- 中国北方汉族人基质金属蛋白酶12基因多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性的关系被引量：8
- 2004年
- 目的 :研究中国北方汉族正常人、吸烟慢性阻塞性肺疾病 (COPD)患者、吸烟非COPD患者基质金属蛋白酶 12 82位点等位基因和基因型分布频率 ,初步探讨此基因多态性对COPD发病的影响。方法 :应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法 ,检测 10 0例北方汉族正常人 ,14 8例吸烟COPD患者 ,97例健康吸烟者基质金属蛋白酶 12 82位点等位基因和基因型。结果 :14 8例吸烟COPD患者基质金属蛋白酶 12 82位点基因型AA、AG及GG频率分别为 95 0 4 %、4 96 %及 0 ,等位基因A、G频率分别为97 6 4 %、2 36 % ,与 10 0例正常人、97例健康吸烟者的分布比较差异无显著性。结论 :在中国北方汉族人中 ,MMP12基因A 82G等位基因多态性与我国北方汉族吸烟COPD发病无关。
- 张荣葆何权瀛张志欣单小燕李伟杨瑞红刘玉京李雪亮
- 关键词：基质金属蛋白酶12基因多态性慢性阻塞性肺疾病COPD
- 通过引物设计和提高退火温度提高实时定量PCR检测microRNA的特异性(英文)被引量：6
- 2009年
- 目的:了解因某些microRNA(miRNA)家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法:采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力。此外,设计了10组3′末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异。结果:提高退火温度12℃～14℃将最大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3′末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3′末端置于miRNA第18～20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确。结论:精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性。
- 何湘君张旗刘玉京潘秀英
- 关键词：微RNAS逆转录聚合酶链反应DNA引物
- HRP-HBVDNA探针在临检应用中的研究被引量：4
- 2000年
- 本文介绍了一种简便的检测血清ＨＢＶＤＮＡ 的方法。参照Ｒｅｎｚ 等人的标记方法，构建了直接酶标ＨＲＰＨＢＶＤＮＡ 探针。此探针经与固定在硝酸纤维素滤膜上的血清靶ＤＮＡ 杂交后，可通过化学发光自显影检测技术观察结果。敏感度可检测０－１ｐｇ 靶ＤＮＡ，相当于同位素探针的灵敏度。对６３ 份ＨＢｓＡｇ ＨＢｅＡｇ 和ＡｎｔｉＨＢｃ ＥＬＩＳＡ 阳性血清以及２４ 份ＨＢｓＡｇ ＡｎｔｉＨＢｃ 阳性，ＨｂｅＡｇ 阴性血清用ＨＲＰＨＢＶ ＤＮＡ 探针进行检测，结果探针ＨＢＶ ＤＮＡ 阳性率分别为１００ ％ （６３） 和５８ ％ （１４） ；对５０ 份ＨＢｓＡｇ，ＥＬＩＳＡ 阴性和ＡＬＴ 正常的血清，探针ＨＢＶ ＤＮＡ 全部阴性。实验结果表明本方法具有很大的推广应用价值。
- 兰荣良刘玉京陈玉芳乔虹唐焰
- 关键词：乙型肝炎
- 中国北方汉族人基质金属蛋白酶1、9、12基因多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性的研究被引量：8
- 2005年
