曲东京
- 作品数：7 被引量：26H指数：3
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 不同启动子驱动下转基因盐藻外源基因的稳定表达被引量：13
- 2007年
- 为了探讨外源性与内源性启动子对转基因盐藻外源基因表达的影响,利用编码草丁膦乙酰转移酶的bar基因作为筛选标记,将含外源性启动子CMV35S的表达载体CMV35S-bar(G12)和含内源双拷贝碳酸酐酶启动子DCA1的表达载体DCA1-bar(D-B)分别转化盐藻,筛选稳定转化株后,观察在不同启动子驱动下外源基因的表达情况及对转基因盐藻生长的影响。通过电击法分别将表达载体G12和D-B转化盐藻,经草丁膦(PPT)筛选后,各得到了3株PPT抗性藻株,经PCR及测序分析证实外源基因bar已经整合到盐藻的基因组中,半定量RT-PCR结果显示,在内源性启动子DCA1驱动下,bar基因的表达强度明显高于在外源性启动子驱动下bar的表达,并且D-B转化株的bar基因表达在盐诱导下其表达明显提高,而G12转化株中bar基因的表达对盐诱导无反应。Southern blot分析显示,外源基因的拷贝数与不同启动子间无相关性。转化株的生长特性分析显示,D-B转化株的生长速度明显高于G12转化株。结果表明,内源诱导型启动子在驱动转基因盐藻外源基因的高效稳定表达中比外源组成型启动子更具有优势。
- 李杰曲东京刘玲玲冯书营薛乐勋
- 关键词：启动子
- 一种杜氏盐藻叶绿体转化载体的构建方法
- 一种杜氏盐藻叶绿体转化载体的构建，具体是以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN、chlB或者chlL基因为同源片段，以氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）和除草剂草丁膦（PPT）的抗性基因bar为筛选标记，并以atpA启动子...
- 薛乐勋潘卫东侯桂琴李杰曲东京贾岩龙
- 文献传递
- 杜氏盐藻高纯度叶绿体DNA的提取被引量：2
- 2008年
- 目的:分离大量完整的杜氏盐藻叶绿体,提取高纯度的叶绿体DNA(cpDNA)。方法:取对数生长后期的杜氏盐藻细胞进行高压破碎,利用差速离心和蔗糖密度梯度离心得到完整的叶绿体。采用优化的SDS-蛋白酶K-酚/氯仿/异戊醇方案抽提cpDNA,并经10 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果:蔗糖密度梯度离心结果表明分离到了大量的叶绿体,相差显微镜及电镜观察证实所得叶绿体的完整性。紫外分光光度仪检测3个批次cpDNA的浓度蛋白酶为(2.21±0.02)mg/L,A(260 nm)/A(280 nm)为(1.772±0.012)。结论:获得了高纯度的杜氏盐藻cpDNA,为进行叶绿体的转化研究奠定了实验基础。
- 曲东京李杰潘卫东贾彦龙薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻叶绿体DNA提取
- SOEing法构建EGFP真核表达载体及其在杜氏盐藻中的表达被引量：1
- 2007年
- 通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOEing)构建含有杜氏盐藻(Dunaliella salina)硝酸盐还原酶(NR)基因5′-上游序列(Pnr)and 3′-端序列(Tnr)的EGFP真核表达载体,并将其转化杜氏盐藻。利用改进的SOEing法,将杜氏盐藻NR基因Pnr与报告基因EGFP cDNA融合,并与pEGM-7zf克隆载体连接,顺序将盐藻NR基因Tnr序列与融合片段相连,构建含Pnr-EGFP-Tnr表达盒的盐藻真核表达载体p7NET。电击法转化杜氏盐藻,在盐藻转化株中观察到了EGFP的瞬时表达。此研究为转基因杜氏盐藻研究和成功建立杜氏盐藻生物反应器奠定了实验基础。
- 李杰闫红霞曲东京刘红涛鲁照明薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻真核表达载体
- 杜氏盐藻完整叶绿体的分离及其蛋白提取被引量：7
- 2008年
- 应用高压破碎及蔗糖密度梯度离心的方法,分离出杜氏盐藻的完整叶绿体,随后用冻融法和研磨法分别提取叶绿体蛋白,并通过蛋白定量和SDS-PAGE凝胶电泳对两种蛋白提取方法进行比较,确立了一套适用于杜氏盐藻叶绿体分离和蛋白提取、定量以及电泳的方法。结果表明:用高压破碎结合蔗糖密度梯度离心的方法能够获得完整且较纯的盐藻细胞叶绿体;SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,冻融法提取叶绿体蛋白效率高,电泳条带清晰,蛋白数量较多,蛋白齐全。为下一步在亚细胞水平进行杜氏盐藻耐盐机制的蛋白组学研究奠定了基础。
- 贾岩龙柴玉荣曲东京刘红涛薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻叶绿体蛋白提取
- 杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列驱动bar基因的表达
- 2008年
- 目的:探讨杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列(Pnr)是否可以驱动外源基因在杜氏盐藻中的表达。方法:利用改进的重叠区扩增基因拼接法(SOEing),将杜氏盐藻NR基因5′上游序列(Pnr)与除草剂抗性基因bar融合。同时将NR基因3′端序列(Tnr)与克隆载体pEGM-7zf连接,构成中间载体pEGM-7zf-Tnr。最后将融合片段Pnr-Tnr与中间载体连接,构建含Pnr-bar-Tnr表达盒的盐藻真核表达载体p7NBT。电击法转化杜氏盐藻,通过草丁膦培养筛选转化藻株后对其进行分析。结果:转化藻株总RNA的RT-PCR结果扩增出与bar基因序列完全一致的目的片段。结论:杜氏盐藻NR基因Pnr能够驱动外源基因bar的转录。
- 闫红霞李杰王莉莉冯英才曲东京薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻硝酸还原酶BAR基因
- 杜氏盐藻完整叶绿体的分离和叶绿体转化体系的构建
- 随着转基因研究的不断深入，人们将越来越多的研究兴趣集中在生长迅速，培养简单的单细胞绿藻上。利用单细胞绿藻进行遗传转化有其优越性，与传统的微生物发酵、动物细胞和转基因动物等转化系统相比，它不需要昂贵的设备和严格的培养条件，...
- 曲东京
- 关键词：杜氏盐藻叶绿体叶绿体转化
- 文献传递
