王心正
- 作品数：11 被引量：31H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院国家生物医学分析中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重大科学仪器设备开发专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 敲低GNL3抑制脑胶质瘤干细胞增殖和自我更新
- 2017年
- 肿瘤干细胞是一小群特异的肿瘤细胞,被认为是肿瘤发生,耐药和复发的主要原因。GNL3(guanine nucleotide-binding protein-like 3)是MMR1/HSR1 GTP结合蛋白家族成员,在干细胞增殖中发挥重要作用。实验室通过质谱筛选,发现GNL3蛋白在脑胶质瘤干细胞(glioma stem cell,GSC)中特异性高表达。目前关于GNL3在脑胶质瘤干细胞中的功能及其作用机制未见文献报道。为了研究GNL3在GSC中的功能,利用慢病毒感染细胞体系,在GSC中应用3个不同的靶序列对GNL3基因的表达进行稳定干涉;利用Western Blot对GNL3的干涉效果进行检测。实验结果表明,在稳定敲低GNL3表达的GSC中,胶质瘤干细胞的细胞活力和肿瘤细胞球(tumor sphere)的形成能力明显受到抑制,表明GNL3蛋白对GSC的增殖能力及自我更新能力具有重要调控,提示GNL3在胶质母细胞瘤的肿瘤发生过程中发挥一定作用。
- 黄浩浩王心正郭赛赛张学敏满江红
- 关键词：脑胶质瘤干细胞细胞增殖慢病毒
- 转Bt基因大米与相应亲本大米差异蛋白质组学研究
- 目的：利用差异蛋白质组学及生物信息学等技术方法,探讨外源Bt基因的导入对大米表达蛋白质组的影响,深化转基因大米在蛋白质组学方面的研究.
方法：在转基因大米'华恢1号'和亲本大米'明恢63'样品中提取大米总蛋白,...
- 程娟献夏晴桑志红毛劫王心正董方霆何昆
- 关键词：转基因大米蛋白质生物信息
- 文献传递
- 全柱成像毛细管等电聚焦电泳测定艾塞那肽等电点被引量：2
- 2014年
- 目的:采用新一代全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术(CIEF-WCID)测定艾塞那肽等电点。方法:采用互补性金属氧化物半导体成像技术对样品等电聚焦过程进行实时记录,根据适宜的marker计算得到艾塞那肽的等电点,并对方法的准确度与重复性进行考察。结果:测得艾塞那肽等电点为5.46,与凝胶电泳结果基本一致,相对标准偏差为0.11%。CIEF-WCID方法快速准确,相对误差小于2.5%,重复性良好。结论:CIEF-WCID作为一种新的技术手段可用于艾塞那肽等电点的分析,方法快速、准确、重复性好,可为多肽的质量控制提供一种可靠的分析方法。
- 刘洁欣方均建王心正李海静程建华吴胜明董方霆
- 关键词：等电点
- 基于质谱检测转基因生物外源蛋白质的消化稳定性
- 2016年
- 基于无标记定量质谱检测技术建立了一种新的转基因生物外源蛋白质消化稳定性评价方法。以牛β-乳球蛋白、牛血清白蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂为标准蛋白质,经模拟人体胃/肠消化液消化后进行凝胶电泳分离,切取目标蛋白质条带进行酶切,提取肽段进行纳升液相色谱-电喷雾串联质谱分析。基于Mascot数据库检索鉴定目标蛋白质。计算各消化时间点蛋白质匹配肽段数与消化前蛋白质匹配肽段数的比值,当比值≤0.50时判断为目标蛋白质在该时间段内已消化。将此方法应用于转基因抗虫水稻"华恢1号"外源蛋白Cry1Ab/1Ac的消化稳定性分析,结果显示在模拟胃液中消化2 min时,比值下降到0.50以下,在模拟肠液中消化15 s后比值下降到0.50以下,表明该蛋白在胃/肠消化液中具有消化不稳定性。
