- 抑制miRNA-21表达对胆管癌细胞凋亡、侵袭的影响及其靶基因探讨被引量：3
- 2011年
- 目的探讨抑制miRNA-21表达对胆管癌细胞株凋亡、侵袭的影响及其可能调控的靶基因。方法通过RNAi技术抑制胆管癌细胞株RBE中miRNA-21的表达并加以验证。通过荧光定量PCR技术及蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测RBE细胞中RECK基因表达的改变。应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。用体外侵袭实验分析胆管癌细胞侵袭能力的改变。结果miRNA-21在胆管癌细胞株RBE中的表达得到有效抑制，并且RECK基因及其蛋白的表达明显上调。流式细胞仪显示RBE细胞凋亡率明显增高，且抑制miRNA-21的表达后胆管癌细胞的侵袭性明显下降。结论抑制miRNA-21的表达可促进RBE细胞的凋亡，并降低其侵袭能力，RECK作为miRNA-21的靶基因参与调控过程。
- 尤昊黄强刘臣海谢放朱凯
- 关键词：胆管癌MIRNA-21凋亡
- WWOX在胆管癌组织中的表达及其对胆管癌细胞生物学行为的影响
- 序言胆管癌是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤,其特点是起病隐匿、缺乏理想的早期诊断标志物、手术切除率低、对常规放化疗缺乏敏感性,因此胆管癌患者的预后极差。WWOX是一种重要的抑癌基因,在多种肿瘤中被发现表达缺失。本研究首先检...
- 朱凯
- 关键词：胆管癌近交
- 文献传递
- RNA干扰AXL基因对胆囊癌细胞增殖、侵袭能力的影响及其机制研究
- 目的：观察受体络氨酸激酶AXL（Anexelekto）对胆囊癌细胞增殖、侵袭能力的影响，并初步探讨其作用机制。 方法：1.免疫组化方法检测AXL在胆囊癌组织中的表达情况，并结合临床病例资料分析AXL阳性表达的意义2.细...
- 朱凯
- 关键词：胆囊癌RNA干扰细胞增殖
- 胰十二指肠切除术后早期并发症分析(附148例报告)被引量：3
- 2011年
- 胰十二指肠切除术（pancreaticoduodenectomy,PD）是治疗胰头、十二指肠以及Vater壶腹周围恶性肿瘤及一些良性疾病的经典手术方式。该手术范围大、难度高、持续时间长、术中出血多,是腹部外科最为复杂的手术之一。同时,由于此类患者全身状况较差．
- 尤昊黄强刘臣海谢放朱凯
- 关键词：胰十二指肠切除术并发症消化道肿瘤
- WWOX表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其机制被引量：3
- 2011年
- 目的探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因（WWOX）表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其作用机制。方法用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞；采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法鉴定WWOX在QBC939细胞中的表达；流式细胞仪（FCM）法检测转染前后各细胞凋亡率的变化；JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψm）变化；荧光定量RT—PCR和Western blot法检测胆管癌细胞bcl-2表达的变化；将未转染和转染空质粒的细胞作为对照组接种到裸鼠皮下以检测荷瘤，TUNEL方法原位检测移植瘤的凋亡。结果建立了稳定表达WWOX基因的QBC939／WWOX细胞株，mRNA及蛋白表达明显增加。FCM显示QBC939／WWOX组的细胞凋亡率明显增高[（1．24±0．35）％比（1．73±0．48）％比（21．40±2．35）％，P〈0．01]，JC-1显示转染组的线粒体膜电位下降[（4．27±0．64）％比（4．96±0．52）％比（28．60±3．94）％，P〈0．01]，bcl-2 mRNA及蛋白的表达均显著降低（P〈0．05）。转染组的皮下肿瘤较对照组生长速度明显减慢（P〈0．05），TUNEL实验证实转染组的皮下肿瘤凋亡指数为（13．6±1．5）％，较对照组明显增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论WWOX基因能促进胆管癌细胞的凋亡，其机制可能与下调bcl-2的表达，激活线粒体凋亡通路有关。
- 朱凯黄强刘臣海谢放任维华汤志刚
- 关键词：胆管癌基因转染脱噬作用
- WWOX基因转染对胆管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨WWOX基因转染胆管癌细胞株QBC939后对其增殖、凋亡与侵袭性的影响.方法:用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞,建立稳定表达WWOX基因的细胞株.将其分为以下3组:QBC939组,QBC939/con组和QBC939/WWOX组.荧光定量RT-PCR和Westernblot法检测各组WWOXmRNA和蛋白水平的表达;MTT实验检测转染前后各组细胞增殖活性的变化;FCM法检测各组细胞的凋亡;Transwell小室侵袭实验检测各组肿瘤细胞侵袭力的变化.结果:建立了稳定表达WWOX基因的QBC939/WWOX细胞株,WWOXmRNA和蛋白的表达增加[3.71(3.64-3.78)vs1.00(0.98-1.02),1.07(1.02-1.13);0.86±0.03vs0.25±0.01,0.27±0.02,均P<0.05],转染后的QBC939细胞MTT吸光度明显下降(0.63±0.04vs0.90±0.05,0.87±0.04,均P<0.01),FCM显示QBC939/WWOX组的细胞凋亡率明显增高(21.4%±2.35%vs1.24%±0.35%,1.73%±0.48%,均P<0.01),侵袭实验显示转移至下室滤膜的细胞数明显减少(70.00±4.58vs102.33±8.33,107.00±9.00,均P<0.01).结论:WWOX基因能抑制胆管癌细胞株QBC939的增殖,加速肿瘤细胞凋亡并降低其侵袭力,可能作为胆管癌基因治疗的一个新靶点.
