刘行波
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金黑龙江省科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 兔出血症病毒TP株VP60基因DNA免疫小鼠的实验研究被引量：3
- 2011年
- 为评价兔出血症病毒(RHDV)VP60基因在小鼠体内诱导产生体液免疫和细胞免疫情况,本研究构建了RHDV VP60基因的真核表达质粒pcDNA-VP60,并将其免疫小鼠。利用ELISA方法检测特异性抗体和小鼠外周血细胞因子水平,MTT法和流式细胞术(FACS)检测小鼠外周血T淋巴细胞增殖情况和T淋巴细胞亚群的动态变化。抗体检测结果显示,重组质粒免疫组抗体水平在免疫后5周～6周达到峰值,而且与对照组比较差异显著(p<0.05);细胞因子检测结果显示,重组质粒免疫组血清中IFN-γ、IL-2、IL-4因子水平随免疫时间延长而升高,并且能够维持较高水平,与对照组比较差异显著(p<0.05);T淋巴细胞检测结果显示,重组质粒免疫组T淋巴细胞明显增殖,CD4+T淋巴细胞数量免疫后明显增高,与对照组比较差异显著(p<0.05);所有检测指标显示重组质粒免疫组和灭活苗免疫组比较均无显著差异(p>0.05)。以上结果表明pcDNA-VP60重组质粒可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫,为研制预防兔病毒性出血症的候选DNA疫苗提供了实验依据。
- 原冬伟刘家森郭东春司昌德姜骞林欢穆亚芳刘行波曲连东
- 关键词：兔出血症病毒T淋巴细胞DNA疫苗ELISA
- 表达兔出血症病毒VP60蛋白重组牛疱疹病毒的构建及免疫原性分析
- 牛疱疹病毒1型（Bovine hepervirus-1，BHV-1)为α疱疹病毒，基因组为135kb左右的双链DNA，像其它疱疹病毒一样，BHV-1基因组中有许多病毒复制非必需基因，可允许插入外源DNA，且BHV-1具有...
- 刘行波
- 关键词：兔出血症病毒VP60基因重组病毒
- 文献传递
- 检测兔出血症病毒荧光定量方法的建立与应用被引量：3
- 2013年
- 为了研究兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)在实验动物兔和野兔中的发生情况并能更精确检测该病毒,试验采用建立的SYBR Green荧光定量方法对10只黑龙江省各单位送检的实验动物兔和5只哈尔滨郊县疑似病例的脏器样品进行了检测。结果表明:该方法有较好的灵敏度和特异性,能够用于兔出血症病毒的检测。
- 刘行波原东伟刘家森郭冬春姜骞林欢司昌德崔玉东曲连东
- 关键词：VP60REAL-TIMEPCR
- 牛传染性鼻气管炎病毒gC结构蛋白的真核表达及其反应原性分析被引量：3
- 2018年
- 目的真核表达牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gC结构蛋白,并对其反应原性进行鉴定。方法以GenBank中登录的IBRV基因序列合成gC基因全长,构建重组真核表达质粒p CDNA4-gCHis,并进行双酶切鉴定。将鉴定正确的质粒转染MDBK细胞,收集上清,镍柱纯化带有His标签的重组gC蛋白,经Dot blot和间接免疫荧光法鉴定其反应原性。结果质粒p CDNA4-gC-His经双酶切鉴定证明构建正确,表达的重组gC蛋白相对分子质量约54 000,纯化后的浓度为0. 03 mg/mL,可与IBRV免疫的兔多抗发生反应。结论成功构建了真核表达质粒pCDNA4-gC-His,并能在MDBK细胞系中正确表达,表达的蛋白与天然IBRV gC蛋白具有相同的反应原性,为后续免疫学诊断方法的建立奠定了基础。
- 张帆刘行波倪宏波
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒真核表达反应原性
- 新型聚维酮碘对牛传染性鼻气管炎病毒灭活效果试验被引量：1
- 2019年
- 甲醛是广泛应用的病毒灭活剂,但其缺点也很明显,如刺激性强、破坏免疫原性、灭活不彻底等,因此需要寻找一种可以替代传统灭活剂甲醛的新型灭活剂。通过细胞盲传三代、无菌检验和台盼蓝染色等方法,结合不同灭活浓度与灭活时间双因素来筛选聚维酮碘与甲醛灭活牛传染性鼻气管炎病毒的最优条件,同时,向MDBK细胞中接种不同浓度的聚维酮碘和甲醛观察是否对MDBK细胞具有毒性和刺激性。结果表明10%的聚维酮碘24 h时可彻底灭活传染性鼻气管炎病毒,0.3%的甲醛48 h时可彻底灭活牛传染性鼻气管炎病毒,0.5%的甲醛对细胞具有强烈刺激导致绝大多数细胞死亡,而浓度为15%的聚维酮碘对MDBK细胞仍无刺激,直到浓度高达20%时才对细胞有了较大刺激,说明聚维酮碘无刺激性和毒性、安全性更高。为病毒灭活疫苗的理想灭活剂提供了新的方向,并为新型灭活剂的研发奠定基础。
- 辛志浩刘明明刘行波倪宏波
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒甲醛聚维酮碘灭活效果
- PEI磁珠吸附IBRV主要囊膜蛋白基因的DNA疫苗的构建
- 2020年
