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周朋: 作品数：23 被引量：9H指数：2; 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项海南省研究生创新科研课题更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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一种简并引物及利用该简并引物检测马铃薯Y病毒属病毒的方法: 本发明公开了一种简并引物，其由正向引物和反向引物组成，正向引物的核苷酸序列为：5’-GTITGYGTKGAYGAYTTYAAYAA-3’；反向引物的核苷酸序列为：5’-GTRTGBCKYTCIGTRTYYTC-3’；其中...; 章绍延王健华刘志昕张雨良余乃通张秀春周朋梁洁; 文献传递

香蕉束顶病毒两个DNA-U3组分的鉴定及重组分析: 香蕉束顶病毒(banana bunchy top virus)是矮缩病毒科(Nanaviridae)香蕉束顶病毒属(Babuvirus)的唯一成员。基因组至少由6个大小约1 kb的环状ssDNA组分所组成。2012013...; 周朋余乃通章绍延王健华Xiong Zhongguo刘志昕; 文献传递

香蕉束顶病毒Haikou2分离物DNA2编码框原核表达及抗血清制备: 2012年; 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产。BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究。本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2 ORF,将其构建到pET32a载体中,进行原核表达和抗血清制备。结果表明重组表达载体pET32a-DNA2ORF在表达菌Transetta(DE3)中表达一个约21 ku的特异融合蛋白,通过超声波破碎仪破碎细胞和诱导条件优化,分析表明,该蛋白主要以可溶形式存在,最佳表达条件为30℃、1.0 mmol/L IPTG诱导3 h。融合蛋白经过Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化,免疫家兔制备出抗血清。Western blot实验表明抗血清具有特异性;酶联法(ID-ELISA)测定表明,抗血清效价达到25 000,能够检测出香蕉汁液中加入的0.954μg/mL浓度的表达纯化蛋白。; 谭老喜王洪星张雨良王健华章绍延周朋余乃通刘志昕; 关键词：原核表达抗血清制备

香蕉束顶病毒（BBTV）DNA-U3序列多态性及转录特征: 香蕉是世界四大水果之一,同时也是一些发展中国家的重要粮食作物。香蕉束顶病是危害香蕉生产的主要病害之一,曾给香蕉产业造成巨大损失。香蕉束顶病毒（Banana bunchy top virus,BBTV）是一种多组分单链（s...; 周朋; 关键词：香蕉束顶病毒多态性转录组 CDNA末端快速扩增; 文献传递

香蕉束顶病毒cp和mp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证被引量：2: 2014年; 分别用两对引物PCR扩增BBTV cp、BBTV mp片段,混合各自PCR产物进行熔化退火可得到1/4两端含有Eco R玉和Bam H玉的PCR产物,分别克隆到酵母双杂交系统的p GBKT7诱饵载体中,并成功获得p GBKT7-cp和p GBKT7-mp。将重组质粒导入酵母Y2H菌株,转化成功后进行诱饵载体的自激活验证及毒性验证。结果表明,获得了正确的BBTV-cp和BBTV-mp基因片段,并成功克隆到p GBKT7诱饵载体中,同时在SD/-Trp营养缺陷平板上转化有诱饵载体的Y2H生长良好,说明诱饵载体的表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用,最后自激活验证确定了p GBKT7-cp和p GBKT7-mp可用于该系统的互作蛋白筛选,为下一步利用酵母双杂交系统检测与CP、MP蛋白相互作用的寄主蛋白奠定基础。; 王祥张秀春余乃通周朋梁洁刘志昕; 关键词：香蕉束顶病毒酵母双杂交诱饵载体自激活

感染BBTV香蕉叶片cDNA文库的构建及评价: 2013年; 为了研究香蕉束顶病毒与香蕉寄主致病的互作分子机制，本文报道利用Make Your Own＂Mate＆Plate＂ Library System试剂盒成功构建感染BBTV香蕉叶片的cDNA文库。通过改良CTAB法提取感染BBTV香蕉叶片的总RNA，采用SMART法反转录合成双链cDNA，经靳，酶切并去除短片段之后，与经同样酶切的pGADT7-SfiI载体连接，利用电转法将重组载体转化到大肠杆菌宿主细胞中，获得初级cDNA文库，最后以初级文库100万克隆为基数扩增，得到扩增文库并提取质粒。结果得到库容量大于2．0X10。的初级文库，检测表明文库cDNA插入片段长度主要分布在700—2000bp，文库重组率为87．5％。结果表明，该文库质量较好，可用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验，本研究为开展病毒与寄主互作的研究奠定基础。; 谭老喜张雨良周朋章绍延王健华张秀春刘志昕; 关键词：香蕉束顶病毒香蕉叶片

一种BBTV两个DNA2组分的鉴定方法和应用: 本发明提供了一种BBTV两个DNA2组分的鉴定方法，包括：1)取感染BBTV的香蕉待测样品，提取总DNA，PCR扩增；2)将PCR产物连接至质粒载体，提取质粒并对质粒进行NdeI酶切；电泳检测，判定待测样品是否有2种DN...; 余乃通刘志昕熊忠国周朋王健华张雨良张秀春; 文献传递

重结晶法制备次氯血红素被引量：1: 2013年; 以氯化血红素为原料,经间苯二酚还原,合成了次氯血红素.采用多次重结晶方法,使所得的次氯血红素质量分数大于95%,收率大于85%.; 修志明林琳周朋王丽萍; 关键词：血红素重结晶

菠萝凋萎相关病毒-1实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用被引量：3: 2014年; 菠萝凋萎相关病毒-1(Pineapple mealybug wilt associated virus-1,PMWaV-1)是田间检出率最高的菠萝凋萎病毒。本研究根据PMWaV-1CP基因保守序列设计特异性TaqMan探针和引物,建立并优化了PMWaV-1实时荧光定量RT-PCR检测方法。优化后的反应体系制备的标准曲线为y=-3.307×log x+38.18,相关系数r2为0.998。试验结果表明,该方法能特异性地检测PMWaV-1,对PMWaV-2、3和阴性对照均无反应;最低检测限达到40拷贝。重复性试验表明批内和批间变异系数均小于1.98%,是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性较好的PMWaV-1定量检测方法。样品检测结果表明PMWaV-1在菠萝植株老叶、嫩叶和吸芽中的病毒含量呈递减趋势。; 胡加谊罗志文李向宏范鸿雁周朋章绍延张治礼刘志昕何凡; 关键词：TAQMAN探针实时荧光定量RT-PCR

辣椒环斑病毒提纯及抗血清制备被引量：2: 2013年; 为获得高效、灵敏的辣椒环斑病毒(Chilli ringspot virus,ChiRSV)多克隆抗体,通过差速离心、密度梯度离心等方法首次对辣椒环斑病毒进行了分离纯化,并将获得的高纯度病毒粒子用于免疫新西兰大白兔,制备了该病毒的多克隆抗血清。获得的抗血清经间接法酶联免疫吸附测定(ID-ELISA),效价高达1∶125 000,且特异性高,与黄灯笼辣椒中另一种亲缘关系很近的同属病毒辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)不发生血清交叉反应、可有效鉴别这2种Potyvirus病毒。获得的抗血清可用于ChiRSV的检测及后续实验,最适工作浓度在1∶5 000～1∶25 000之间。; 章绍延王健华谭老喜周朋张雨良刘志昕; 关键词：提纯多克隆抗体酶联免疫吸附测定