- 慢病毒介导p38MAPK基因沉默对高糖诱导成骨细胞凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察p38丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）在高糖诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用，并探讨其对凋亡相关信号分子caspase-3、bax及bcl-2表达的影响。方法构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体，将体外培养的MC3T3-El成骨细胞分为正常对照组（A组）、高糖组（B组）、p38MAPK-hRNA慢病毒转染组（c组）、信号转导阻断剂组（D组）和尢关shRNA转染组（E组）。RT-PCR检测细胞p38MAPKmRNA的表达，流式细胞术检测细胞凋亡，Western印迹检测p38MAPK、p-p38MAPK、caspase-3、bax、bcl-2蛋白水平，透射电镜观察细胞超微结构。结果构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体，并成功导入MC3T3-E1成骨细胞。与高糖组和无关转染组相比，p38MAPK-shRNA转染能显著抑制高糖诱导的MC3T3-El细胞p38MAPK过度活化，明显减少细胞的凋亡（P〈0．01）；同时，p38MAPK-shRNA转染及p38MAPK阻断剂明显降低MC3T3-E1细胞中p38MAPK、p-p38MAPK、caspase-3及促凋亡基因bax蛋白表达，上调捌亡抑制基因bcl-2，与高糖组和无关转染组相比，差异有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05）。结论慢病毒介导p38MAPK靶向RNAT扰可通过抑制p38MAPK信号通路的活化，降低p-p38MAPK、caspase-3、bax表达，上凋bcl-2表达，最终抑制高糖所诱导的MC3T3-E1成骨细胞的凋亡。
- 冯正平邓华聪姜蓉杜佳陈丹燕梁小燕
- 关键词：MC3T3-E1成骨细胞高糖细胞凋亡
- 多花黄精不同炮制阶段微量元素含量变化研究方法
- 本发明申请属于中药制备技术领域，具体公开了一种多花黄精不同炮制阶段微量元素含量变化研究方法，包括以下步骤：(1)将取多花黄精清洗干净，清洗干净后挑选杂质，除去坏的部分以及茎和须根；最后将处理干净的鲜多花黄精切成片，70℃...
- 何先元伍小芳喻录容孟瑞梁敏雁梁小燕
- 文献传递
- p38MAPK基因RNAi慢病毒载体的构建及在MC3T3-E1细胞的表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建小鼠p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,观察其对MC3T3-E1成骨细胞p38MAPK表达及细胞凋亡的影响。方法设计并合成3对互补的针对小鼠p38MAPK mRNA的oligoDNA片段,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ酶切后的载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。重组质粒与慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装产生慢病毒,流式细胞仪检测病毒滴度,p38MAPK-shRNA慢病毒载体转染体外培养MC3T3-E1细胞,荧光定量PCR检测MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达,进行p38MAPK干扰有效靶点的筛选。22.2 mol/L葡萄糖刺激培养MC3T3-E1细胞7 d,Westernblot检测MC3T3-E1细胞p38MAPK蛋白的表达,流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡。结果酶切和测序均证实各重组质粒核苷酸序列插入正确,所得质粒分别命名为p38MAPK-shRNA1、p38MAPK-shRNA2、p38MAPK-shRNA3,流式细胞仪测定病毒滴度分别为2.4×108、2.8×108、2.5×108TU/ml。p38MAPK-shRNA转染MC3T3-E1细胞效率达到74%以上,RT-PCR检测结果显示,各p38MAPK-shRNA转染组MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达较正常对照组分别下降了78.8%、84.3%和60.2%(P<0.01),其中以p38MAPK-shRNA2的干扰效率最高。Western blot检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组、空载体转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达明显增加(P<0.01)。p38MAPK-shRNA慢病毒转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达水平较高糖组明显下调(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率显著增加(P<0.01);p38MAPK-shRNA慢病毒转染组以及p38MAPK信号转导阻断剂组较高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论成功构建了靶向p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,其能有效抑制MC3T3-E1细胞p38MAPK基因表达,减少高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡。
- 冯正平邓华聪姜蓉杜佳陈丹燕梁小燕
- 关键词：P38MAPK成骨细胞RNA干扰慢病毒属
- 国产埃索美拉唑肠溶胶囊治疗十二指肠溃疡随机、双盲、平行对照研究
- 目的：通过与埃索美拉唑镁肠溶片(耐信)比较，观察国产埃索美拉唑肠溶胶囊治疗十二指肠溃疡(DU)及根除幽门螺杆菌(H.pylori)的疗效和安全性。
方法：采用随机、双盲双模拟、阳性药物对照研究方法。60例经胃镜...
- 梁小燕
- 关键词：埃索美拉唑肠溶胶囊十二指肠溃疡幽门螺杆菌
- 文献传递