- 目的探讨基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)基因多态性与慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关系。方法采用病例对照研究方法,收集147例吸烟COPD患者和120 名吸烟非COPD正常对照。调查研究对象的性别、年龄、吸烟史、职业粉尘接触史、临床症状、体格检查、测定肺通气功能和支气管舒张试验。应用聚合酶链反应、限制性内切酶分析法比较MMP-9 (-1562 C/T)、MMP-1(-1607 1G/2G)、MMP—12(-82 A/G)、MMP-12(-357 Asn/Ser)基因多态性在COPD 组和吸烟非COPD对照组的差异。结果MMP-12基因型Asn/Asn和CT/AsnAsn可增加患COPD的危险性。OR值分别为2.361(95%CI:1.369～4.017)和2.433(95%CI:1.159～5.342);CC/1G1G/ SerSer对COPD患病有保护作用。OR值为0.457(95%CI:0.231～0.911)。结论CT和AsnAsn两基因型同时存在,可增加COPD的易感性,CC、GG和SerSer三基因型同时存在对患COPD有防护作用;多基因联合作用对多基因遗传病发病的影响比单个易感基因的作用更重要。
- 张荣葆何权瀛杨瑞红卢冰冰刘玉京
- 关键词：慢性阻塞性肺疾病基质金属蛋白酶基因多态性
- gp96多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对食管腺癌细胞的免疫杀伤作用被引量：5
- 2004年
- 目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;台盼蓝拒染法测定淋巴细胞增殖率 ;ELISA方法检测细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)培养上清液的γ干扰素 (IFN γ)含量 ,MTT法检测CTL对靶细胞SEG 1的杀伤率。结果 :5 5g瘤组织提取纯化gp96蛋白12 0 μg ;单独DC、单独gp96及gp96 DC均能刺激淋巴细胞增殖 ,产生CTL ,释放IFN γ ,对靶细胞SEG 1均显示一定的杀伤作用 ,以gp96 DC的作用最明显 ,在效靶比 4 0∶1时 ,杀伤率为 6 8%。单独DC诱导的CTL对SEG 1、K5 6 2的杀伤作用与非抗原刺激的淋巴细胞比较 ,统计学差异无显著性。结论 :肿瘤来源的热休克蛋白gp96可使DC具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力 ,所产生的CTL对靶肿瘤细胞有明显的特异杀伤作用。
- 马丽萍潘秀英李娜刘玉京陈晓欣
- 关键词：热休克蛋白GP96杀伤作用细胞毒性T淋巴细胞食管腺癌介导
- p16基因抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的体外和体内实验研究
- 2000年
- 目的 :探讨p16基因对乳腺癌的治疗作用 ,为乳腺癌 p16的基因治疗提供实验依据。 方法 :构建p16的逆转录病毒载体 pLMSN ,包装成病毒后 ,体外转导p16基因纯合性缺失的乳腺癌细胞株MCF 7,Westernblot证明该基因在转导后的MCF 7细胞中有表达 ,用活细胞计数、流式细胞仪、形态观察等方法来检测 p16表达在体外对MCF 7细胞生物学行为的影响。进行SCID鼠体内成瘤实验和逆转录病毒直接注射SCID鼠乳腺癌模型的治疗性实验来观察 p16对乳腺癌细胞的体内抑制作用。 结果 :外源性 p16在MCF 7细胞中表达后 ,体外细胞发生形态改变 ,生长明显慢于对照细胞 ,流式细胞计数显示G1期细胞增多 ,细胞在SCID鼠体内成瘤性下降 ,p16逆转录病毒直接注射有使SCID鼠乳腺肿瘤缩小的趋势。结论
- 武莎莎马丽萍潘秀英刘玉京王申五
- 关键词：乳腺癌P16基因基因治疗
- MicroRNAs在唐氏综合征模型小鼠海马中的异常表达被引量：3
- 2010年
