李军锋 作品数:38 被引量:44 H指数:4 供职机构: 军事医学科学院微生物流行病研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
高表达CD81的Huh7细胞株对提高HCV病毒感染效率的研究 被引量:1 2010年 目的建立具有高感染性的丙型肝炎病毒(HCV)的体外细胞株。方法构建高表达CD81的Huh7细胞株。将HCV质粒(JFH-1,2a)体外转录成RNA,电转染到Huh7和CD81-Huh7细胞中,实时定量PCR法检测两组细胞和培养上清液中病毒载量,间接免疫荧光法检测细胞中HCV核心蛋白表达。收集电转后细胞上清液重新感染两组细胞,检测细胞中病毒RNA表达。结果 CD81-Huh7电转后,细胞和上清液中病毒RNA水平均明显高于Huh71-2log。其被感染的效率也高于Huh7。结论成功建立一株能够高表达感染性HCV病毒颗粒的细胞株CD81-Huh7。 杨硕 徐珩 顾娜 冯丹丹 李宁 李军锋 童贻刚 周育森 娄金丽 闾军关键词:丙型肝炎病毒 CD81 HUH7细胞 肝炎病毒感染相关microRNA调控作用的研究进展 被引量:2 2010年 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)和丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是导致肝硬化和肝细胞癌的高危险因素.microRNA(miRNA)在转录后水平调控基因表达,参与多种生物学进程的调控.近期研究表明,miRNA在肝炎病毒的复制、基因表达和致病性等方面都起到了重要的作用,基于miRNA的药物研发为抗肝炎病毒的治疗带来新的曙光.本文对肝炎病毒相关miRNA的最新研究进展进行了综述. 鲍春旸 李军锋 周育森关键词:乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 MICRORNA 抗肝癌活性单克隆抗体及其应用 本发明公开了一种抗肝癌活性单克隆抗体及其应用。该单克隆抗体,是可以与GPC3抗原表位特异性结合的单克隆抗体;所述GPC3抗原表位的氨基酸序列为自GenBank accession Number为AAA98132.1的氨基... 周育森 李军锋 张慧娜 于虹 寇志华 陈万荣文献传递 可调控小鼠尿激酶原激活剂真核表达载体的构建及其在Huh7细胞中的表达 2009年 目的:建立基于Tet-on系统的可调控真核细胞表达小鼠尿激酶原激活剂(uPA)的诱导表达系统。方法:提取C57小鼠肾组织总RNA,RT-PCR扩增uPAcDNA序列;提取基因组DNA,扩增uPA编码区后最后一个外显子序列,构建pTRE2-uPAcDNA-700载体,将其与pTet-on瞬时共转染Huh7细胞系,24h后用强力霉素诱导表达,诱导后36h分别收集细胞和培养上清(诱导组),提取细胞总RNA并进行细胞uPA转录水平的检测;采用溶圈法对细胞分泌至培养上清中uPA的生物活性进行检测,同时以转染但未诱导Hun7(未诱导组)和正常培养Huh7(正常对照组)细胞及培养上清作为对照。结果:与未诱导组和正常对照组相比较,仅诱导组在转录水平上扩增出目的条带;溶圈法证实转染的细胞不仅表达uPA,而且表达的蛋白具有一定的生物活性。结论:构建了可调控的uPA真核诱导表达系统,为进一步制备可调控肝细胞表达uPA转基因小鼠及进一步揭示uPA肝损伤机理奠定了基础。 孙世惠 郭燕菊 李军锋 周小军 于虹 童贻刚 周育森关键词:真核表达系统 一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用 本发明公开了一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用。HNF1α的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。HNF1α能够抑制肝细胞分泌表达s抗原(HBsAg),e抗原(HBeAg)以及降低HBV DNA载量,HNF1α... 