汪晶
- 作品数：3 被引量：14H指数：1
- 供职机构：南京大学生命科学学院分子医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项教育部“优秀青年教师资助计划”更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定被引量：12
- 2004年
- 用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly＿Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿β＿naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx＿hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.
- 孙自勇陈均勇陈新园汪晶田鹏鹏吴盛刘建宁
- 关键词：肠激酶毕赤酵母分泌表达纯化免疫印迹
- 重组人甲状旁腺激素(1-34)在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：1
- 2004年
- 将化学合成的rhPTH(1 34)基因用PCR扩增后,克隆至表达载体pET＿35b(+),使rhPTH(1 34)融合于纤维素结合结构域(CBDclos)的羧基端,并得到高效表达.融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后,经FactorXa裂解释放出rhPTH(1 34),再通过纤维素树脂亲和层析、C4反向高效液相色谱纯化得到rhPTH(1 34)纯品.每升培养液可获取3mg高纯度的rhPTH(1 34).经质谱测定,所得样品的分子量为4117.0Da,与rhPTH(1 34)理论分子量一致.
- 陈均勇陈新园孙自勇刘莉莉朱镇华汪晶吴盛王石泉刘建宁
- 关键词：甲状旁腺激素大肠杆菌纯化FACTOR
- 重组人尿激酶原氨基末端片段的制备及活性测定被引量：1
- 2004年
- 尿激酶原的N 末端135个氨基酸片段包含了表皮生长因子结构域和环柄结构域,参与了尿激酶原和其受体的结合以及尿激酶原诱导的化学趋化活性.利用RT PCR,从人脐带静脉内皮细胞中克隆ATF基因.将ATF基因插入pET 29a(+)中构建表达质粒pET 29a(+)/ATF,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达及纯化后,从每升培养液中获得15mgrhATF,其纯度超过95%.活性测定结果表明rhATF能够阻断尿激酶原与尿激酶受体的结合,并能抑制尿激酶对纤溶酶原以及纤溶酶对尿激酶原的激活.
- 汪晶陈新园孙自勇姚宏伟陈均勇刘建宁
- 关键词：ATF尿激酶受体纯化活性测定多肽
