章绍延
- 作品数：24 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项海南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学电子电信更多>>
- 海南辣椒病毒种类调查及分子鉴定
- 辣椒是海南冬季瓜菜主要产业之一,也是南菜北运蔬菜的主要品种之一。病毒病的发生制约海南辣椒种植业的发展。为此,我们对海南辣椒病毒病的发生情况进行调查。通过RT-PCR方法对采集的114份疑似病毒辣椒样品进行了检测,共鉴定出...
- 余乃通梁洁章绍延王健华刘志昕
- 侵染多种病毒的辣椒cDNA文库构建及评价
- 辣椒是一种重要的蔬菜作物,生产上易受病毒病的影响.为了研究病毒与寄主互作的分子机制,本研究以感染多种病毒(至少包含2种Potyvirus和1种Tomovirus)的辣椒样品为材料,提取了包含根、茎、叶、花、果实、种子在内...
- 章绍延王健华谭老喜周朋张秀春张雨良刘志昕
- 关键词：辣椒POTYVIRUS酵母双杂交CDNA文库
- 辣椒环斑病毒分子检测方法的建立及应用被引量：8
- 2012年
- 辣椒环斑病毒(Chilli ringspot virus,ChiRSV)是2007年在辣椒上发现的病毒新种,是马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的确定种。笔者于2009年首次在海南黄灯笼辣椒上检测发现ChiRSV。根据ChiRSV保守区域设计和筛选PCR特异引物,优化退火温度,对PCR产物进行序列测定,建立了ChiRSV的RT-PCR检测方法。通过灵敏度测定,结果表明该方法最低可检出12.5 pg病毒RNA,灵敏度高。通过对来自海南田间的疑似辣椒病样的RT-PCR检测,证实了该方法有良好的反应特异性,亦表明ChiRSV可能已在海南扩散。
- 王健华章绍延龚殿张雨良刘志昕
- 关键词：分子检测黄灯笼辣椒
- 中国海南野番茄上的一种新病毒-野番茄花叶病毒
- 2015年
- [目的]鉴定引起海南水茄叶片呈典型皱缩和轻微花叶症状的病原物。[方法]对该病样提取总RNA,反转录成第一链c DNA,然后设计WTMV(Wild tomato mosaic virus)cp基因的特异引物,再利用常规PCR方法鉴定其病原是否为WTMV。[结果]通过PCR扩增获得一段约900 bp的DNA序列,包含WTMV全部CP(813 bp)蛋白基因编码区。分析表明该片段编码270个氨基酸,与WTMV-Laichua分离物核酸序列同源性为89%,氨基酸序列同源性为94%,且在所有的WTMV分离物中保守,可形成一个小的group。与其它马铃薯Y病毒属病毒的同源关系依次是PVMV、Chi VMV-Ⅰ、其它16个potyviruses(包括8个属于Chi VMV-Ⅱ的Chi VMV)。[结论]确定了引起海南水茄叶片皱缩和轻微花叶症状的病原物为野番茄花叶病毒(WTMV)。海南WTMV该分离物CP蛋白基因的Gen Bank登录号为KR781519。据我们所知,这是国内首次发现WTMV自然侵染水茄。
- 张真章绍延余乃通王健华龚殿刘志昕
- 关键词：反转录PCR番茄花叶病毒
- 一种简并引物及利用该简并引物检测马铃薯Y病毒属病毒的方法
- 本发明公开了一种简并引物，其由正向引物和反向引物组成，正向引物的核苷酸序列为：5’-GTITGYGTKGAYGAYTTYAAYAA-3’；反向引物的核苷酸序列为：5’-GTRTGBCKYTCIGTRTYYTC-3’；其中...