- 朱凯黄强邵峰任维华
- 关键词：胆管癌转染增殖凋亡
- CD133和Ki-67在神经母细胞瘤中的表达及其与预后的关系被引量：5
- 2017年
- 目的探讨小儿神经母细胞瘤(NB)组织中CD133和Ki-67蛋白的表达与肿瘤发展及预后的关系。方法选取2010年1月至2017年1月在安徽省立医院进行NB手术治疗患儿81例,手术中留取肿瘤组织,采用免疫组化染色法检测瘤组织中的CD133和Ki-67蛋白的阳性率,分析CD133和Ki-67表达水平的相关性,及其表达水平与NB患者年龄、性别以及肿瘤分期、分化程度和肿瘤转移情况等临床病理参数的关系;手术后电话随访患儿生存情况,共随访到67例,失访14例。通过Kaplan-Merier法建立生存曲线,分析CD133蛋白表达水平与患儿生存时间的关系。结果在81例NB患儿病理组织中CD133阳性率为56.8%,Ki-67阳性率为59.3%,CD133与Ki-67表达呈正相关(r=0.188,P=0.001);在Ⅰ期和Ⅱ期NB中CD133和Ki-67的表达水平显著低于Ⅲ、Ⅳ及Ⅳ-S期(P=0.0014,P=0.0009);在肿瘤细胞未分化的患儿中CD133和Ki-67阳性率显著高于分化程度高的患儿(P=0.0013,P=0.0009);在发生肿瘤转移的患儿中CD133和Ki-67阳性率显著高于未发生转移的病例(P=0.0013,P=0.0009);CD133和Ki-67的阳性率与性别和年龄无相关性(P>0.05)。CD133阳性患儿生存率低于阴性患儿(Log rank=53.80,P=0.001)。结论 CD133和Ki-67在NB组织中均有较高的阳性率,两者的表达呈正相关,表达水平与NB的发展和预后相关。
- 朱凯何晶晶苏义林陈天拓
- 关键词：神经母细胞瘤预后
- WWOX在胆管癌组织中的表达及其对胆管癌细胞生物学行为的影响被引量：4
- 2011年
- 目的研究抑癌基因WWOX表达对胆管癌RBE细胞生长的影响。方法采用免疫组化方法检测2005年7月至2010年5月54例胆管癌组织、12例正常胆管组织中WWOX蛋白表达水平。将携有WWOX基因的真核表达载体转染胆管癌细胞系RBE细胞（RBE／WWOX组），筛选稳定转染的细胞并扩增培养，以转染空载质粒（RBE／con组）及未经转染（自然生长组）的RBE细胞作为对照。荧光定量RT－PCR和Western Blot法检测WWOX在RBE细胞中的表达情况；噻唑蓝实验检测转染前后各组细胞增殖活性；FCM法检测各组细胞的凋亡；JC－1染色法检测细胞线粒体膜电位；Transwell小室侵袭实验检测各组肿瘤细胞侵袭力；荧光定量RT—PCR和Western Blot法检测胆管癌细胞bcl-2、bax、FasL、caspase-3表达的变化。结果WWOX在胆管癌中的表达低于正常胆管组织（P〈0．05），蛋白表达的缺失频率为40．7％。建立稳定表达WWOX基因的RBE／WWOX细胞株，mRNA及蛋白表达明显增加。转染后的RBE细胞噻唑蓝吸光度明显下降（P〈0．05）。与自然生长组和RBE/con组比较，FCM显示RBE／WWOX组细胞的凋亡率明显增高（P〈0．01），JC－1显示转染后的线粒体膜电位下降（P〈0．01），侵袭实验显示转移至下室滤膜的细胞数明显减少（P〈0．01）。荧光定量RT-PCR结果显示bcl－2mRNA表达是自然生长组的0．12倍，bax、caspase-3mRNA分别是自然生长组的4．72和2．57倍，FasLmRNA的表达无明显变化；Western Blot法检测发现bcl－2蛋白的表达降低，bax、caspase-3蛋白表达升高，FasL无明显变化。结论抑癌基因WWOX通过诱导胆管癌细胞凋亡发挥抗肿瘤增殖的作用。
- 黄强朱凯刘臣海谢放许鹏汤志刚
- 关键词：胆管肿瘤免疫组织化学
