傅生芳
- 作品数：15 被引量：71H指数：5
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人呼吸道合胞病毒F1蛋白的原核表达及纯化
- 2011年
- 目的克隆A型人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州分离株F1基因,并进行原核表达和纯化。方法采用RT-PCR方法克隆RSV F1 ORF序列,克隆至pET-42b(+)表达载体,构建重组原核表达质粒pET-42b-F1,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用GST亲和层析树脂进行纯化。结果重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约77 000,表达量约占菌体总蛋白的20%,以包涵体和可溶性两种形式存在;该蛋白可与鼠抗人RSV单抗发生特异性反应,纯化后纯度约为50%。结论已原核表达并纯化了HRSV F1蛋白,为其血清抗体的制备及免疫原性研究奠定了基础。
- 傅生芳寇桂英包红姜英陈汉泉余黎周旭
- 关键词：原核细胞纯化
- H9N2亚型禽流感病毒M基因的克隆及序列分析被引量：8
- 2005年
- 从鸡胚尿囊液中提取H9N2亚型禽流感病毒的 RNA,根据已发表的 A型流感病毒(AIV)的核苷酸序列 ,设计一对特异引物 ,采用反转录-聚合酶链式反应 (RT-PCR)成功地扩增了AIV的M基因.将M基因的cDNA克隆后进行了序列测定,测序结果表明所扩增的1 192 nt片段包含了完整的M基因的两个开放阅读框.核苷酸序列比较分析结果表明:该毒株与A/Hong Kong/1073/99(H9N2)、A/Duck/Hong Kong/380.5/2001(H5N1)、A/Duck/NY/191255-79/02(H5N2)相比 ,核苷酸序列的同源性在92.2 %～96.1 %之间,其相对应的氨基酸序列的同源性在91.7 %～96.3 %之间.
- 傅生芳常惠芸独军政候顺利陈怀涛
- 关键词：禽流感病毒M基因克隆
- 采用半巢式RT-PCR检测兰州地区住院肺炎患儿下呼吸道分泌物中的RSV被引量：1
- 2009年
- 从人呼吸道合胞病毒(hRSV)基因序列中高度保守的N基因处,设计了特异性半巢式引物,以反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法随机检测了46份兰州地区2007年春季住院肺炎患儿下呼吸道分泌物样本。结果46份样本中有19份扩增出了预期目的片段,对所有扩增产物进行基因序列测定。结果表明19份样本均有RSV感染,其检出率为41%,而且序列分析结果显示,所有RSV阳性样本均与RSVA亚型的同源性高于B亚型。
- 傅生芳包红安红张蓉芳周旭金玉
- 关键词：人呼吸道合胞病毒
- 禽流感病毒的分子生物学研究进展被引量：25
- 2005年
- 禽流感是一种主要感染禽类的烈性传染病,能引起巨大的经济损失。该病也能传染人,因此,对禽流感病毒的研究已成为一大热点。目前研究的重点主要集中在其病毒的分子生物学方面,以期能更有效地防制本病。文章从基因组及其编码的蛋白质、病毒毒力、毒力变异、基因疫苗和诊断技术等方面系统论述了禽流感病毒的分子生物学方面的研究进展,为进一步研制禽流感病毒基因工程疫苗及诊断制品,预防该病提供了理论基础。
- 傅生芳独军政常惠芸陈怀涛
- 关键词：禽流感病毒分子生物学基因工程疫苗病毒毒力毒力变异基因疫苗
- 羊传染性胸膜肺炎的病理学诊断被引量：10
- 2005年
- 采用常规的病理学诊断方法,对一例羊传染性胸膜肺炎进行了确诊。结果发现该病例具有胸膜肺炎的典型病理变化,呈现纤维素性肺炎和淋巴细胞性间质肺炎,纤维素性物质的渗出和炎性细胞的浸润很明显,肺胸膜增厚,同时在肺间质还可见水肿、出血、血栓和淋巴栓的形成;另外心、肝、肾也均有不同程度的变性,淋巴结呈反应性增生。同时还检验出其病原为支原体。
- 傅生芳陈怀涛常惠芸包惠芳王泽华
- 关键词：胸膜肺炎支原体
- 呼吸道合胞病毒减毒活疫苗研制进展
- 2015年
- 人呼吸道合胞病毒（resipiratory syncytial virus，RSV）是世界范围内儿童下呼吸道感染的主要病原体，但其疫苗的开发面临许多困难和挑战。随着反向遗传学及相关技术和工具的应用，RSV疫苗，尤其是减毒活疫苗的研制已经取得很大进展。此文就RSV减毒活疫苗研发的主要突破和研究进展进行综述。
