姚志建
- 作品数：41 被引量：161H指数：8
- 供职机构：国家人类基因组北方研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学机械工程更多>>
- 金黄色葡萄球菌A蛋白基因的克隆及序列分析被引量：1
- 1992年
- 我们构建了金黄色葡萄球菌Cowan1株(CMCC26111)的染色体文库,转化大肠杆菌后筛选出一株protein A的阳性克隆。SDS-PAGE及Western-blot结果显示该克隆株表达的重组protein A的分子量为30 000,较天然protein A的小。该克隆中的protein A基因片段的序列分析表明,它含有天然protein A基因的启动子、信号肽以及至少四个与IgGFc段结合的结构域,而不含天然protein A的胞壁结合区,并发现其中有24个碱基对与Uhlen报告的protein A基因不同,由此导致三个编码的氨基酸发生变化,但这些差异并不影响该重组protein A与IgG Fc段的特异结合。
- 蔡仕英姚志建刘亚霞强伯勤
- 关键词：基因克隆葡萄球菌A蛋白
- 芯片型实验室及基因组研究被引量：1
- 2000年
- 芯片型实验室是 90年代后出现的新领域 ,它与稍早出现的测定型生物芯片相关 ,但其功能已超过测定而包括了分离、分析等各种实验室基本操作。本文以在基因组研究中常用的几种技术 ,从DNA测序、基因型分析和蛋白组研究三个方面 ,探讨了在这些领域中开始出现的芯片型操作元件及它们的现状和潜力。
- 姚志建
- 关键词：DNA测序蛋白组
- 人工构建的新型细菌Fc受体蛋白
- 1993年
- 本文构建了5个基于链球菌G蛋白(SpG)及金黄色葡萄球菌A蛋白(SpA)的新型Fc受体蛋白,它们分别含有1—6个免疫球蛋白Fc段结合区结构域,且在结构形式上亦不同于天然SpG或SpA。在大肠杆菌中,经热诱导它们的表达量占菌体总蛋白的17—30％。免疫双扩散及酶联实验结果表明,这种人工构建的由SpG C3结构域组成的Protein TG(184 AA)比天然SpG能更广谱、更有效地与人、羊、兔等IgG结合,且最佳结合pH也由SpG的pH5变为pH5—8;而由Protein TG与SpA的A,B,C 3个结构域融合的Protein TGA(357 AA)则兼并了SpG及SpA的结合谱。
- 蔡仕英王园园姚志建
- 关键词：基因表达
- Protein G中Fc段结合区的结构分析被引量：2
- 1991年
- 通过对用PCR技术从链球菌染色体中扩增出的Protein G中IgG Fc段结合区基因片段(191bP)的序列分析,我们发现其中有一个碱基与国外文献报道不同,由此导致一个氨基酸发生变化,即该结构域内Ala^(19)→Thr^(19),但这一变化并不影响其与IgG Fc段的结合。同时,我们还制备出一定量的由大肠杆菌表达的该活性多肽纯品,用圆二色谱仪测定了其二级结构组成,并用计算机做了进一步的预测分析,还同Protein A中相关结构域进行了比较,提出了Protein G与IgG Fc段相结合的可能机制。
- 蔡仕英王园园姚志建
- 关键词：PROTEIN-G蛋白
- 高效反相液相色谱测定细菌细胞DNA 中的碱基成份
- 姚志建郭燕捷周方
- 关键词：液体色谱反相色谱核酸碱基微生物检定还原酶
- 重组多肽酶联免疫吸附法检测抗Scl-70抗体的初步应用
- 2006年
- 目的制备人Scl-70抗原207～765位氨基酸片段融合蛋白作为自身抗原,探讨ELISA检测抗Scl-70抗体的敏感性和特异性。方法构建编码Scl-70抗原第207至第765位氨基酸片段的重组体,在宿主菌E.coliBL21(DE3)中表达融合蛋白,经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,免疫印迹法鉴定抗原性,ELISA检测北京协和医院免疫科血清库中系统性硬化(SSc)及部分其他结缔组织病患者血清抗Scl-70抗体。结果重组融合蛋白在宿主菌中获得可溶性表达,免疫印迹法鉴定表明其能与标准抗Scl-70抗体阳性血清反应,而与正常血清、其他抗血清无反应。在36份SSc患者血清中,天然抗原免疫双扩散(DID)法共检出的6份阳性血清用重组多肽ELISA检测有5份呈阳性,30份经天然抗原DID法检测为阴性的血清用重组多肽ELISA检测有3份呈阳性;20份其他结缔组织病患者血清用重组多肽ELISA检测均为阴性。结论重组的207～765位氨基酸片段是Scl-70抗原的主要抗原表位区域,以重组多肽为基质ELISA检测抗Scl-70抗体的敏感性较高,为进一步研究抗体水平与临床病情变化的相关性奠定了基础。