- 章绍延王健华刘志昕张雨良余乃通张秀春周朋梁洁
- 文献传递
- 香蕉束顶病毒Haikou2分离物DNA2编码框原核表达及抗血清制备
- 2012年
- 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产。BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究。本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2 ORF,将其构建到pET32a载体中,进行原核表达和抗血清制备。结果表明重组表达载体pET32a-DNA2ORF在表达菌Transetta(DE3)中表达一个约21 ku的特异融合蛋白,通过超声波破碎仪破碎细胞和诱导条件优化,分析表明,该蛋白主要以可溶形式存在,最佳表达条件为30℃、1.0 mmol/L IPTG诱导3 h。融合蛋白经过Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化,免疫家兔制备出抗血清。Western blot实验表明抗血清具有特异性;酶联法(ID-ELISA)测定表明,抗血清效价达到25 000,能够检测出香蕉汁液中加入的0.954μg/mL浓度的表达纯化蛋白。
- 谭老喜王洪星张雨良王健华章绍延周朋余乃通刘志昕
- 关键词：原核表达抗血清制备
- 辣椒环斑病毒提纯及抗血清制备被引量：2
- 2013年
- 为获得高效、灵敏的辣椒环斑病毒(Chilli ringspot virus,ChiRSV)多克隆抗体,通过差速离心、密度梯度离心等方法首次对辣椒环斑病毒进行了分离纯化,并将获得的高纯度病毒粒子用于免疫新西兰大白兔,制备了该病毒的多克隆抗血清。获得的抗血清经间接法酶联免疫吸附测定(ID-ELISA),效价高达1∶125 000,且特异性高,与黄灯笼辣椒中另一种亲缘关系很近的同属病毒辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)不发生血清交叉反应、可有效鉴别这2种Potyvirus病毒。获得的抗血清可用于ChiRSV的检测及后续实验,最适工作浓度在1∶5 000～1∶25 000之间。
- 章绍延王健华谭老喜周朋张雨良刘志昕
- 关键词：提纯多克隆抗体酶联免疫吸附测定
- 一种鉴定辣椒上马铃薯Y病毒属病毒的方法
- 本发明属于病毒分离与鉴定技术领域，具体涉及一种质谱与DNA测序联用鉴定辣椒上马铃薯Y病毒属（<I>Potyvirus</I>）具体病毒种类的方法。该方法使用时包括：提取病毒、电镜观察、电泳并染色、质谱分析、DNA测序、结...
- 余乃通刘志昕章绍延王健华周琴张雨良张秀春
- 文献传递
- 应用多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR检测甘蔗黄叶病毒和高粱花叶病毒被引量：4
- 2012年
- 基于已报道的甘蔗黄叶病毒(Sugarcane Yellow Leaf Virus,ScYLV)cp基因和高粱花叶病毒(Sorghummosaic virus,SrMV)NSP基因序列设计特异性引物,建立了针对这两种病毒的实时荧光定量PCR(real time-quantitative,RT-qPCR)检测方法。在此基础上,利用扩增产物Tm值的不同,建立了可区分ScYLV与SrMV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR方法,两种病毒扩增产物的Tm值分别为80.8～82.8℃和84.6～86.6℃。检测数据显示:SrMV和ScYLV均有各自的特异性峰值出现,而健康植株无特异性峰值;在单独检测中的检出水平分别可达500和250 copy/μL;两种病毒Tm值的批内变异系数分别为0.03%和0.02%,批间变异系数分别为2.06%和3.12%。综上所述,所建立的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR方法在对以上两种病毒的检测中具有较好的特异性、敏感性和稳定性。
- 王洪星张雨良王健华章绍延熊国如刘志昕
- 关键词：甘蔗黄叶病毒SYBR病毒检测
- 甜椒脉斑驳病毒(PVMV)在海南的发现与检测被引量：5
- 2015年
- 2014年在海南辣椒病毒病调查过程中发现了一种疑似病毒感染的辣椒样品,主要表现为叶片黄化、绿斑驳、叶脆易折断,且在田间发生较多。利用马铃薯Y病毒属的简并引物对其叶片总RNA进行RT-PCR检测,并将约1 700 bp目的片段克隆到p MD18-T载体上进行测序和BLAST分析。结果表明:该条带序列(包含部分NIb和部分cp基因)与已收录的甜椒脉斑驳病毒(Pepper veinal mottle virus,PVMV)(Gen Bank登录号:FM202327)序列相似性最高,达99%。设计cp基因的特异引物,对上述样品进行cp基因扩增并构建以cp基因序列为基础的系统进化树,发现海南辣椒上的PVMV与台湾的PVMV分离物ns1株同源性最高。田间检测结果表明:海南黄灯笼辣椒上PVMV的检出率高达74.07%,说明PVMV可能成为海南辣椒生产上的潜在威胁。
- 梁洁王健华章绍延余乃通张雨良王祥刘志昕
- 关键词：辣椒病毒病
