师永霞
- 作品数：92 被引量：326H指数：11
- 供职机构：广东检验检疫技术中心更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目广东出入境检验检疫局科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种检测埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒和裂谷热病毒的多重PCR试剂盒及其引物
- 本发明提供了一种同时检测埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒和裂谷热病毒的多重荧光PCR检测试剂盒及其引物。本发明提供的试剂盒包括RT-PCR缓冲液、RT-PCR酶混合液等常规试剂外，还包括四种病毒的引物和探针，如SEQ ...
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- 文献传递
- 一种检测黄热病病毒的荧光定量RT－PCR试剂盒及其检测方法和应用
- 本发明公开了一种检测黄热病病毒的荧光定量RT－PCR试剂盒，包括RT－PCR缓冲液，逆转录反应酶混合物和DEPC水，正向引物5’－GTTAGAGRAGAGCCTCCAGGGAA－3’；反向引物5’－AGCAAACTGTG...
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- 文献传递
- 6种虫媒病毒微孔膜芯片检测方法的研制与应用被引量：1
- 2012年
- 目的研制能同时检测6种口岸重要虫媒病毒的微孔膜芯片。方法针对包括1～4型登革病毒、乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒和裂谷热病毒等6种虫媒病毒,选择合适的保守基因,设计特异性的PCR引物(5'端标记生物素)和检测探针,通过参数优化建立单管多重RT-PCR扩增体系;然后按每个阵列5×5的格式,并确保点样区域为96孔板的微孔大小,将探针喷点到处理后的尼龙膜上,通过条件优化建立稳定的PCR产物与固化探针的杂交体系;采用碱性磷酸酯酶标记链亲和素和化学显色底物NBT/BCIP来检测特异性的PCR杂交产物。选取2012年1—6月份从口岸输入的疑似登革热发热病例的临床血清标本,提取RNA后,直接采用本研究建立的微孔膜芯片进行未知虫媒病毒的快速检测。结果用1～4型登革病毒、乙型脑炎病毒、西尼罗病毒和基孔肯雅病毒等7种毒株、1种黄热病毒疫苗株和1种裂谷热病毒核酸体外转录的RNA模板验证已建立的微孔膜芯片,获得比较特异和稳定的实验结果。应用该研究建立的方法,从3份疑似登革热发热病例的临床血清标本中检出了1例登革1型病毒和2例登革2型病毒,与实时荧光PCR检测结果相符。结论该研究建立的6种虫媒病毒微孔膜芯片检测方法,具有快速、准确、自动化和高通量等特点,为快速应对口岸输入性发热病例提供了非常有价值的检测手段,也为进一步开发更多指标的病原体检测方法提供良好的示范作用。
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- 关键词：虫媒病毒
- 新疆出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究
- 2012年
- 目的:建立新疆出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。方法:分析新疆出血热病毒核酸S片段序列的保守性,设计新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR引物和探针。以体外转录后的RNA作为阳性对照模板,摸索出实时荧光RT-PCR检测的最佳引物浓度、探针浓度和反应体系条件,并进行灵敏度和特异性分析。结果:建立的新疆出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法最佳反应体系为:正向引物CCHFV-FP终浓度250 nM,反向引物CCHFV-RP终浓度500 nM,探针CCHFV-Probe终浓度500 nM;扩增程序为:50℃10 min,95℃10 min;95℃5 s,57℃20 s 45次循环。该方法最低检测限约为2 copies病毒/反应,与森林脑炎病毒和汉坦病毒无交叉反应。结论:该方法灵敏度高、特异性强,适用于新疆出血热病毒的快速检测。
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- 关键词：新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR
- 入境生物材料中人源基因实时荧光PCR检测方法的建立
- 2016年
- 目的建立适合国境口岸入境生物材料中快速判断是否含有人源基因的实时荧光PCR检测方法并应用于口岸出入境生物材料的检测,为入境生物材料监管提供技术支撑。方法根据人线粒体ND2基因核酸序列,设计并筛选适合实时荧光PCR检测的引物和探针,优化反应体系,评估方法的灵敏度、特异性、稳定性,建立快速、特异的人源基因荧光PCR检测方法。结果建立的检测方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,可在2 h内完成入境生物材料的检测,并有效区分非人灵长类动物及常见哺乳动物基因。结论本方法适用于对入境生物材料中人源基因的快速、准确检测,为口岸科学执法提供依据。
- 黄吉城黄惠敏刘燕李小波郑夔师永霞
- 关键词：生物材料
- 蚊类DNA快速鉴定方法研究
- 郭波旋师永霞钟玉清相大鹏洪烨幸芦琴李小波黄吉城郑夔阎清丽蔡传烈林巧贤谢奕良
- 课题来源与背景：蚊类是多种严重疾病的传播媒介，一直受到医学昆虫学家和预防医学家的高度重视。课题受到国家质检总局科技计划项目（2002IK100）和广东局科技计划项目（GDK32-2002）支助。技术原理及性能指标：分别选...