周育森 李军锋 代晓朋 张伟 孙世惠 寇志华 赵光宇 于虹 郭彦文献传递 重组人血清白蛋白-干扰素α-2b 融合蛋白体外抗乙型肝炎病毒活性评价 被引量:9 2014年 目的检测重组人血清白蛋白-干扰素α-2b融合蛋白(HSA-IFNα-2b)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法构建含1.6倍HBV基因组及绿色荧光蛋白的重组腺病毒(AdGFP-HBV),感染人肝细胞系HepG2细胞,构建HBV复制细胞模型;ELISA法检测HBV乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)表达;MTT法检测HSA-IFNα-2b对HepG2细胞的毒性作用;定量PCR法检测细胞内HBV RNA的相对表达以及细胞上清中HBV DNA绝对表达水平;双报告基因法检测HSA-IFNα-2b对HBV增强子Ⅰ活性的影响。结果 AdGFP-HBV感染HepG2细胞后可以复制表达HBV。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1加入AdGFP-HBV感染的HepG2细胞,使HBsAg表达降低51.32%(P<0.01),HBeAg降低50.26%(P<0.01),而相同浓度的HSA-IFNα-2b并不抑制细胞的增殖。随HSA-IFNα-2b浓度增加,其对HBsAg表达的抑制作用逐渐升高,HSA-IFNα-2b对HBsAg表达的抑制率(Y)与其浓度(X)的回归方程是Y=21.11 lgX+11.91(r2=0.954),IC50为63.76 kU·L-1。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使细胞中HBV RNA下降52.83%(P<0.01),培养上清中HBV DNA降低53.07%(P<0.01)。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使HBV增强子Ⅰ活性下降40.04%(P<0.01)。结论构建了可用于药物评价的HBV复制细胞模型,HSA-IFNα-2b体外具有抗HBV活性。 张伟 张伟 代晓朋 武福军 祁碧玉 刘志敏 刘志敏 李军锋关键词:乙型肝炎病毒 血清白蛋白 干扰素Α-2B 融合蛋白 LETMD1单克隆抗体的鉴定及其在肝细胞癌临床诊断研究中的初步应用 2012年 目的:对制备的LETMD1-C末端单克隆抗体进行免疫特性鉴定,并将其应用于肝细胞癌的临床诊断研究。方法:使用ELISA,细胞免疫荧光及Western blot等免疫学技术对所制备的单克隆抗体进行免疫特性鉴定;以鉴定的抗体为工具,检测肝癌组织中LETMD1编码产物表达情况。结果:免疫学鉴定结果验证了制备的单克隆抗体具有较高的使用效价和良好的特异性。检测肝组织标本中LETMD1编码产物表达情况,发现其在正常组织中不表达,在肝癌组织表达明显高于癌旁组织。结论:制备了抗-LETMD1-C末端的单克隆抗体,经鉴定具有较高的效价和良好的特异性,可以应用于LETMD1癌基因的功能研究和肝细胞癌的临床诊断研究,为深入研究LETMD1蛋白的生物学功能和建立新的肝细胞癌早期诊断方法奠定了可靠基础。 胡冬 李军锋 于虹 陈万荣 周育森关键词:单克隆抗体 肝细胞癌 Glypican-3作为检测肝细胞癌新标志物的研究进展 被引量:7 2007年 吴明健 李军锋 周育森关键词:GPC3 肿瘤标记物 肝细胞癌 一种HIV‑1多表位重组蛋白及其编码基因与应用 本发明公开了一种HIV‑1多表位重组蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的蛋白是如下a)或b)或c):a)由序列1的第13‑164位所示的氨基酸序列组成的蛋白质;b)由序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质;c)将a)或b)... 周育森 寇志华 杨裔 郭彦 于虹 孙世惠 赵光宇 李军锋文献传递 一种鉴定miRNA靶基因的试剂盒及其应用 本发明公开了一种鉴定miRNA靶基因的试剂盒及其应用。本发明报告载体在鉴定miRNA靶基因和/或检测miRNA表达中的应用;试剂盒在鉴定miRNA靶基因和/或检测miRNA表达中的应用;载体在鉴定miRNA靶基因和/或检... 李军锋 周育森 鲍春旸 于虹 郭彦文献传递