李秀伟
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
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- 4℃冷藏小鼠附睾精子与OPS法冷冻卵母细胞体外受精能力的研究
- 本实验主要目的是探索不同方法低温(4℃)冷藏的小鼠附睾精子与新鲜/OPS法冷冻·解冻的卵母细胞的体外受精能力，并进行卵母细胞透明带打孔来提高体外受精率，通过胚胎移植及体外培养检验胚胎的体内、外发育能力。
实验一...
- 李秀伟
- 关键词：体外受精胚胎移植
- 文献传递
- 小鼠附睾的冷藏和体外受精
- 本实验研究低温冷藏小鼠附睾的方法,并利用卵母细胞透明带打孔技术提高冷藏附睾的精子与新鲜/冷冻卵母细胞的体外受精能力.分别采用屠体法和混合气法(5％CO2、 5％ O2和90％ N2)低温(4℃)冷藏小鼠附睾,将冷藏附睾的...
- 范志强李秀伟刘颖侯云鹏周光斌朱士恩
- 关键词：卵母细胞体外受精
- 文献传递
- 小鼠卵母细胞的OPS法玻璃化冷冻保存技术被引量：7
- 2006年
- 目的以小鼠卵母细胞为模型,利用开放式拉长细管(open pulled straw,OPS)法研究在不同条件下冷冻、解冻对其发育能力的影响,为家畜、濒危动物乃至人类探索一种简易、高效的卵母细胞冷冻保存提供理论与技术参考。方法在室温(25℃±0.5℃)条件下,以乙二醇(EG)、DMSO为主体抗冻保护剂配制成的玻璃化溶液(EFS、EDFS),采用OPS法对卵母细胞进行玻璃化冷冻保存。实验一:操作台温度分别为25℃±0.5℃和37℃±0.5℃时,卵母细胞在10%EG+10%DMSO或10%EG溶液中预处理30 s,移入EDFS或EFS中平衡15 s^45 s进行冷冻保存;实验二:操作台为37℃±0.5℃条件下,采用三种方法(卵母细胞在A:0.5 mol/L和0.3 mol/L的蔗糖中分别处理2 min和5 min;B:0.3 mol/L和0.15 mol/L的蔗糖中分别处理5 min和2 min;C:0.5 mol/L的蔗糖处理5 min)对EDFS30和EDFS40冷冻保存的卵母细胞进行解冻;实验三:解冻后的卵母细胞在SrCl2溶液中进行孤雌激活。结果与结论实验一中卵母细胞解冻后的形态正常率分别高达92.1%(25℃±0.5℃)和92.5%(37℃±0.5℃),均与对照组(98.9%)无显著性差异(P>0.05);实验二中卵母细胞解冻以C法效果最佳(形态正常率分别为92.5%和67.5%);实验三中解冻后在mCZB中培养0.5 h的卵母细胞激活效果优于未培养组(卵裂率和囊胚发育率分别为80.0%vs.57.7%;18.2%vs.0),均有显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01);而培养组与新鲜对照组卵母细胞激活后卵裂率和桑椹胚发育率与对照组(80.0%vs.77.8%;52.8%vs.61.9%)均无显著性差异(P>0.05)。
- 李秀伟吴通义侯云鹏周光斌朱士恩
- 关键词：卵母细胞冷冻玻璃化
- OPS两步法玻璃化冷冻小鼠8-细胞胚胎生存发育率的研究被引量：3
- 2006年
- 目的为实验动物、家畜和人类胚胎的冷冻保存探索简易、高效的玻璃化冷冻程序。方法以小鼠8-细胞胚胎为材料,在25℃室温和37℃恒温台条件下,利用玻璃化冷冻溶液EDFS30, 对小鼠8-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存,解冻后培养60 h后的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标,同时对解冻后培养1-3 h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。OPS(Open-pulled straw)两步法冷冻保存,即胚胎首先移入预处理液(10％EG+10％DMSO)中平衡30 s,再移入玻璃化溶液中吸入OPS平衡15、25、35、45和60 s连同胚胎直接投入液氮中冷冻保存。结果小鼠胚胎8-细胞冷冻后囊胚发育率最佳组高达95．6％,与对照组(96．8％)差异无统计学意义(P> 0．05)。利用最佳冷冻组获得的165枚胚胎移植于11只假孕63-67 h的受体母鼠,结果有4只妊娠,产仔23只,妊娠产仔率为38．3％(23/60),与对照组37．9％(22/58)差异无统计学意义(P>0．05)。结论 EDFS33为玻璃化冷冻液,OPS两步法能有效地冷冻保存小鼠8-细胞胚胎。