- 陈竹汪国生唐福林姚志建
- 关键词：表位酶联免疫吸附测定
- 分子伴侣HSP70研究进展被引量：23
- 1993年
- 分子伴侣HSP70在原核、真核细胞均已发现,它们具有共同的生化特征,在细胞内各自分布在特定的区域。其主要生物学功能是促进新生多肽链的正确折叠,对于分子重排、解离聚集蛋白和新生多肽的膜运输也具有重要的辅助作用。
- 凌明圣徐明波姚志建
- 关键词：热休克蛋白
- Sa抗原相关蛋白质的研究被引量：7
- 2006年
- 目的研究类风湿关节炎(RA)特异性抗sa抗体识别的Sa抗原,探讨Sa抗原的相关蛋白质。方法从人胎盘组织阴离子交换柱层析法纯化Sa抗原,应用免疫印迹法检测155例各种风湿病患者血清的抗Sa抗体,155例患者中类风湿关节炎71例,强直性脊柱炎11例、银屑病关节炎7例、反应性关节炎7例、幼年特发性关节炎4例、骨性关节炎5例、风湿性多肌痛6例、痛风6例、系统性红斑狼疮7例、干燥综合征10例、炎性肌病8例、混合性结缔组织病4例、白塞病6例、成人Still病3例。切取与免疫印迹法阳性条带相对应的电泳胶内条带,胰蛋白酶胶内酶解,用高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱鉴定目标蛋白质。以大肠杆菌重组表达目标蛋白质作为抗原,以免疫印迹法检测相应抗体。瓜氨酸化修饰重组蛋白质作为抗原,以免疫印迹法检测相应抗体。结果抗Sa抗体表现为相对分子质量为50 000(和)55 000的阳性印迹条带,在155例风湿病中,对RA的诊断敏感性和特异性分别为47．9％和95．2％。质谱鉴定Sa抗原相关蛋白质为波形蛋白(Vimentin)。抗波形蛋白抗体在RA组与其他风湿病组的阳性率差异有统计学意义(P=0．005),对RA的诊断敏感性和特异性分别为36．6％和83．3％,但与抗Sa抗体的一致性差(Kappa=0．316)。抗瓜氨酸化波形蛋白抗体阳性率在RA组较其他风湿病组高(P<0．01),对RA的诊断敏感性和特异性分别为49．3％和86．9％,且与抗Sa抗体的一致性较高(Kappa=0．746)。结论运用质谱技术鉴定的Sa抗原相关蛋白质波形蛋白,瓜氡酸化修饰后的抗原性与Sa抗原相仿,提示瓜氨酸化波形蛋白与Sa抗原密切相关。
- 陈华姚志建唐福林
- 关键词：类风湿关节炎抗原波形蛋白质谱
- 电泳的原理、应用及进展(下)被引量：3
- 1992年
- 三、核酸电泳 核酸(包括DNA和RNA)是一类带负电荷的生物大分子,在电场作用下可由负极向正极移动,因此可用电泳的方法进行分离、鉴定和纯化。核酸电泳根据所用凝胶介质的不同可以分两类,即琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。琼脂糖电泳几乎都在水平板上进行,操作简单,快速有效;聚丙烯酰胺电泳多在垂直板中进行,主要用于某些特殊需要,如DNA序列分析电泳、寡核苷酸的分离鉴定。根据外加电场的不同,核酸电泳又分为恒定电场的常规电泳和脉冲场电泳。
- 蔡仕英姚志建
- 关键词：核酸电泳
- 蛋白电泳铜染色后胶中生物活性IL-2的回收
- 1991年
- SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)已广泛用于蛋白质样品组分分析。通常的方法染色后蛋白质和肽即固定在凝胶上,尽管凝胶用SDS平衡后可对蛋白质进行洗脱或转移,但由于回收率低、耗时,同时回收的蛋白只能保存其抗原性而生物活性丧失,因而限制了SDS-PAGE在蛋白质回收领域中的应用。
- 徐明波姚志建
- 关键词：白细胞介素2铜染色蛋白电泳