- 通过利用实验已经构建好的表达IBRVgB/gC/gD囊膜蛋白的真核表达质粒(pCDNA4-gB-His、pCDNA4-gC-His、pCDNA4-gD-His)为免疫原,以PEI磁珠为载体,PEG为保护层构建DNA疫苗。将构建好的真核表达质粒,通过鉴定、扩增、大提后,使PEI磁珠与其吸附并转染至小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)鉴定蛋白表达情况,此后进行疫苗制备并通过电镜观察其形态特征。结果表明:三种蛋白均能在小鼠细胞中表达,所制备DNA疫苗在电子显微镜下可观察到PEG包裹在最外层,粒径均在100 nm以内。成功构建了以PEI磁珠吸附IBRV gB gC gD基因并包裹PEG保护层的DNA疫苗,验证其在小鼠表达系统中可以成功表达,为后续对小鼠免疫效果的评价奠定了基础。
- 于国伟刘行波倪宏波
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒DNA疫苗
- 牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白的真核表达及其多克隆抗体的制备被引量：2
- 2020年
- 目的真核表达及纯化牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gE蛋白,并制备其多克隆抗体。方法合成IBRV gE基因全长,并加入KpnⅠ和BSTBⅠ酶切位点,连接至真核表达载体pCDNA4-MycHis,构建重组质粒pCDNA4-gE-His,经双酶切鉴定正确后转染MDBK细胞系,镍柱纯化带有His标签的重组gE蛋白。将纯化后的重组gE蛋白皮下多点注射新西兰白兔,制备多克隆抗体并纯化,利用Dot blot和间接ELISA方法分析其抗原性。结果重组质粒pCDNA4-gE-His经双酶切鉴定证明构建正确,转染MDBK细胞系后,表达的重组gE蛋白相对分子质量约为61000,纯化后浓度为50μg/mL。制备的多克隆抗体纯化后浓度为1 mg/mL,经Dot blot和ELISA方法鉴定,重组gE蛋白具有良好的抗原性。结论真核表达了IBRV重组gE蛋白,成功制备了抗gE多克隆抗体,表达产物具有良好的抗原性,为诊断方法的建立以及疫苗和IBRV致病机制等相关研究奠定基础。
- 张帆刘行波倪宏波
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒GE基因真核表达多克隆抗体
- 兔出血症病毒VP60基因真核表达质粒的构建及初步评价被引量：8
- 2011年
- 利用pMD18-T-VP60质粒(包含RHDV-TP株VP60基因)PCR扩增并酶切回收VP60基因片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA-VP60,对重组质粒进行酶切和PCR鉴定;将重组质粒转染RK13细胞,进行间接免疫荧光和Western-blot检测;将构建好的重组质粒作为核酸疫苗,腿部肌肉注射免疫小鼠,采用间接ELISA法检测抗体水平;采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞术(FACS)检测细胞免疫情况;采用PCR方法检测重组质粒在小鼠体内的生物安全性。结果显示,成功构建pcDNA-VP60真核表达质粒,并在RK13细胞中获得表达。重组质粒作为核酸疫苗能够诱导小鼠体内产生特异性抗体而且抗体水平随免疫次数增加而逐渐增高,在免疫后49d时达到峰值;脾淋巴细胞刺激指数和CD4+、CD8+淋巴细胞亚群数量百分率明显增高,且与对照组存在明显差异。经PCR鉴定VP60基因未整合到小鼠主要脏器染色体上。结果表明,构建的pcDNA-VP60真核表达质粒能够诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,重组质粒对小鼠是安全的。
- 原冬伟刘家森郭东春司昌德姜骞林欢穆亚芳刘行波曲连东
- 关键词：核酸疫苗真核表达VP60PCR检测
- 表达兔出血症病毒VP60蛋白重组牛疱疹病毒1型的构建及免疫原性分析被引量：2
- 2014年
- 为制备表达兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白的重组病毒疫苗,本研究将RHDV VP60基因插入到CMV启动子下,构建牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gE基因缺失转移载体,利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与gE基因缺失的亲本病毒基因组DNA共转染牛肺细胞,制备了表达RHDV VP60基因的重组BoHV-1(rBoHV-1/gE-/VP60)。通过PCR、western blot及间接免疫荧光鉴定表明VP60基因在rBoHV-1/gE-/VP60中获得表达。并且体内试验表明重组病毒能够有效诱导小鼠产生RHDV特异性抗体。本研究构建了表达RHDV VP60基因的rBoHV-1/gE-/VP60,为研制预防兔出血症的BoHV-1活载体疫苗奠定了基础。
- 黄艳秋原冬伟刘行波刘家森陈淑慧单丽玲郭东春姜骞崔玉东薛飞曲连东
- 关键词：兔出血症病毒VP60基因