- 周光斌侯云鹏杨中强杨其恩李秀伟朱士恩
- 关键词：OPS法玻璃化冷冻小鼠
- 不同温度条件下小鼠囊胚OPS法玻璃化冷冻保存技术的研究被引量：2
- 2006年
- 本实验采用OPS法在不同温度条件下对小鼠囊胚实施冷冻保存,研究用EDFS和EFS溶液冷冻保存囊胚的效率和提供不同温度下筛选玻璃化溶液的依据,为家畜和人类胚胎的冷冻保存建立模型。25℃室温和37℃恒温台条件下OPS一步法冷冻保存小鼠囊胚,EFS40和EDFS40冷冻组扩张囊胚率(92.31%,92.30%)与对照(97.26%)均无显著差异(P>0.05),但EDFS40孵化囊胚率(59.62%)显著低于对照组(83.56%)(P<0.05);二步法冷冻结果显示,采用EDFS30和EFS40均能高效保存小鼠囊胚,解冻后扩张囊胚率(95.69%和95.05%)和孵化率(80.48%和78.95%)与对照无显著差异(P>0.05)。当改为25℃室温不使用恒温台条件下,一步法冷冻的胚胎解冻后,仅EDFS40冷冻组扩张囊胚率和孵化囊胚率(85.96%和75.44%)与对照(96.05%和82.89%)无显著性差异(P>0.05);实施二步法冷冻的胚胎,解冻后EDFS30,EDFS40和EFS40组均获得理想效果,扩张囊胚率(92.03%-95.31%)及孵化囊胚率(67.19%-76.76%)与对照均无显著差异(96.05%和82.89%)(P>0.05)。据体外发育结果,选择最佳冷冻组胚胎移植给假孕4d的受体母鼠,其妊娠率和产仔率(90.90%和37.33%)与新鲜胚对照组(91.67%和42.33%)无显著差异(P>0.05)。结果证实,EDFS30、EDFS40和EFS40三种冷冻液在不同的温度条件和采用不同冷冻程序,均能成功保存小鼠囊胚。
- 杨其恩侯云鹏杨中强周光斌李秀伟朱士恩
- 关键词：囊胚OPS玻璃化冷冻
- 冷冻后小鼠卵母细胞的透明带和质膜对体外受精的影响
- 2008年
- 以冷冻保存后的小鼠卵母细胞为实验材料,研究其膜对体外受精效果的影响。在室温(25±0.5)℃条件下,以10%乙二醇(EG)+10%二甲基亚砜(DMSO)为预处理液,EDFS30为玻璃化溶液。将卵母细胞于10%EG+10%DMSO溶液中预处理30s,然后再移入EDFS30中处理25s,以开放式拉长细管(OPS)为承载器投入液氮中,即两步法玻璃化冷冻保存。结果表明:冷冻卵母细胞受精后的卵裂率(46.67%)显著低于新鲜组的(86.06%)(P<0.05)。冷冻卵母细胞去透明带后质膜上的平均精子结合数(10.70)与对照组(10.81)无显著性差异(P>0.05),形成雌雄原核数也无显著性差异(2.49vs.2.59)(P>0.05)。冷冻卵母细胞透明带打孔后,其体外受精后卵裂率与新鲜组差异不显著(84.73%vs.91.19%)(P>0.05)。因此玻璃化冷冻保存小鼠卵母细胞透明带的变化是影响体外受精效果的主要因素之一。
- 王晓旭周光斌李秀伟闫长亮朱士恩
- 关键词：OPS玻璃化冷冻体外受精
- 玻璃化冷冻对小鼠GV期卵母细胞发育能力的影响
- 2006年
- 试验首次采用OPS法玻璃化冷冻小鼠GV期卵母细胞(不带卵丘细胞,下同),同时尝试用EDFS30对小鼠卵巢进行细管法玻璃化冷冻,以研究GV期卵母细胞冷冻后的发育潜力。首先,利用MEM培养和MEM-腔前卵泡培养新鲜GV期卵母细胞,并把较好的培养方式用于冷冻后培养试验。2种培养方式培养24h后新鲜GV期卵母细胞成熟率无显著性差异;OPS法冷冻的GV期卵母细胞解冻后成熟率及体外受精后卵裂率与对照组差异不显著(P>0.05)。细管法冷冻卵巢组织的GV期卵母细胞成熟率极显著低于对照组(P<0.01),其受精后未获得受精卵。结果表明:OPS法可有效地冷冻保存小鼠GV期卵母细胞,而细管法冷冻小鼠卵巢对GV期卵母细胞损伤较大。
- 索伦杨其恩李秀伟侯云鹏朱士恩
- 关键词：畜牧学GV期卵母细胞卵巢玻璃化冷冻小鼠
