陶欣
- 作品数：10 被引量：20H指数：2
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒及脂质体法转染原代软骨细胞的实验研究
- 2015年
- 目的利用慢病毒载体及Lipofectamine 2000脂质体转染大鼠原代软骨细胞,探讨转染软骨细胞的理想条件。方法采用机械—酶消化法获取原代软骨细胞,经Ⅱ型胶原(ColⅡ)鉴定后,使用慢病毒载体介导GFP及利用Lipofectamine 2000介导的FAM-siRNA分别转染原代软骨细胞,倒置荧光显微镜检测转染效率,MTT法测定原代软骨的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果采用脂质法转染软骨细胞不理想,转染率不到10%。运用慢病毒载体后转染率明显高于脂质体法,且随感染复数(病毒滴度×病毒液体积/细胞数,MOI)增加而增加,MOI为100时,转染率可达92.85%。MTT及流式结果显示,低MOI时,软骨细胞活力及凋亡率与对照组相比差异无统计学意义;当高MOI(200)时,细胞活力[(81.32±10.72)%]明显低于对照组,而细胞凋亡率[(21.37±2.80)%]明显高于对照组。结论当MOI为100时可作为转染软骨细胞安全有效的条件,这为细胞转染技术在软骨细胞的研究领域提供实验基础。
- 朱志坚于燕妮陶欣
- 关键词：细胞转染慢病毒载体脂质体细胞凋亡
- 氟对软骨细胞印度刺猬蛋白、甲状旁腺激素相关肽、跨膜蛋白表达及细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2016年
- 目的 观察氟对软骨细胞印度刺猬蛋白（Ihh）、甲状旁腺激素相关肽（PTHrp）、跨膜蛋白（Smo）表达和细胞增殖与凋亡的影响。方法原代培养乳鼠关节软骨细胞，传第3代后按染氟（氟化钠，NaF）剂量分为0（对照），5、10、20、40mg／L染氟组。采用噻唑蓝（MTr）法测定24、48、72h细胞增殖率；流式细胞术法检测24、48、72h对照组和40mg／L染氟组细胞凋亡情况；蛋白质免疫印迹法（Westernblot）和反转录PCR（RT—pCR）法检测48hIhh、PTHrp、Smo蛋白及mRNA表达。结果与对照组比较，24、48、72h5mg／L染氟组细胞增殖率明显升高，差异有统计学意义[（1．10±0．08）％比（1．17±0．07）％、（1．13±0．08）％比（1．20±0．06）％、（1．15±0．08）％比（1．16±0．08）％]；40mg／L染氟组细胞增殖率在48、72h显著降低[（0．72±0．11）％、（0．68±0．04）％，P均〈0．05]。与对照组比较，40mg／L染氟组软骨细胞凋亡率在24、48、72h逐渐增高[（1．47±0．05）％、（19．874-3．03）％、（25．30±1．28）％、（45．73士4．63）％，F=123．328，P〈0．01]。与对照组比较，5、lO、20、40mg／L染氟组在48hIhh、PTHrp、Smo蛋白及mRNA表达均明显增高（Ihh蛋白：0．77±0．08比0．98±0．07、1．23±0．06、1．37±0．07、1．34±0．07；PTHrp蛋白：0．68±0．04比0．89±0．05、0．83±0．05、1．29±0．05、1．16±0．08；Smo蛋白：0．37±0．01比0．64±0．06、0．67±0．03、0．96±0．06、0．69±0．06，IhhmRNA：0．77．4-0．05比0．98±0．05、1．09±0．05、1．27±0．03、1．46±0．06；PTHrpmRNA：0．67±0．07比0．97±0．05、1．07±0．08、1．37±0．05、1．45±O．05：SmomRNA：0．45±0．03比O．63±0．04、0．71±0．05、0．81±0．01、1．00±0．02，P均〈0．05）。结论低氟剂量对软骨细胞起增殖作用，而高氟剂量则起抑制作用。随时间的延长，氟可促进软骨细�
- 陶欣朱志坚邓超男
- 关键词：氟软骨细胞细胞增殖
- Indian Hedgehog信号通路相关因子在氟中毒大鼠软骨组织及软骨细胞中的表达及其意义
- 目的:通过检测慢性氟中毒大鼠软骨组织及其软骨细胞中Ihh、Smo、PTHrp蛋白与mRNA表达水平变化，探讨Indian hedgehog（Ihh）信号通路在慢性氟中毒体内及体外的作用与机制。 方法:1、建立动物染氟模...
