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一种应用同源重组法获得转基因柞蚕生产目的蛋白的方法: 本发明属于生物工程领域。涉及一种利用同源重组序列组建转基因柞蚕基因表达载体生产外源基因产物的方法。特征是以柞蚕染色体上的线性DNA片段为同源重组序列组建柞蚕基因转移表达载体，将外源基因克隆到柞蚕基因转移表达载体上，重组质...; 安利佳李文利金礼吉张波范琦王林美李树英; 文献传递

Cloning of A Full-Length cDNA Encoding 4-Coumarate:CoA Ligase of Amorpha fruticosa by PCR-Based Methods被引量：2: 2002年; An Amorpha fruticosa cDNA encoding 4 coumarate:CoA ligase (4CL), a key enzyme of phenylpropanoid metabolism related to lignin forming, was cloned by degenerating oligo primed polymerase chain reaction (PCR) and rapid amplification of cDNA end (RACE) PCR. We designed 5′RACE primers based on 4CLA1 fragment which obtained from degenerate PCR. Inverse PCR and nested PCR enabled cloning of the remainder fragments of the gene included 5′ and 3′ end sequence. The ORF encodes a polypeptide of 540 amino acids. The predicted amino acid sequence exhibits significant homology with those of other cloned 4CL genes, contain domains typical of predicted 4CL proteins, in particular a postulated AMP binding site, catalytic domain, and conserved Cys residues.; 刘文哲胡学军高晓蓉袁晓东刘哲范琦安利佳; 关键词：LIGNIN

一种基于3D打印特形功能体的血液基因组DNA提取方法及其应用试剂盒: 本发明公开了一种基于3D打印特形功能体的血液基因组DNA提取方法及其应用试剂盒，属于核酸提取分离领域。本发明用裂解液对样本进行裂解处理，用3D打印特形功能体进行核酸的结合、分离与纯化。该方法通过手持或机器持在裂解液、清洗...; 李佩佩姜晓滨李蒙航袁志杰范琦

紫穗槐4-香豆酸:CoA连接酶基因的克隆和结构分析被引量：5: 2002年; 该文利用简并寡核苷酸PCR法结合cDNA末端快速扩增PCR法从紫穗槐 (Amorphafruticosa)茎中克隆了木质素生物合成过程中重要的酶 4 香豆酸 :CoA连接酶 (4CL)的cDNA全长序列 ,避免了复杂的构建、筛选cDNA文库的过程 .所获得的全长 4CLAcDNA ,有 1911个碱基 ,包含一个完整的阅读框架 ,编码 5 4 0个氨基酸 .氨基酸序列同源性分析表明 4CLA是典型的 4CL蛋白 ,含有预计的AMP binding位点 ,接触反应区和保守的Cys.; 刘文哲胡学军高晓蓉袁晓东刘哲范琦安利佳; 关键词：基因克隆紫穗槐 4-香豆酸木质素 PCR

反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列被引量：16: 2001年; 采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点 ,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。; 李秋莉高晓蓉范琦袁晓东刘大伟安利佳; 关键词：辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶基因工程 RACE 反转录

一种基于3D打印特形功能体的血液基因组DNA提取方法及其应用试剂盒: 本发明公开了一种基于3D打印特形功能体的血液基因组DNA提取方法及其应用试剂盒，属于核酸提取分离领域。本发明用裂解液对样本进行裂解处理，用3D打印特形功能体进行核酸的结合、分离与纯化。该方法通过手持或机器持在裂解液、清洗...; 李佩佩姜晓滨李蒙航袁志杰范琦; 文献传递

柞蚕丝素基因5′端部分序列的克隆及结构分析被引量：6: 2002年; 利用PCR技术从中国柞蚕品种 74 1中扩增并克隆出柞蚕丝素基因 5′端部分片段 ,它由CAAT盒、TATA盒 (Hognessbox)、primtranscript、丝素蛋白的起始密码子ATG和部分结构基因及内含子组成。通过与天蚕丝素基因的 5′端序列进行比较 ,发现 12 4～ 5 0 6bp、796～ 1194bp、12 16～ 12 98bp同源性高 ,同源率分别为91.6 %、95 %、95 %。将柞蚕丝素基因 5′端的CAAT盒、TATA盒、primtranscript序列与KikuchiY所测家蚕、HuiCC所测家蚕及家蚕P2 5蛋白、天蚕丝素基因相应序列进行比较 ,发现柞蚕与天蚕相应序列的同源率远高于家蚕。从序列中可以看出 :若转录起始点第一个核苷酸标为 +1,则TATA盒位于 - 2 5处 ;CAAT盒位于 - 70处。; 李文利金礼吉范琦安利佳; 关键词：柞蚕丝丝素基因柞蚕启动子克隆

玉米核糖体失活蛋白基因的克隆及序列分析被引量：9: 2000年; 将提取的玉米RNA反转录成cDNA ,以此为模板 ,合成特异性引物 ,应用多聚酶链式反应 (PCR)技术扩增出目的片段。对PCR片段直接进行序列分析 ,测定并克隆玉米的核糖体失活蛋白 (RIP)基因。序列分析表明 ,已测定的玉米RIP基因序列长为 983bp ,其中编码区长 82 8bp ,共编码有 2 75个氨基酸和一个终止密码子 ,GC含量为5 8 3%。与已发表的序列相比较其核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性分别为 98 4%和 97 4%。; 范琦高晓蓉李文利金礼吉安利佳; 关键词：RIP 基因克隆转基因

β-1,3葡聚糖酶与糖体失活蛋白融合基因的制备及表达载体的构建被引量：5: 2001年; 将大豆的 β - 1,3葡聚糖酶基因与玉米的核糖体失活蛋白基因通过一个 6个氨基酸的柔性短肽链连接起来 ,形成 1个融合蛋白。其中编码区基因长 1830bp ,共编码 60 9个氨基酸和 1个终止密码子。经过使用蛋白质分析软件Antheprot4 .3和Prosis(v5.0 0 )对融合蛋白的二级结构、理化特性、潜在信号肽断裂位点等方面进行分析表明 :融合蛋白较好的保持了原来的两个蛋白的各项理化特性 ,维持了两种蛋白的二级结构。将此基因克隆到质粒PBI12 1上 ,构建成植物表达载体PBI/GR。; 李文利范琦高晓蓉迟彦安利佳; 关键词：核糖体失活蛋白融合基因植物

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范琦