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三种方法测定蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD_2)的分子量: 2007年; 目的用不同方法测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶分子量。方法采用凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD2)的分子量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其分子量分别为62.16kD、62.08kD和69.075kD。结论EWD2为单亚基脱氧核糖核酸酶,其分子量在60-70kD。; 姚建强王晓媛罗佳李方张建林杨利军牛勃; 关键词：色谱法蚯蚓脱氧核糖核酸酶分子量

蚯蚓新型脱氧核糖核酸酶的相对分子质量测定被引量：1: 2007年; 目的测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。方法采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳法(SDS-PAGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)3种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其相对分子质量分别为55080、58270和63460。结论凝胶过滤层析法和SDS-PAGE法可以常规粗略测定蛋白的相对分子质量,质谱法可以比较准确测定蛋白的相对分子质量,EWD3为单亚基蛋白,其相对分子质量约在55000￣65000之间。; 罗佳姚建强王晓媛李方杨利军王建华牛勃; 关键词：地龙分子量

地龙生物祛痰药物的研究: 本研究对从地龙(蚯蚓)组织中提取的一种以脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性成分为主的多组分生物祛痰药物进行了有关制备工艺、生物活性、质量标准、主要药效学及毒理学等方面的研究，科学、较系统全面地论证了它作为一种新型的，原料来源...; 罗佳; 关键词：蚯蚓 DNA酶药效学毒理学; 文献传递

重组Echistatin融合基因工程菌高密度发酵工艺优化被引量：4: 2006年; 目的优化大肠杆菌表达重组蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)融合基因工程菌的发酵工艺。方法在15L发酵罐内,研究培养基、培养条件和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响,并考察工程菌中重组质粒的遗传稳定性。结果工程菌在pH7·4的2×YT培养基中诱导4h,菌体湿重可达75g/L,目的蛋白表达量约占总蛋白的35%,所构建的重组质粒在BL21宿主菌中传代稳定。结论优化了Ecs融合基因工程菌的发酵和表达条件,为规模化生产奠定了基础。; 杨利军杨涛解军张娟赵志强罗佳牛勃; 关键词：大肠杆菌发酵

研究蚯蚓DNase的干琼脂糖薄膜覆盖法: 2007年; 目的研究蚯蚓脱氧核糖核酸酶(DNase)的测定方法。方法应用干琼脂糖薄膜覆盖法(DAFO)检测蚯蚓DNase。结果DAFO用于蚯蚓DNase的种类、数量的确定,新DNase类的筛选以及DNase活性的测定。结论DAFO是研究脱氧核糖核酸酶的一种重要方法。为蚯蚓DNase及其他DNase的测定提供了可行的实验方法。; 樊慧杰康慧芳罗佳王建华杨利军牛勃; 关键词：地龙酶活性测定

一种赤子爱胜蚓脱氧核糖核酸酶作用机制的研究被引量：3: 2007年; 目的研究赤子爱胜蚓组织中脱氧核糖核酸酶1(EWD1)作用于底物的机制。方法采用ZORBAX-Oligo柱-高效液相色谱法(HPLC)、琼脂糖电泳、紫外分光光度法等分析技术,进行了蚯蚓EWD1对环状、线状DNA、单链DNA的降解中间产物和终产物的观察和分析。结果EWD1对所有形式的DNA底物均有降解作用,对单链DNA的降解产物为较均一的、<18bp的寡核苷酸,并显示EWD1无降解RNA的作用。结论蚯蚓组织中发现的EWD1能够分解多种来源的遗传物质,属于脱氧核糖核酸内切酶。; 康慧芳刘志贞樊慧杰张建林罗佳杨利军牛勃; 关键词：地龙底物

两种RGD模拟肽抗兔血小板聚集活性研究: 2008年; 目的:研究两种RGD模拟肽(NB05和NB06)的抗兔血小板聚集活性。方法:体外检测RGD肽抑制家兔ADP诱导血小板聚集率,计算RGD肽对血小板聚集的抑制率。体内颈动静脉旁路血栓模型检测两种RGD肽对形成血栓湿重的影响。结果:NB05和NB06体外抗家兔血小板聚集的IC50值分别为(33.34±3.58)和(8.69±1.34)μmol.L-1;NB05和NB06均使血栓湿重显著减小(P<0.01),NB06的抗血栓活性较NB05高(P<0.05)。结论:NB05和NB06均具有较强的抗血小板聚集和抗血栓形成活性。; 王国亮王建华罗佳牛勃; 关键词：RGD 血小板聚集血栓形成

赤子爱胜蚓脱氧核糖核酸酶酶动力学研究被引量：1: 2007年; 目的对赤子爱胜蚓中一组新型脱氧核糖核酸酶(EWDs)进行酶动力学研究。方法运用单相酶扩散法(SRED)、紫外分光光度法和林-贝氏(Lineweaver-Burk)作图法。结果EWDs的最适温度均为37℃。EWD1的最适pH为5.2,Km为1.58mg/ml,Vmax为5.36mg·ml-1·min-1;EWD2的最适pH为4.4,Km值是3.95mg/ml,Vmax值为2.87mg·ml-1·min-1;EWD3的最适pH为4.8,Km值是1.52mg/ml,Vmax值为4.89mg·ml-1·min-1。Mn2+和Ca2+是EWDs的抑制剂,Mg2+仅抑制EWD3的活性。结论蚯蚓组织中发现的此组脱氧核糖核酸酶具有特殊的酶学性质,区别于已知的脱氧核糖核酸酶类。; 王晓媛罗佳张建林姚建强于保锋杨利军牛勃

蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质(英文)被引量：2: 2008年; 目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质。方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法。结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%。EDNase的相对分子质量约为63000。Mg2+,Mn2+和Ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性。在pH4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8。该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性。EDNase的等电点为6.20。在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52g/L,Vmax为4.89mg/(mL·min)。该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用。结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶。; 张建林刘志贞王晓媛姚建强罗佳王建华杨利军杨琦牛勃

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罗佳