赵宁伟
- 作品数：4 被引量：46H指数：3
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生生物学化学工程更多>>
- 国产717阴离子树脂对酶法合成L-谷氨酰胺的分离与纯化被引量：2
- 2008年
- 目的:从酶法反应液中分离和纯化谷氨酰胺,并为工业化生产谷氨酰胺提供一定的依据;方法:根据谷氨酸和谷氨酰胺电离常数的差异,采用国产717强碱性阴离子Cl-型拄,经预处理,离交分离,浓缩结晶,75%乙醇洗涤并干燥;结果:反应液中谷氨酰胺总提取收率为60.3%,纯度为97%;结论:此方法能有效地降低纯化的成本,并维持较高得率和纯率。
- 赵宁伟胥俊峰贾晓鹤殷志敏
- 关键词：谷氨酰胺离子交换纯化
- 大肠杆菌γ-ggt原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt的构建及其蛋白表达被引量：3
- 2007年
- 构建大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt及表达与鉴定目的蛋白,为进一步利用该酶催化合成茶氨酸等目的产物奠定了基础。以大肠杆菌DH5α总DNA为模板,用PCR法在γ-ggt编码序列上下游引入酶切位点并扩增出γ-谷氨酰转肽酶基因;将γ-ggt编码序列克隆入原核表达载体pGEX-4T-1的相应酶切位点;用PCR鉴定重组质粒pGEX-4T-1/γ-ggt,并对插入基因片断测序;重组质粒pGEX-4T-1/γ-ggt转化大肠杆菌BL21(DE3),经乳糖诱导后用SDS-PAGE分析表达产物,并经Westernblot鉴定。获得大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶基因,并成功构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化有pGEX-4T-1/γ-ggt工程菌BL21(DE3)经1 g/L乳糖诱导1 h后即开始表达目的蛋白,在诱导6 h后表达蛋白量达到最高,随着时间的延长,目的蛋白没有被降解,此蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot鉴定了此目的蛋白。成功构建了大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt,并进行了目的蛋白的鉴定。
- 胥俊峰单建华赵宁伟殷志敏
- 关键词：Γ-谷氨酰转肽酶
- 关于IL-10抗炎机制的研究被引量：25
- 2007年
- IL-10属于细胞因子中的干扰素家族,研究发现内源性和外源性的IL-10均能在转录水平上强烈抑制IL-1、IL-6、IL-8肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、GM-CSF、G-CSF的合成.近十年来,研究认为IL-10主要是通过抑制IKK的激活或NF-κB的DNA结合能力,从而抑制NF-κB启动相关前炎症因子基因的转录.但同时,国外也报道过IL-10抑制炎症细胞因子如TNF-α的合成可能与NF-κB无关,而与如AP-1,细胞因子信号抑制子-3(SOCS-3)等其他蛋白相关.另一方面,最近随着对NOD家族成员NOD2及其同源异构体的深入研究,有证据表明IL-10对NF-κB的作用可能不仅仅局限在IKK(IκB的激酶)及其下游的水平上,而在上游也会造成影响.
- 赵宁伟殷志敏
- 关键词：IL-10IKKNF-ΚBNOD2
- 生物转化法应用重组谷氨酰转肽酶合成L-茶氨酸被引量：17
- 2008年
- 构建了一个高效表达大肠杆菌来源的GGT重组质粒pET28a-GGT并转化E.coliBL21(DE3),工程菌株经0.2mmol/LIPTG,20℃诱导表达8h,粗酶液的酶活达到1.5U/mL,大约是出发菌株E.coliK-12的26倍。工程菌粗酶液以267mmol/LL-谷氨酰胺和2.0mol/L乙胺作底物,37℃、pH10.0条件下反应4h,L-茶氨酸的生成量达到26.9g/L,L-谷氨酰胺的转化率为57.8%。
- 贾晓鹤陈莉赵宁伟殷志敏
- 关键词：GGT工程菌酶法合成
