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结核分枝杆菌RD5区编码蛋白在结核病血清学诊断中的应用: 赵俊伟张苗苗玄松花周业成郭晓奎张舒林

巢式RT-PCR技术检测肺癌患者外周血及淋巴结中微量转移癌细胞被引量：1: 2003年; 目的　建立检测肺癌患者外周血及淋巴结中微转移癌细胞的敏感分子检测方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　采用巢式反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术特异引物扩增细胞角蛋白 19(CK19) m RNA,检测76例肺癌患者外周血及淋巴结中 CK19m RNA的表达情况。结果　 76例肺癌患者中 39例外周血 CK19m RNA阳性 ,阳性率为 5 1.3% (39/ 76 ) ,2 7例肺良性病变中仅 1例阳性 ,阳性率 3.7% ,15例健康对照者均为阴性。全部肺癌患者 15 7枚淋巴结中 CK19m RNA阳性率 38.9% (6 1/ 15 7) ,常规病理方法检测淋巴结阳性率 14 .6 % (2 3/15 7) ,两者相比 ,P<0 .0 5 ;HE染色阴性的 134枚淋巴结中 ,经巢式 RT- PCR技术检测证实存在癌转移的阳性率为 2 8.3% (38/ 134) ,两者相比 ,P<0 .0 5。结论　巢式 RT- PCR技术是一种特异性和敏感性均较高的微量癌细胞转移检测方法。; 杨丽萍王红霞刘旺根王雪萍冯黎张舒林; 关键词：肺癌外周血淋巴结细胞角蛋白19

结核分枝杆菌RD12区T细胞表位分布情况预测及分析被引量：13: 2014年; 目的预测并分析结核分枝杆菌(MTB)RD12区4个抗原的CD4+T和CD8+T细胞表位分布情况。方法在NCBI数据库上查询并获得各个抗原的氨基酸序列,用Blast分析其与MTB复合群及人类蛋白的同源性。利用SYFPEITHI、NETCTL、BIMAS和NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原CD8+T细胞表位的分布情况;利用NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原的CD4+T细胞表位的分布情况。然后,综合CD4与CD8表位预测,筛选出优势表位肽段。结果通过预测与分析,初步筛选出MTB的RD12区4个抗原的CD8+T细胞候选表位16个;CD4+T细胞的强结合候选表位234个,弱结合候选表位505个,综合CD4与CD8表位预测并分析,最终筛选出13个优势表位肽段。结论预测出来的T细胞候选表位将为结核病的特异性诊断及新的抗结核多表位疫苗的研究奠定基础。; 叶娟张舒林刘文第; 关键词：结核分枝杆菌 T细胞表位分析

结核分枝杆菌Rv3914抗原的克隆表达与纯化被引量：1: 2011年; 目的构建结核分枝杆菌Rv3914蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达及纯化,为结核病血清学诊断提供候选抗原。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Rv3914基因片段,插入到pET-28b(+)载体中,构建pET28b-Rv3914重组质粒,转化大肠埃希菌E.coli BL21plysS(DE3),经IPTG诱导表达后,应用Ni-NTA亲和柱纯化重组蛋白。结果 PCR扩增出Rv3914基因序列,重组质粒经测序并经BLAST分析后发现无点突变。pET28b-Rv3914重组质粒在大肠埃希菌E.coli BL21plysS(DE3)中主要以可溶性形式表达,重组蛋白占细胞蛋白总表达量的30%以上,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度超过90%、相对分子质量约为14.7×103的目的蛋白质。结论高纯度结核分枝杆菌Rv3914重组蛋白的获得为研究结核互补特异性抗原组合在结核病血清诊断中的价值奠定了基础。; 陈永金赵俊伟杨红国孙战强余晓丽张舒林; 关键词：结核分枝杆菌克隆纯化

结核分枝杆菌链霉素耐药分离株rpsL基因突变的检测被引量：5: 2000年; 目的　探讨结核分枝杆菌 (结核菌 )对链霉素 (Sm)产生耐药性的分子机制 ,建立直接快速检测结核菌Sm药物敏感性的试验方法。方法　应用聚合酶链反应单链构象多态性 (PCR SSCP)银染分析技术检测 32株结核菌临床分离株的rpsL基因。结果　以结核菌标准株 (H37Rv)为对照 ,32株结核菌临床分离株中 ,10株Sm敏感株的rpsL基因未见SSCP泳动异常 ,2 2株Sm耐药株中 ,16株(72 .7% )的rpsL基因出现SSCP泳动异常。结论　rpsL基因突变是结核菌对链霉素产生耐药性的重要分子机制 ,PCR SSCP银染技术可能成为快速检测结核菌Sm药物敏感性的新方法。; 彭义利王国斌张舒林伍学强高三友张莉孙占强; 关键词：结核分枝杆菌链霉素抗药性 RPSL基因

