用禽流感疫苗H5N1株三级毒种库。结果：在33℃培养52h条件下，毒种滴度为1：640-1：1280；厌氧菌、细菌、真菌、支原体、血吸附病毒、非血吸附病毒和外源性禽白血病病毒检测均为阴性。将毒种在鸡胚上传至12代，滴度在1：320-1：640之间，中和抗体滴度在1：160以上，EID50在6．7以上；毒种HA、NA基因序列检测与公布的HA、NA基因序列的同源性达99．0％，代次之间达99．9％。结论：本工作为研制人用禽流感疫苗贮备了标准毒种。; 张松乐邢丽罗德炎何蕊杨海荣张钰王希良; 关键词：流感鸡胚流感疫苗 H5N1

基于RG技术H5N1高致病性人用禽流感疫苗株的制备及初步评价: 当前，高致病性人禽流感病毒（H5N1）已在15个国家和地区发生，死亡率高，特别是印尼家族性感染被美国科学家证实为人传染人事例后，使得大流行流感防控形势异常严峻。WHO预言，下一次流感大流行不是有和无的问题，而是早和晚的问...; 张钰; 关键词：反向遗传操作技术; 文献传递

2006～2007年流行流感病毒减毒疫苗株的构建(英文)被引量：3: 2008年; 选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株作为骨架病毒,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入5个氨基酸突变(PB1-391E,581G,661T,PB2-265S,NP-34G).HA和NA来源于2006～2007当年流行株A/New Caledonia/20/99(H1N1).8个基因片段通过与改造后的转录载体pAD3000连接,构建8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒:pMDV-A-PB2、pMDV-A-PB1、pMDV-A-PA、pMDV-A-NP、pMDV-A-M、pMDV-A-NS、pMDV-A-HA、pMDV-A-NA.6质粒与当年流行株的表面基因HA和NA进行"6+2"组合的病毒拯救,8个重组质粒共转染COS-1细胞,成功拯救出了具有血凝性的冷适应减毒的重组A型人流感病毒.鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝效价为1∶29～1∶210.构建的A/AA/6/606个内部基因的病毒骨架拯救系统,为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础.; 杨鹏辉叶艺石辛甫罗德炎张钰颜艳张鹏飞段跃强邢丽刘秀梵王希良; 关键词：流感病毒反向遗传学

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张钰