陈淑红
- 作品数：13 被引量：73H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省“十五”科技攻关项目黑龙江省科技攻关计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪轮状病毒中国分离株JL94 VP7基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2003年
- 用 MA10 4细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株 JL94。利用一对根据 Genebank中已发表的轮状病毒 VP7基因c DNA序列而设计并合成的引物 ,通过反转录—聚合酶链反应 (RT- PCR)从 JL94毒株扩增出 VP7基因全长 c DNA。将其插入p MD18- T载体中 ,构建了重组质粒 p MD18- T- JL 94 / VP7,并对其进行了 Hind ,Hind 和 Bam H 的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定 ,证明克隆的 p MD18- T- JL94 / VP7为轮状病毒的 VP7基因。通过核苷酸序列比较 ,JL94 / VP7与 A群猪轮状病毒 C134/ VP7、OSU / VP7、ICB2 185 / VP7、YM/ VP7核苷酸序列同源性分别为 87%、99%、74 %和 83%。
- 师东方李一经贾永清王君伟刘宝全徐宏军陈淑红
- 关键词：轮状病毒中国分离株VP7基因克隆
- 应用PCR检测鸭肠炎病毒弱毒在鸡胚体内的分布被引量：7
- 2007年
- 根据GenBank已发表的鸭肠炎病毒(DEV)UL6基因的部分核苷酸序列,设计并合成一对引物,以鸭肠炎病毒中国商品化疫苗毒蚀斑纯化株(DEVClone-03)DNA为模板,经PCR扩增出预期516bp的目的片段。将此片段插入克隆载体质粒pMD18-T,并进行序列测定,序列比较结果显示,此段序列与参考序列完全一致。用PCR检测DEVClone-03在鸡胚体内的分布情况显示,接毒死亡鸡胚的尿囊膜、心、肝、脾、肺、肾和肌肉皮肤内均存在病毒。PCR敏感试验表明此方法可以检测到100μL尿囊液中提取的10-3稀释的病毒DNA,相当于0.2个EID50病毒量的DNA。
- 陈淑红刘怀然韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚
- 关键词：鸭肠炎病毒PCR
- 猪轮状病毒地方株的分离鉴定及其VP6基因的克隆与原核表达
- 猪轮状病毒/(Porcine Rotavirus,PRV/)是呼肠孤病毒科轮状病毒属的成员，是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原之一，给世界各地的畜牧业造成严重的经济损失。我国PRV感染也非常普遍，有些地区断奶仔猪阳性率高达7...
- 陈淑红
- 关键词：猪轮状病毒VP6基因克隆原核表达
- 文献传递
- 猪轮状病毒国内分离株JL94 VP7基因克隆与真核表达质粒的构建被引量：3
- 2002年
- 用MA10 4细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株JL94。利用一对根据Genebank中已发表的轮状病毒VP7基因cDNA序列而设计并合成的引物 ,通过逆转录—聚合酶链反应 (RT_PCR)从JL94毒株扩增出VP7基因全长cDNA。将其插入pMD18_T载体中 ,构建了重组质粒pMD18_T_JL94 /VP7,并对其进行了HindⅢ ,HindⅢ和BamHⅠ的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定 ,证明pMD18_T_JL94 /VP7中的插入基因为轮状病毒的VP7基因。重新设计一个带有Kozak序列的上游引物 ,通过PCR扩增出带有Kozak序列的vp7基因并将其插入pMD18_T载体中构建了重组质粒pMD18_T_VP7,酶切鉴定其大小和方向后 ,与真核表达载体pcDNA 3.1(+)分别用HindⅢ和BamHⅠ双酶切 ,胶回收纯化后连接。经酶切和核苷酸序列检测鉴定 。
- 师东方李一经范锡龙贾永清王君伟刘宝全陈淑红
- 关键词：猪轮状病毒国内分离株基因克隆真核表达质粒VP7基因RT-PCR
- 鸭肠炎病毒部分基因组序列的克隆与分析
- 鸭病毒性肠炎(Duckviralenteritis，DVE)，又名鸭瘟(Duckplague，DP)，是由鸭肠炎病毒(Duckenteritisvirus，DEV)引起的鸭、鹅及多种雁形目动物的一种急性、热性、败血性传染...
