牛延萍 作品数:4 被引量:9 H指数:2 供职机构: 南京农业大学动物医学院 更多>> 发文基金: 江苏高校优势学科建设工程资助项目 国家现代农业产业技术体系建设项目 江苏省科技支撑计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
捻转血矛线虫ES24抗原基因的克隆与表达特性分析 2012年 根据捻转血矛线虫ES24抗原基因序列(U64793.1)设计1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出大小约为670 bp的DNA片段。将该DNA片段克隆到pMD18-T载体后进行序列测定和分析,结果发现该基因与GenBank中已知的捻转血矛线虫24 ku ES抗原基因的相似性达96%~98%。将该基因的开放阅读框插入pET28a(+)载体中,获得原核表达质粒pET28/ES24,并转化大肠杆菌BL21。重组细菌用IPTG诱导,经SDS-PAGE分析,结果表明该基因获得了表达,重组蛋白分子量大小约为25 ku。用实时荧光定量PCR技术对该基因在捻转血矛线虫的虫卵、第3期幼虫、雌虫和雄虫等不同发育阶段、不同性别虫体内的表达情况进行了定量分析,结果显示ES24基因在雄性成虫中表达量最高,雌虫和虫卵其次,在第3期幼虫中表达最低。 牛延萍 高丽丽 宋小凯 徐立新 李祥瑞 严若峰关键词:捻转血矛线虫 排泄分泌抗原 实时荧光定量PCR 捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶对山羊PBMCs免疫功能的影响 被引量:2 2018年 旨在探究捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶(Hc58)对山羊外周血单个核细胞(PBMCs)免疫功能的影响。采集健康山羊血液,分离出PBMCs和单核细胞,分别以质量浓度为0、10、20、40μg·mL-1的重组蛋白Hc58与细胞体外共培养,采用硝酸还原酶法测定不同浓度Hc58对单核细胞分泌一氧化氮(NO)的影响;采用流式细胞术检测重组蛋白对单核细胞吞噬FITC-dextran能力的影响;采用荧光定量PCR检测PBMCs中IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ和TGF-β的mRNA转录情况;采用迁移小室研究重组蛋白对PBMCs迁移的影响;采用流式细胞术检测不同浓度Hc58对PBMCs凋亡的影响。研究表明重组蛋白Hc58显著促进山羊单核细胞分泌NO;并且增强了山羊单核细胞的吞噬能力;Hc58显著上调IL-2、IL-4、IL-17、IFN-γ的表达量;Hc58显著提高山羊PBMCs凋亡比例,也使PBMCs迁移率增加。捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶能通过多种途径影响宿主PBMCs发挥免疫作用。 胡孟娟 周丽娜 牛延萍 徐立新 宋小凯 李祥瑞 严若峰关键词:捻转血矛线虫 半胱氨酸蛋白酶 山羊 外周血单个核细胞 流式细胞术 捻转血矛线虫过氧化物酶基因的克隆和5种蛋白的抗原特性分析 捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)属毛圆科(Tdchostrongylidae)血矛属(Haemonchus)线虫,是山羊等反刍动物的主要胃肠道寄生虫之一,患病动物通常表现为贫血、消瘦甚至死亡,造成... 牛延萍关键词:捻转血矛线虫 过氧化物酶 基因克隆 抗原特性 荧光定量PCR 免疫组化 乳化剂对异育银鲫消化酶及血清指标的影响 被引量:4 2011年 选取8000尾异育银鲫,随机分为2个处理(对照组和试验组),每处理2重复,每重复2000尾,分别饲喂含乳化剂0%和0.05%的基础日粮,试验期为62 d。试验结果表明,饲养31 d后,添加乳化剂使异育银鲫的肝胰脏胰蛋白酶的活性显著提高(P<0.01),肠道胰蛋白酶活性也表现出升高的趋势(P=0.08);血清中总蛋白、球蛋白、葡萄糖和甘油三酯的含量也显著提高(P<0.01)。饲养62 d后,添加乳化剂使异育银鲫肠道淀粉酶活性显著高于对照组(P<0.05);血清中葡萄糖和甘油三酯的含量显著高于对照组(P<0.01)。试验结果表明,饲料中添加乳化剂能够提高异育银鲫的肠道和肝胰脏消化酶的活性,促进脂肪代谢和蛋白质沉积。 侯晓莹 李忠平 侯艳君 朱立麒 牛延萍 谢志华 陈敏 周岩民关键词:乳化剂 消化酶 血清生化指标 异育银鲫