- 目的:寻找唐氏综合征模型鼠Ts65Dn和对照二倍体组小鼠海马组织中差异表达的microRNAs。方法:从小鼠的海马组织中提取小分子RNA,采用RNA加尾和引物延伸RT-PCR法检测microRNAs。通过geNorm软件和Normfinder软件分析选择最佳的内参照基因,将每种microRNAs按其引物Tm值排成阵列,用梯度实时PCR仪在不同的退火温度扩增,并计算每种相对于microRNAs内参照基因的表达量。结果:geNorm和Normfinder两种方法均选定miR-27a为最稳定的内参照基因,共检测了52种microRNAs,其中miR-33和miR-19a在Ts65Dn小鼠海马组织中表达显著下调,miR-130在Ts65Dn小鼠海马组织中表达显著上调,小鼠16号染色体三体区段包含的miR-802在Ts65Dn小鼠和对照二倍体小鼠海马组织中表达量均低,差异没有统计学意义。结论:MicroRNAs在Ts65Dn小鼠海马组织中的异常表达可能与唐氏综合征脑发育不良有关。
- 张育军何湘君刘玉京张旗
- 关键词：微RNAS唐氏综合征基因表达逆转录聚合酶链反应小鼠
- 逆转录病毒介导的人卵巢癌p53基因治疗体外及小鼠体内实验研究被引量：5
- 2000年
- 目的 :评价人卵巢癌的 p5 3基因治疗效果。 方法 :用携带人野生型 p5 3的逆转录病毒转导 p5 3蛋白表达缺如的人卵巢癌细胞系SK OV 3,通过体外及小鼠体内实验研究转基因的表达及对肿瘤的抑制作用。结果 :逆转录病毒介导的 p5 3基因能够在体外及小鼠体内人卵巢癌细胞SK OV 3中表达 ,并对人卵巢癌生长有抑制作用。体外抑制率为 5 7%～ 88% ;对体内肿瘤抑制率为 40 %。结论 :逆转录病毒介导的外源野生型p5 3能够抑制人卵巢癌生长 。
- 马丽萍潘秀英刘玉京李娜王申五
- 关键词：卵巢癌基因治疗逆转录病毒介导
- 实时定量PCR阵列检测小鼠大脑组织microRNA表达谱被引量：5
- 2009年
- 目的:分析小鼠大脑组织microRNA(miRNA)表达谱,为研究特定miRNA及其靶基因、中枢神经系统miRNA相关的调节网络,以及miRNA在中枢神经系统疾病中的作用提供参考。方法:采用RNA加尾和引物延伸序列RT-PCR法,将精心设计的特异引物按Tm值排成阵列,用梯度实时PCR仪在不同的退火温度扩增每一个miRNA,并计算出每种miRNA相对于内参的表达量。结果:共检测了285个miRNA,阳性者260个,它们丰度不同,频数分布图大致呈正态。大部分miRNA的表达水平与已发表的芯片结果一致,而阳性率高于芯片结果。源自同一miRNA前体的2个成熟miRNA表达量,有些相差无几,有些则相差甚多。同簇相邻miRNA的丰度有些相近,有些则差异明显,提示miRNA转录后的归宿决定其丰度。结论:采用实时定量PCR阵列法,分析了小鼠大脑组织的miRNA表达谱,特别是获得了一些低丰度miRNA在小鼠大脑中表达的数据,这将有助于对这些低丰度miRNA的功能研究。
- 张旗何湘君刘玉京马丽萍潘秀英
- 关键词：微RNAS逆转录聚合酶链反应小鼠
- Apoptin引起肿瘤细胞G_2-M阻滞被引量：7
- 2004年
- 目的 :研究凋亡素 (apoptin)特异诱导肿瘤细胞凋亡的作用 ,探讨其用于肿瘤治疗的可能性。方法 :用PCR技术克隆了apoptin基因 ,将其插入预先装有FLAG标签的真核表达质粒pcDNA3.1中 ,并构建了带有apoptin基因的腺病毒载体 ,观察转染pcDNA3.1/FLAG/apoptin和 /或Ad/apoptin重组腺病毒感染后apoptin在几种细胞中的表达及细胞形态的改变 ,用流式细胞术分析PI染色后Ad/apoptin感染细胞的DNA含量变化。结果 :apoptin在Hela、Bcap37、A5 4 9、HepG2、SKOV3等肿瘤细胞核中表达 ,apoptin重组腺病毒感染后细胞核染色质呈颗粒状 ,最后凝聚成不规则大块并出现核固缩。正向和反向插入apoptin的重组腺病毒均引起G2 M细胞增多 ,但前者引起G2 M阻滞更为显著 ,需要的感染复数 (MOI)也较低。结论 :apoptin可引起肿瘤细胞周期G2 M阻滞和染色质凝聚。
- 何湘君尚世彤刘玉京张旗王申五
- 关键词：APOPTIN肿瘤细胞染色质鸡贫血病毒凋亡素