- 陈淑红
- 关键词：鸭肠炎病毒基因组序列基因组结构基因克隆PCR检测原核表达
- 鸭肠炎病毒UL6基因的分子特征被引量：17
- 2006年
- 为了研究鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus，DEV）UL6的特征，以DEV Clone-03株基因组DNA为模板，用靶基因步移PCR方法扩增得到UL6基因区域2534bp的DNA片段。结果发现，DEVC lone-03 UL6基因由2373个核苷酸组成，编码一条790个氨基酸残基组成的多肽。与14株已报道的具有全UL6同源基因序列的疱疹病毒参考株进行比较，DEV Clone-03株与α疱疹病毒的核苷酸和氨基酸同源性较之与8疱疹病毒和γ疱疹病毒要高。氨基酸序列比较显示，DEV Clone-03 UL6基因具有α疱疹病毒UL6同源基因5个保守区域。UL6基因推导的氨基酸系统发育进化树分析发现，DEV Clone-03与α疱疹病毒属一个群，在α疱疹病毒中与马立克氏病病毒（Marek’s disease herpesvirus，MDV）更接近。同时，序列分析发现，在201～222和425～441等氨基酸位，α疱疹病毒参考毒株均有不同程度的缺失，而DEV Clone-03表现出独有的完整性。
- 陈淑红韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚
- 关键词：鸭肠炎病毒分子特征
- 猪轮状病毒地方株JL94株VP6基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：10
- 2004年
- 以猪轮状病毒地方分离株JL94株病毒核酸为模板,通过RT-PCR扩增内衣壳蛋白基因VP6cDNA,将其插入克隆载体质粒pMD18-T,并进行测序。从T载体上将VP6基因亚克隆到表达载体质粒pET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并利用Ni2+金属螯合亲合层析纯化融合蛋白。结果表明,VP6基因全长1356bp,并在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量可占菌体蛋白的26.5%,在表达的蛋白中,除45ku主要蛋白外,还有几条分子量较小的蛋白表达出来,这些融合蛋白经纯化后均具有良好的反应特异性。
- 陈淑红李一经师东方
- 关键词：轮状病毒VP6基因基因克隆大肠杆菌
- SARS冠状病毒复制酶蛋白nsp8的原核表达被引量：2
- 2005年
- 以SARS冠状病毒(BJ01株)基因组RNA为模板,经RT-PCR扩增得到SARS-CoVnsp8基因,并克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pNSP8E。pNSP8E转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出可溶性的GST-nsp8融合蛋白,经亲和层析和自剪切获得了高纯度nsp8蛋白。以nsp8为抗原免疫家兔,制备了nsp8的多克隆抗体,为下一步研究其在病毒感染的细胞中的功能奠定了基础。
- 刘家森陈淑红刘怀然孟庆文庞海孔宪刚
- 关键词：复制酶SARS冠状病毒原核表达载体酶蛋白病毒复制PCR扩增
- 猪轮状病毒JL94中国分离株衣壳蛋白基因的分析被引量：2
- 2005年
- 根据GenBank发表的猪轮状病毒衣壳蛋白vp4基因、vp6基因和vp7基因保守序列,设计合成3对引物,分别扩增猪轮状病毒中国分离株JL94株的此3段基因并进行序列分析。结果表明,JL94株vp4基因与国外分离株CRW-8株、OSU株、Gottfried株、4F株和4S株的VP4氨基酸同源性分别为97.16％、95％、71.88％、73.45％和70.88％;JL94株vp6与CRW-8株、OSU株、Gottfried株、4F株和4S株的VP6氨基酸同源性分别为96.98％、97.48％、93.20％、97.48％和93％;JL94株vp7基因与CRW-8株、OSU株、Gottfried株、4F株和4S株的VP7氨基酸同源性分别为98％、99.90％、75.40％、84.66％和80％。可见JL94株同CRW-8株、OSU株同源性更高些;vp4和vp7基因在同型间高度保守而不同型间差距较大,vp6基因在同群和非同群间差别不是很明显。同时可以判定JL94属于A群Ⅰ亚群G5P7血清型PRV。研究猪轮状病毒中国分离株JL94株衣壳蛋白基因的特征,为研制高效抗病毒疫苗奠定基础。
- 宋岩李丹丹师东方魏华陈淑红李一经
- 关键词：猪轮状病毒中国分离株VP7基因氨基酸同源性VP6基因VP4基因
- 猪轮状病毒的分离鉴定及部分特性研究被引量：23
- 2004年
- 从吉林省某猪场发生腹泻的猪群粪便中,用MA＿104细胞培养,分离到一株猪轮状病毒,盲传至4代,感染细胞出现明显病变,经电镜观察,见有典型的轮状病毒颗粒。其RNA电泳型为4:2:3:2型,属A群轮状病毒,同时对其蚀斑特性和血凝特性进行了初步研究,这株病毒被命名为JL94株。
- 陈淑红王新生师东方李一经
- 关键词：猪轮状病毒细胞培养血凝特性