- 关键词：
- 关键词：蚊虫DNA快速鉴定方法
- 5种埃博拉病毒多重实时荧光PCR方法的建立被引量：3
- 2019年
- 目的建立扎伊尔型(EBOZ)、苏丹型(EBOS)、科特迪瓦型(EBOC)、本迪布焦型(EBOB)和莱斯顿型(EBOR)埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法,一次检测可实现5种埃博拉病毒的分型。方法比较5种15株埃博拉病毒基因组的保守性和特异性,设计5种埃博拉病毒特异性引物和探针用于核酸检测,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR分别使用FAM、VIC、Texas red、FAM、VIC荧光基团标记探针。分2管对5种埃博拉病毒进行多重实时荧光PCR检测,其中管1检测EBOZ、EBOS和EBOC,管2检测EBOB和EBOR。使用不同浓度的埃博拉病毒阳性对照质粒进行检测,确定最佳的引物、探针用量和Mg2+用量,建立5种埃博拉病毒分型检测的多重实时荧光PCR方法。同时,对建立的方法进行灵敏度、特异性和灵敏度分析。结果优化的多重实时荧光PCR方法的引物和探针终浓度分别为160 nmol/L和80 nmol/L,Mg2+终浓度为2 mmol/L。建立的方法灵敏度为103拷贝/ml,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR实时荧光PCR检测10次的CV值分别为0.16%、0.25%、0.24%、0.22%、0.28%。埃博拉病毒多重实时荧光PCR对马尔堡病毒阳性对照,登革病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒、裂谷热病毒等阳性毒株检测结果为阴性。结论建立的5种埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于口岸输入性埃博拉出血热病例的早期检测和分型鉴别。
- 师永霞黄吉城袁帅黎东红孙芳芳郑夔戴俊
- 广东国境口岸2009-2010年度流感监测结果与分析
- ：在2009年全球暴发"甲型H1N1流感"的背景下,分析广东国境口岸20092010年度出入境发热患者流感病毒核酸检测结果,统计阳性率,甲型、乙型流感的比例,甲型流感中新型甲型H1N1流感病例及季节性...
- 李小波郭波旋洪烨苏锦坤幸芦琴郑夔师永霞黄吉城相大鹏
- 关键词：核酸检测病毒传播
- 广州空港口岸非洲航班入境旅客传染病罹患因素研究被引量：5
- 2016年
- 目的针对广州空港口岸非洲航班入境旅客个人基本情况、国内外生活和工作环境、个人在国外生活状况、传染病认知度、传染病防控主动获知意识等五大要素进行流行病学调查,研究其传染病罹患因素,探讨如何针对性强化境内外防控措施。方法 2010—2014年,在广州白云国际机场口岸,针对非洲航班中国籍入境旅客发放调查表并统一回收统计。结果非洲航班入境旅客以男性为主,占94.23%;88.55%的旅客年龄集中在20-49岁之间;职业以劳务和商务人员为多,合计达68.14%;入境旅客在非生活地区以城市及周边郊区为主;传染病知识宣教和防护用品发放通常由当地政府、医疗机构提供,一般为驱蚊药物、口罩、手套等;52.07%的入境旅客声称身边有传染病患者,多为疟疾、登革热、流感等;入境旅客承认在境外期间有蚊虫叮咬史者最多,达80.46%;仅有11.07%和13.47%的旅客能正确认知以埃博拉出血热为代表的新发传染病传播途径及预防措施,入境有发热等不适症状时,仅有27.24%的旅客选择将情况告知口岸检疫部门。结论非洲航班入境旅客在境外受传染病威胁较大,自身传染病知识尤其是新发传染病知识、个人防护及主动配合意识有待加强,在境外感染传染病后输入我国导致本地疫情暴发的可能性不容忽视。检验检疫、卫生、劳务等部门应通力合作,采取积极主动的针对性境内外防控措施,达到提前防范风险的目标。
- 戴俊张显光洪烨黄吉城吴惠明邓荆陈艳玲李小波师永霞郑夔
- 疟疾的实时荧光PCR快速检测方法被引量：11
- 2011年
- 目的:建立疟疾的实时荧光PCR检测方法并用于疟疾的快速检测。方法:设计了疟原虫通用型实时荧光PCR检测的引物和探针,建立了疟疾的实时荧光PCR检测方法。对40份疟疾镜检阳性样本和20份镜检阴性样本进行实时荧光PCR检测,并和巢式PCR方法检测结果进行了比较。结果:疟疾实时荧光PCR检测速度快,20分钟即可完成。40份镜检阳性样本的荧光PCR检测均为阳性,2份样本的巢式PCR结果为阴性;20份镜检阴性样本中有3份样本为实时荧光PCR阳性,其余17份样本为实时荧光PCR阴性,与疟疾巢式PCR检测结果相同。结论:该实时荧光PCR方法检测速度快,特异性强,准确性高,阳性率高,不易漏检,适用于疟疾的快速检验,这对防止该病在国境口岸的传入提供了技术依据。
- 师永霞苏锦坤洪烨李小波郑夔黄吉城幸芦琴相大鹏郭波旋
- 关键词：疟疾实时荧光PCR巢式PCR