- 毛劼孙兴程娟献王心正赵永强王红霞何昆夏晴
- 关键词：转基因生物质谱
- 小鼠干扰素γ受体β基因启动子荧光报告载体构建及转录活性分析被引量：1
- 2019年
- 目的克隆小鼠干扰素γ受体β(Ifngr2)基因启动子,并应用双荧光素酶报告系统对其进行功能分析。方法首先应用欧洲启动子在线数据库(EPD)获得小鼠Ifngr2基因的启动子区域,包含转录起始位点在内的-1344～+48的DNA序列。然后以小鼠MEF细胞基因组DNA为模板,利用PCR扩增调取该序列,并进一步插入pGL4.19-luc2CP荧光素酶报告载体。通过PCR扩增获得启动子系列截短体并分别插入pGL4.19-luc2CP载体,共获得包含6个不同长度启动子序列的荧光素酶报告载体。进一步通过双荧光报告实验检测不同截短体对Ifngr2基因转录活性影响,确定其影响转录活性的关键区域。通过点突变探究潜在转录因子对Ifngr2基因转录的影响。结果成功构建小鼠Ifngr2基因启动子荧光素酶报告载体,获得有转录活性的启动子报告基因载体。启动子系列截短分析显示,-132～-97和-1059～-727包含启动子重要元件。生物信息学分析发现,在-132～-97区域内存在潜在的NF-κB结合位点,进而通过点突变实验得到验证。结论通过构建小鼠Ifngr2基因启动子报告载体并对Ifngr2启动子进行功能分析,发现小鼠Ifngr2基因启动子中的转录因子NF-κB结合区域,提示NF-κB在Ifngr2基因表达调控中起重要作用。
- 王棋王心正韩秋影樊浩李亭亭巩伟丽周涛李卫华
- 关键词：干扰素Γ受体启动子转录因子转录调控
- 肝移植前后人血清中蛋白质双向电泳图谱比较被引量：2
- 2013年
- 目的研究比较肝移植前后人血清蛋白质双向电泳图谱,探索人肝脏移植后免疫排斥和耐受反应的机制。方法用Aurum Serum Protein Mini Kit对血清预处理,进行双向凝胶电泳(2-DE)分离。Image Master 2D Platinum分析凝胶图谱。结果建立了移植前和移植后24 h、10 d、30 d的人血清双向电泳图谱。与移植前相比,共筛选出明显表达差异的蛋白质斑点15个,其中在移植后蛋白斑点表达上调的14个,表达下调的1个。结论初步建立了肝移植后的人血清蛋白质组学分析方法,差异表达蛋白质点的发现为深入研究肝移植术后免疫耐受和免疫排斥的机制提供了线索。
- 李彦梁艳刘煜王红王心正王鸿丽
- 关键词：肝移植免疫排斥免疫耐受血清双向电泳
- 转Bt基因大米与相应亲本大米差异蛋白质组学研究被引量：1
- 2016年
- 目的利用差异蛋白质组学及生物信息学等技术方法,探讨外源Bt基因的导入对大米表达蛋白质组的影响,深化转基因大米在蛋白质组学方面的研究。方法在转基因大米"华恢1号"和亲本大米"明恢63"样品中提取大米总蛋白,通过二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)实验方法,得到相应的蛋白质组2D-PAGE谱,再选择差异明显的蛋白质点进行质谱鉴定及生物信息学分析。结果对转Bt(cry1Ab/1Ac)基因大米和亲本大米2D-PAGE图谱的蛋白质点进行了对比匹配,识别出明显的差异蛋白质点28个,以亲本大米为参照,转Bt基因大米相对高表达的18个,相对低表达的10个;选择转基因大米凝胶上的差异蛋白质点进行了质谱鉴定和生物信息学检索,发现差异蛋白质主要参与能量代谢,蛋白质合成、氧化还原和应激响应等生物过程。结论转Bt基因"华恢1号"及其亲本大米"明恢63"表达的蛋白质组存在一定差异,但未发现这些差异蛋白质具有抗营养性和致敏性,也未发现新蛋白和毒蛋白的表达。