- 傅生芳余黎周旭
- 关键词：呼吸道合胞病毒反向遗传学疫苗减毒
- 人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的制备、纯化和复性被引量：5
- 2015年
- 目的将前期在大肠埃希杆菌中获得表达的A型人呼吸道合胞病毒兰州分离株截短的F1重组蛋白进行纯化和复性,为后期动物免疫制备抗原。方法 37℃诱导重组菌体p ET-42b-F1J/Rossata,诱导完毕后离心收集菌体,高压破碎菌体并收集包涵体后用不同浓度的Triton X-100(细胞裂解液)洗涤包涵体3次。洗涤的包涵体用8 mol/L尿素进行溶解并用镍离子亲和层析方法进行初步纯化,用阳离子交换层析方法对初步纯化蛋白进行最终的纯化。亲和层析纯化蛋白用3种不同的复性液进行了稀释复性。结果 37℃诱导5 000 m L重组菌p ET-42b-F1J/Rossata共收获37 g湿菌体,经过不同浓度Triton X-100洗涤包涵体后纯度可达75%。包涵体用8 mol/L尿素溶解后经镍离子亲和层析纯化纯度约为40%,再用阳离子交换层析介质SP HP进一步纯化样品后纯度可达90%。纯化蛋白以3种不同的复性液都能得到复性,其中复性液3的复性效果相对较好。结论实验中探索了人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的纯化方法及步骤,为后期的蛋白制备及动物免疫奠定了基础。
- 傅生芳朱传凤姜英安静余黎周旭
- 关键词：包涵体复性
- 禽流感病毒CGC/2/99（H9N2）株四个主要结构蛋白基因的克隆及其核蛋白在大肠杆菌中的表达
- 本试验从鸡胚尿囊液中提取病毒总RNA,设计并合成4对特异性引物,采用反转录—聚合酶链式反应法获得了AIV的四个主要结构基因—HA、NA、NP和M,获得各片段核苷酸序列长度分别为1728BP、1533BP、1681BP和1...
- 傅生芳
- 关键词：禽流感病毒结构基因大肠杆菌
- 文献传递网络资源链接
- 人呼吸道合胞病毒黏附蛋白片段的原核表达及纯化被引量：2
- 2012年
- 目的原核表达并纯化人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州株黏附蛋白(G)片段。方法利用PCR技术从HRSV兰州株(A亚型)中扩增G基因AA75-225片段,克隆至原核表达载体pET-42b(+)中,构建重组表达质粒pET-42b-G,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 PCR扩增获得453 bp的DNA片段;重组表达质粒pET-42b-G经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量为50 230,表达量占菌体总蛋白的25%,以包涵体和可溶性两种方式存在;纯化后重组蛋白纯度可达95%以上,可与抗RSV-G蛋白单克隆抗体特异性结合。结论已成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了HRSV兰州株G片段,为后续RSV疫苗的研制、RSV感染的血清学诊断及试剂盒的研发提供了材料。
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- 关键词：呼吸道合胞病毒黏附蛋白原核细胞
- 呼吸道合胞病毒融合蛋白F1和截短F1蛋白的表达差异研究被引量：4
- 2012年
- 目的构建呼吸道合胞病毒融合蛋白F1和截短F1蛋白的原核表达载体,并对它们在大肠杆菌中的表达差异进行了初步研究。方法用DNAstar软件对呼吸道合胞病毒F1蛋白进行亲疏水性和抗原表位可能性分析后,将其两端的疏水区域截去之后与pET-42b(+)构建表达载体,同时用相同的表达系统构建F1蛋白的表达载体并将2种重组蛋白进行诱导表达。实验对2种蛋白在Rossata/pET-42b(+)菌株中的表达难易度、表达形式及初步洗涤的包涵体纯度进行了比较。结果与F1蛋白相比,截短的F1蛋白相对更容易表达,表达的可溶性蛋白含量更高,洗涤纯化后的包涵体纯度也更高。结论呼吸道合胞病毒F1蛋白截去两端疏水氨基酸后更容易表达,为后期蛋白的大量制备及其免疫原性研究奠定了基础。
- 傅生芳安静朱传凤寇桂英陈汉泉余黎周旭
- 关键词：呼吸道合胞病毒F1