结核分枝杆菌Rv2991重组蛋白、制备方法及其应用: 本发明公开了一种结核分枝杆菌Rv2991重组蛋白、制备方法及其应用。本发明的结核分枝杆菌Rv2991重组蛋白具有如SEQ？ID？NO:1所示的氨基酸序列。本发明还提供结核分枝杆菌Rv2991重组蛋白的编码核苷酸序列、重组...; 李荣秀张舒林马国荣张康周福强孙战强; 文献传递

结核分枝杆菌Rv3120的重组蛋白、其制备方法及其在细胞免疫诊断中的应用: 本发明提供一种结核分枝杆菌特异性标志物Rv3120的重组蛋白，其具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。本发明还提供所述结核分枝杆菌Rv3120重组蛋白的编码核苷酸序列、所述重组蛋白的制备方法及其用途。本发明基于免...; 张舒林孙战强赵俊伟余晓丽王洪海; 文献传递

血浆外泌体来源的miRNA-323a-3p作为结核病潜在生物标志物的评估被引量：3: 2020年; 目的·研究血浆外泌体来源的microRNA(miRNA),为结核病的诊断寻找潜在标志物。方法·采用卡介苗(Bacille CalmetteGuérin,BCG,即减毒牛分枝结核杆菌)感染人单核细胞白血病细胞(THP-1)来源的巨噬细胞(BCG组),设置未感染细胞为对照组。利用超速离心法获取2组细胞培养上清液中的外泌体,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、蛋白质印迹法进行形态学及蛋白标志物鉴定,并对外泌体进行转录组测序分析。选取测序结果中的3个差异表达miRNAs,就10例结核病患者(结核病组)和8例健康志愿者(健康对照组)的血浆外泌体进行临床验证。通过TargetScan、miRDB和PicTar数据库对存在潜在差异表达的miRNA进行靶基因预测。结果·细胞培养上清液外泌体测序结果显示,与对照组相比,miRNA-323a-3p、miRNA-29a-3p和miRNA-29b-3p在BCG组的表达均有显著差异,而在临床验证中仅有miRNA-323a-3p在2组表达间的差异具有统计学意义(P=0.004);且miRNA-323a-3p在结核患者血浆来源的外泌体中显著下调,与转录组结果一致。结论·血浆外泌体来源的miRNA-323a-3p在结核患者中的表达显著下调,且其靶基因与自噬作用密切相关,有望为结核病的机制研究提供新思路。; 林砺李海波夏凡周计雪郭晓奎张舒林; 关键词：外泌体微小RNA 结核超速离心法

结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rrs基因突变与其耐药水平相关性研究被引量：3: 2014年; 研究武汉地区耐链霉素(SM)结核分枝杆菌的耐药分子机制,进一步研究阐明rrs基因突变与结核分枝杆菌耐链霉素的关系;同时探究武汉地区结核分枝杆菌"北京基因型"菌株的流行趋势,为进一步研究武汉地区耐链霉素菌株rrs基因突变与"北京基因型"的相关性奠定基础。84株结核分枝杆菌中,44株对链霉素耐药,20株耐其它药物,20株对链霉素敏感,采用PCR直接测序法分析链霉素菌株rrs基因突变情况;采用RD105缺失法鉴定84株临床分离菌株中"北京基因型"菌株。结果显示44株SM耐药菌株中,16(36.4%)株检测到rrs基因突变,其中9株1401位点A→G,6株514位点A→C突变,1株1487位点G→A突变;20株耐其它药菌株中1401位点A→G和514位点A→C突变各1株,20株敏感菌株中发现1株1029位点C→T点突变;84株临床分离菌株中有77(91.8%)株"北京基因型"菌株,7株非"北京基因型"菌株。研究表明链霉素耐药菌株rrs基因主要突变位点在514和1401位点,武汉地区"北京基因型"菌株为当地流行的结核分枝杆菌,且SM耐药菌株中突变菌株93.8%(15/16)为"北京基因型","北京基因型"菌株研究及其鉴定是有其科学价值的,值得我们重视。; 陈高瞻芦莲雷航马峻孙战强孙庆文余晓丽张舒林; 关键词：结核分枝杆菌链霉素耐药北京基因型

结核分枝杆菌蛋白Rv0315克隆表达及其抗原性研究: 2012年; 目的评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组Rv0315蛋白，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平，并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白Rv0315，其在E．coliBL21plysS（DE3）中主要以可溶性形式表达，分子量（30．3kDa）与预期相符，ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94．0％（45／48）和35．7％（30／84）。结论重组蛋白Rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。; 陈苏芳周业成赵静赵俊伟吴兴福孙战强玄松花张舒林; 关键词：结核分枝杆菌克隆血清学诊断

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