- 程娟献夏晴桑志红毛劼王心正董方霆何昆
- 关键词：转基因大米差异蛋白质组学质谱鉴定
- HMOX1在低氧条件下对胶质瘤干细胞的作用被引量：1
- 2017年
- HMOX1(Heme Oxygenase 1)属于血红素加氧酶家族,作为血红素分解代谢中的必须酶,在恶性胶质瘤中高表达。脑胶质瘤干细胞(Glioma Stem Cell,GSC)是胶质瘤中的一小群肿瘤细胞,具有无限增殖、自我更新、多向分化的能力,被认为是肿瘤发生、复发、转移的根源。本实验通过质谱筛选,发现HMOX1特异性在胶质瘤干细胞中被低氧诱导高表达。目前关于HMOX1蛋白与缺氧环境下GSC的功能相关性未见文献报道。为了研究HMOX1是否在低氧时对GSC有调控作用,我们用慢病毒感染体系在GSC中敲低HMOX1表达,接着对细胞进行1%O_2低氧培养,用Western Blot检测基因干涉效果,用Tumor Sphere形成实验观察GSC细胞表型。实验结果表明,在低氧条件下干涉GSC中HMOX1基因的表达对GSC的生长及存活有明显的抑制。综上所述,HMOX1在GSC中特异性被低氧诱导高表达,且对GSC的生长存活具有调控作用,提示HMOX1有可能是GSC在低氧微环境中的重要调控因子。
- 宋佳伦王心正吴瑾李爱玲满江红
- 关键词：胶质瘤干细胞低氧TUMORSPHERE
- 基于化学蛋白组技术的激酶组研究方法建立及初步应用
- 本研究首先以Hela细胞为模型，以SU6668和Purvalanol B为代表性小分子激酶抑制剂，建立并优化了小分子抑制剂和固相载体偶联及亲和富集蛋白的方法，然后用已建立的方法初步进行了肝癌及癌旁组织比较激酶组研究，共鉴...
- 毛劼王心正刘锋宋健王红霞
- 关键词：肝癌癌旁组织信号通路
- 文献传递
- 应用UPLC-QTOF-MS/MS技术测定肝细胞癌患者血清代谢组被引量：4
- 2020年
- 目的通过比较肝细胞癌(HCC)和肝硬化(LC)患者血清代谢物,研究HCC代谢谱变化,为寻找HCC早期诊断标志物及治疗新靶点和策略提供依据。方法收集HCC和LC患者血清各50例,应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)对血清代谢物进行鉴定和定量。液相色谱分离采用反相色谱(RPLC)和亲水色谱(HILIC)2种模式,质谱采集包括正、负2种离子化方式。应用Progenesis QI软件进行数据处理,应用EZinfo软件进行主成分分析和正交偏最小二乘判别分析等多元统计分析并筛选差异代谢物。代谢物鉴定通过检索人代谢组数据库(HMDB)和Metlin数据库实现。应用MetaboAnalyst 4.0对差异代谢物进行代谢通路分析。结果应用UPLC-QTOF-MS/MS技术,共检测到87610个特征代谢峰,鉴定出7848种代谢物。通过P<0.05,变量重要性投影指标(VIP)值≥1及HCC与LC比较的差异倍数≥1.5或≤0.67等3个条件筛选出差异代谢物438个,主要包括磷脂、胆汁酸、游离脂肪酸、小肽和氨基酸等,涉及12个代谢通路的变化。结论与LC患者比较,HCC患者的血清代谢组发生显著变化,共有438种差异代谢物参与12个代谢通路的变化,这有助于发现早期诊断标志物和药物靶标。其中50个差异代谢物具有较高的临床诊断价值,值得进一步验证。另外,本研究近8000个代谢物的鉴定表明,所采用的RPLC结合HILIC分离的UPLC-QTOF-MS/MS技术显著提高了代谢物的鉴定覆盖率,可广泛应用于多领域的代谢组学研究。
- 王淑凤柏兆方杨馨王心正何昆王红霞
- 关键词：肝癌血清