- 陶欣
- 关键词：氟中毒软骨细胞关节软骨
- 沉默Smo基因对大鼠原代软骨细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察沉默Smo基因后对大鼠原代软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法用机械-酶消化法获取原代大鼠软骨细胞,经免疫细胞化学Ⅱ型胶原（ColⅡ）鉴定后,将实验分为对照组、control siRNA组和Smo siRNA 1~3组,以慢病毒为载体将siRNA转入软骨细胞,72 h后,MTT法检测细胞活力;反转录PCR（RT-PCR）及蛋白印迹（Western blot）检测Smo的表达量;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果各组序列经慢病毒载体成功转染到原代软骨细胞中,Smo siRNA1~3均不同程度的抑制Smo的表达,以Smo siRNA2组最为明显,其mRNA及蛋白的表达分别为0.19±0.03和0.39±0.07;同时,Smo siRNA2组细胞活力最低（77.38%±7.19%）而凋亡率最高（21.43%±2.97%）。结论沉默Smo可抑制原代软骨细胞增殖,并诱导软骨细胞凋亡,Smo具有保护软骨细胞免遭凋亡的作用。
- 朱志坚于燕妮陶欣邓超男
- 关键词：慢病毒载体SIRNA凋亡增殖
- 刺猬信号通路在氟中毒大鼠肝脏中表达及意义被引量：2
- 2015年
- 目的探讨刺猬信号通路(Hh)在慢性氟中毒大鼠肝脏损伤中作用及机制。方法选择健康成年SD大鼠36只,按体重随机分为对照组、低、高剂量染氟组(饮水中含氟量分别为5、50 mg/L),每组12只(雌雄各半),饲养6个月后检测大鼠尿氟、骨氟含量;应用自动生化分析仪检测大鼠肝功能;免疫组织化学(IHC)、Western blot和逆转录PCR(RT-PCR)法检测大鼠肝脏组织中印度刺猬蛋白(Ihh)、跨膜蛋白(Smo)、胶质瘤相关癌基因(Gli1)蛋白和mRNA表达;试剂盒法检测肝组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷氨酰胺合成酶(GS)活力及脂质过氧化物(LPO)含量。结果与对照组比较,染氟组大鼠尿氟、骨氟含量、高剂量染氟组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性[分别为(73.42±6.98)、(161.08±8.59)U/L]明显增加,高剂量染氟组大鼠肝组织中Ihh、Smo、Gli1蛋白和mRNA的表达[分别为(71.41±4.18)、(83.83±5.26)、(81.14±25.44)及(1.20±0.17)、(3.13±0.19)、(5.35±0.52)]明显增加,高剂量染氟组大鼠肝组织中T-SOD、GSH-Px、GS活性[(5.08±0.64)、(5.53±0.83)、(19.22±1.84)U/mgprot]明显降低,LPO含量[(10.29±1.81)μmol/gprot]升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Hh信号通路与氧化应激可能共同参与慢性氟中毒所致肝脏损伤发病过程。
- 赵丽娜于燕妮朱志坚陶欣
- 关键词：氟中毒肝损伤
- 不同氟浓度对大鼠原代软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的观察不同氟浓度对大鼠原代软骨细胞Ⅱ型胶原(ColⅡ)表达的影响,探明ColⅡ在染氟软骨细胞的表达意义。方法取1周龄健康SD大鼠,用机械-酶消化法分离膝关节软骨细胞,经甲苯胺蓝鉴定后,取第三代细胞将实验分为对照组和染氟组(5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)五组,培养3d后,经MTT检测各组细胞活力,并采用Western blot、免疫组化检测各组细胞ColⅡ蛋白表达。结果NaF培养3d后,细胞活力在5mg/L、10mg/L组较正常组高,在40mg/L组较正常组低,ColⅡ蛋白的表达在10mg/L组较正常组高,在40mg/L组较正常组低,差异有有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度的氟对大鼠原代软骨细胞具有促进增殖作用,而高浓度具有抑制增殖作用,其机制可能与ColⅡ的分泌有关。
