赵丹丹
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医学院医学检验系更多>>
- 发文基金：湖南省大学生研究性学习与创新性实验计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于miRNA-30的RNAi表达框架的构建及其有效性验证被引量：1
- 2016年
- 目的构建基于人源性miRNA-30,针对EGFP基因的RNAi表达框架并验证其有效性。方法融合PCR构建RNAi表达框架,经凝胶电泳、测序比对及二级结构预测后,将该表达框架与p EGFP-N2质粒共转染A549、HCT116及HEK-293细胞,48 h后倒置荧光显微镜观察EGFP的表达情况并用流式细胞仪检测平均荧光强度。结果凝胶电泳和测序比对均显示RNAi表达框架与设计的相符,二级结构预测显示,新型RNAi表达框架与人源性miRNA-30的二级结构高度相似;共转染该表达框架与p EGFP-N2质粒48 h后,倒置荧光显微镜观察结果显示,3种细胞的荧光强度均明显减弱,流式细胞仪检测结果显示,3种细胞中共转染组与单独转染组相比平均荧光强度的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论新型RNAi表达框架构建成功,且能有效干扰EGFP在A549,HCT116和HEK-293细胞中的表达。
- 李亚红赵丹丹李思佳覃淇邱彤彤彭剑雄
- 关键词：RNAIA549细胞HCT116细胞HEK-293细胞
- miRNA过客链功能研究进展
- 2015年
- 近来研究发现,在基因表达调控过程中,过客链与前导链同样有着重要作用。在Ago蛋白的作用下,过客链不仅能够通过降解或解链的方式促进RISC组装,也同样能与Ago蛋白一起组装入RISC,抑制靶基因的表达。并且组装入RISC的过客链可以独立或与前导链共同调节基因的表达。
- 赵丹丹徐慧彭剑雄
- 关键词：微RNAARGONAUTE
- 靶向hTERT人工miRNA表达框架的构建及其对HepG2细胞端粒酶活性的抑制作用被引量：1
- 2014年
- 目的:构建针对h TERT基因的人工mi RNA表达框架,并验证其对Hep G2细胞端粒酶活性的抑制作用。方法:应用融合PCR技术针对不同位点设计并构建3个靶向h TERT的人工mi RNA表达框架,对各表达框架鉴定后,将其单独或两种共转染Hep G2细胞,采用TRAP-银染法和TRAP-二聚体蝎形探针荧光定量PCR法检测细胞端粒酶活性。结果:3个针对h TERT基因的人工mi RNA表达框架均成功构建,单独或共转染Hep G2细胞后,Hep G2细胞的端粒酶活性均被不同程度的抑制,且两种表达框架共转染的抑制作用明显大于单独转染,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:靶向h TERT基因的人工mi RNA表达框架能有效而特异抑制Hep G2细胞端粒酶活性,多位点联合抑制是一种有效的实验方案。
- 徐慧龚霞赵丹丹范张玲彭剑雄
- 关键词：RNA干扰
- 转染靶向hTERT miRNA表达框架对K562细胞端粒酶活性及增殖活性的影响
- 2016年
- 目的 :设计靶向端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,h TERT)的mi RNA表达框架,探讨其对h TERT的表达、端粒酶活性及K562增殖的影响,以期为慢性髓系白血病提供新的基因治疗策略。方法:构建靶向h TERT的mi RNA表达框架,脂质体法转染K562细胞,银染法及荧光定量PCR法检测端粒酶活性及h TERT的表达情况。Annexin V/PI双染检测细胞凋亡。结果:mi RNA表达框架转染48 h后,h TERT的表达明显下降,端粒酶活性明显减低,K562细胞凋亡率增加。结论:靶向h TERT的mi RNA表达框架能够有效干扰h TERT的表达,抑制端粒酶活性,诱导K562细胞的凋亡。以mi RNA表达框架为基础的RNAi技术,有望成为分子水平治疗慢性髓系白血病的有效工具。
- 赵丹丹徐慧李亚红凌晗吴珊珊羊金菊彭剑雄
- 关键词：MIRNA端粒酶HTERT慢性髓系白血病
- 端粒延长过程影响因素研究新进展
- 2015年
- 端粒作为染色体的保护结构,在维持染色体稳定和结构完整上起着重要作用。而端粒酶具有过延长端粒的功能,是维持端粒长度的重要酶复合体。端粒酶延长端粒的过程是一个涉及多种因子多个环节的复杂过程。主要涉及端粒自身结构相关调节以及端粒酶相关的调节。端粒酶相关调节是调节系统中最重要的组成部分。包括TR自身结构的影响,调节因子对TERT启动子的调节等。
- 赵丹丹徐慧彭剑雄
- 关键词：端粒端粒酶GQTERRAHTRHTERT
- 靶向hTERT、hTR新型RNAi表达框架的构建及应用效果观察
- 2016年
- 目的:构建靶向hTERT、hTR的新型RNAi表达框架,探讨单独及联合干扰hTERT、hTR基因对肿瘤细胞端粒酶活性、细胞凋亡及周期的影响,以期找到肿瘤基因治疗的新策略。方法:融合PCR构建靶向hTERT、hTR的RNAi表达框架。各表达框架经鉴定后分别或联合转染A549细胞,TRAP-银染法及TRAP-q PCR法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期。结果:靶向hTERT、hTR的新型RNAi表达框架构建成功。与空白对照组或阴性对照组比较,无论转染靶向hTERT或靶向hTR的RNAi表达框架后,A549细胞的端粒酶活性均明显降低,细胞凋亡率均明显增加,细胞G1阻滞明显增加,而联合转染靶向hTERT与靶向hTR的RNAi表达框架后,A549细胞的上述改变较各自单独转染更为明显(均P<0.05)。结论:靶向hTERT、hTR的新型RNAi表达框架能够有效抑制A549细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡,改变细胞周期。以人工mi RNA表达框架为基础的新型RNAi技术有望成为肿瘤基因治疗的新工具。
- 李亚红赵丹丹黄丹刘蕾朱文琦彭剑雄
- 关键词：RNA干扰