- miRNA-21靶向作用于maspin及其对胆管癌细胞增殖、凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的通过抑制miRNA-21的表达观察对胆管癌细胞株增殖、凋亡的影响,并探讨miRNA-21可能调控的靶基因。方法以人胆管癌细胞RBE细胞为研究对象,根据处理方法不同,细胞分为四组:正常细胞组、脂质体组(仅予脂质体)、阴性对照组(转染相关阴性对照试剂)、miRNA-21抑制组(转染miRNA-21抑制剂)。应用MTT方法检测细胞增殖活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,通过荧光定量PCR技术及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RBE细胞中maspin基因表达的改变。结果 miRNA-21在经转染miRNA-21抑制剂后在RBE细胞中的表达得到有效抑制,荧光定量PCR结果显示与正常细胞相比,其表达下降了0.02倍。MTT结果显示RBE细胞在抑制miRNA-21表达后增殖活性明显受到抑制(P<0.05),流式细胞仪结果显示各组细胞凋亡率分别为2.29%、2.43%、2.89%、19.35%,miRNA-21的表达降低后,RBE细胞的凋亡率明显增高(P<0.05),并且荧光定量PCR及western blot结果显示maspin mRNA及其蛋白的表达明显上调(P<0.05)。结论通过抑制miRNA-21的表达可抑制RBE细胞的增殖,促进RBE细胞的凋亡,miRNA-21可通过靶向抑制maspin的表达发挥生物学作用。
- 尤昊黄强刘臣海谢放朱凯
- 关键词：胆管癌MIRNA-21增殖凋亡MASPIN
- γ-氨基丁酸抑制胆管癌细胞株QBC939生长的分子机制实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨1-氨基丁酸（GABA）抑制胆管癌细胞株QBC939增殖及凋亡的分子机制。方法分别以GABA、GABA＋荷包牡丹碱（A受体拮抗剂）、GABAphaelon（B受体拮抗剂）孵育胆管癌细胞株QBC93948h，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖活性，AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡，Westernblot法检测信号转导和转录活化因子3（STAT3）、磷酸化STAT3（p-STAT3）蛋白的表达。构建人胆管癌裸鼠皮下种植瘤模型，随机分为对照组和GABA治疗组，用药5周后观察裸鼠体重和肿瘤体积，采用免疫组化及Westernblot法检测种植瘤p-STAT3蛋白的表达。结果M，rr法及流式细胞术检测结果显示phaelon能有效拮抗GABA所导致的增殖抑制（15．30％±0．80％比2．66％±0．74％，t=23．15，P=0．00）和凋亡效应（23．15％±0．21％比4．30％±0．69％，t=52．40，P=0．00），而荷包牡丹碱无此效应。Westernblot法检测结果显示，STAT3、p-STAT3蛋白在QBC939中均表达，GABA可明显下调p-STAT3蛋白的表达（0．77±0．00比0．45±0．ol，t=63．14，P=0．00）且此效应可被phaclofn部分拈抗（0．45±0．01比0．76±0．01，t=56．25，P=0．00）；与对照组比较，治疗组的种植瘤体积明显缩小[（0．62±0．03）cm3比（0．34±0．03）cm3，t=13．45，P=0．00]，p-STAT3蛋白的表达亦下降。结论GABA抑制胆管癌细胞株QBC939的生长是通过GABA。受体介导的，下调p-STAT3蛋白的表达可能是其抗肿瘤的作用机制之一。
- 朱成林黄强刘臣海谢放朱凯
- 关键词：胆管肿瘤STAT3转录因子