- 朱志坚于燕妮陶欣
- 关键词：氟化钠细胞活力
- 慢性氟中毒对大鼠肝脏Notch1、Hes1蛋白表达影响被引量：5
- 2015年
- 目的探讨慢性氟中毒对肝损害中Notch1、Hes1蛋白表达的影响。方法 36只SD大鼠按体重随机分为3组,每组12只,对照组饮用含氟量<1 mg/L自来水,低、高氟组分别饮用含氟化钠5、50 mg/L的自来水,饲养6个月后检测尿氟,取股骨测定骨氟,检测血清中肝功能指标;应用免疫组织化学和蛋白印记法检测肝脏组织中Notch1、Hes1及凋亡因子Bcl-2、Bax的蛋白表达;测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性及脂质过氧化物(LPO)含量;原位末端转移酶标记法检查肝组织中凋亡细胞定位及数量。结果与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟、骨氟含量分别为[(1.89±0.12)、(2.19±0.17)mg/L与(2.10±0.16)、(2.21±0.10)mg/kg]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),低、高氟组大鼠肝组织中Notch1、Hes1蛋白表达量分别为[(0.55±0.32)、(0.71±0.28)与(0.74±0.92)、(0.88±0.29)]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,染氟大鼠肝LPO含量逐渐升高,S0D、GSH-Px活性逐渐下降;与对照组比较,低、高氟组Bcl-2蛋白表达[(0.94±0.24)、(0.71±0.22)]明显降低,Bax蛋白表达[(1.25±0.42)、(1.43±0.46)]显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,染氟大鼠肝细胞凋亡细胞数增多。结论过量氟可引起肝脏氧化应激及肝细胞凋亡,Notch信号通路可能参与氟中毒引起肝脏损伤发病过程。
- 陶欣于燕妮朱志坚赵丽娜邓超男
- 关键词：氟中毒肝脏NOTCH1HES1
- Hedgehog信号通路与地方性氟中毒软骨损害被引量：1
- 2015年
- 地方性氟中毒是由于机体氟元素摄人过多，导致的以骨骼和牙齿为主要病变特征的慢性全身性疾病，近年来研究发现，过量氟对软骨有明显的损害作用，可抑制软骨细胞增殖并导致凋亡。从而导致关节功能障碍，严重者可致脊柱和四肢关节畸形。
- 陶欣于燕妮
- Hh信号通路在氟致大鼠原代软骨细胞损伤中作用被引量：6
- 2015年
- 目的探讨体外染氟软骨细胞中刺猥蛋白基因(Hh)信号通路中音速刺猬蛋白、跨膜蛋白(Smo)及下游骨形态发生蛋白-2(BMP-2)因子表达在氟中毒软骨细胞损伤中的作用。方法取1周龄健康SD大鼠,用机械、酶消化法分离膝关节软骨细胞,免疫细胞化学对原代软骨细胞进行鉴定。实验设对照组和染氟组(5、10、20、40 mg/L)。培养48 h后,噻唑蓝法检测各组细胞活力,蛋白印迹及逆转录PCR分别检测各组细胞Smo、Shh、BMP-2蛋白及mRNA表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组比较,5、10 mg/L染氟组细胞活力[分别为(113.33±11.74)%、(127.25±10.24)%]明显升高,40 mg/L染氟组细胞活力[(73.91±9.94)%]明显下降(P<0.05);染氟组细胞中Shh、Smo、BMP-2蛋白和mRNA的表达量随染氟浓度增加而升高;40 mg/L染氟组细胞凋亡率为(11.13±1.20)%,明显高于对照组。结论氟可激活软骨细胞中Hh信号通路,Hh信号通路与软骨细胞凋亡可能共同参与氟中毒软骨损害过程。
- 朱志坚于燕妮陶欣邓超男
- 关键词：NA
- 刺猬信号通路在氟中毒软骨损害机制中的研究进展被引量：2
- 2015年
- 氟在生理代谢过程中发挥着不可替代的作用,适量的氟能促进神经系统及运动系统的生长发育,但摄入过多将会引起一系列的中毒症状。氟骨症是一种慢性骨关节病,其主要侵害四肢关节的软骨、骨及骨周组织。刺猬(Hh)信号通路是一条经典的胚胎发育和分化信号转导系统,在胚胎发育和细胞分化增殖中起重要作用,且Hh信号通路中的许多因子直接对软骨及骨的发育起调控作用。因此,Hh信号通路可能参与氟中毒软骨损害的发病机制。
- 朱志坚陶欣于燕妮
- 关键词：地方性氟中毒软骨损害
