刘东华
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吴阶平医学基金更多>>
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- 利用骨髓间充质干细胞膜片原位构建“三明治”样组织工程牙周膜的实验研究被引量：1
- 2016年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)膜片与胶原膜构建的"三明治"样结构植入体内后牙周膜的再生情况。方法制备BMSC细胞膜片,与胶原膜构建夹层结构复合于牙根表面,植入原位生长,分别于4和12周取材,利用X片、HE和天狼星红染色观察牙周膜的再生情况。结果相比单纯胶原膜组和空白对照组,实验组在牙根与牙槽骨间形成了清晰的软组织间隙,且有类Sharpey纤维存在,即形成了功能性牙周膜。结论细胞膜片-胶原膜-细胞膜片的"三明治"样夹层结构可较好地促进牙周膜再生。
- 刘翠朱彪张欣然刘东华赵刚郭希民郭红延
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞外基质
- C型利钠利尿肽基因转染对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响
- 2017年
- 目的研究C型利钠利尿肽(C-type natriuretic peptide,CNP)基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨分化能力的影响,为实现高质量基于间充质干细胞的组织工程软骨构建奠定基础。方法采用全骨髓培养法分离SD大鼠BMSCs并进行传代培养及多向分化能力鉴定。将已构建的含有人CNP基因和增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺病毒(Ad-NPPC-eGFP)按照特定转染复数(multiplicity of infection,MOI)转染BMSCs,通过流式细胞仪检测转染效率,Real-time PCR检测转染后CNP mRNA表达情况,MTT实验检测转染后对细胞增殖的影响,阿尔新蓝染色检测转染后BMSCs体外诱导14 d及21 d时成软骨情况。结果成功获取了大鼠BMSCs,成脂、成骨分化诱导结果表明其具有较好的多向分化能力。腺病毒转染后细胞状态良好,转染效率较高,且未对细胞增殖产生显著影响(P>0.05),转染后BMSCs CNP mRNA高表达(P<0.05),体外成软骨能力强于未转染CNP基因组(P<0.05)。结论含有CNP基因的重组腺病毒可在SD大鼠BMSCs中稳定表达,并表现出较好的体外诱导成软骨能力。
- 杨烁时权钱智勇刘东华郭希民徐娟
- 关键词：骨髓间充质干细胞重组腺病毒软骨组织工程
- 人β-防御素3与结缔组织生长因子共表达重组慢病毒载体的构建及表达
- 2017年
- 目的体外构建共表达人β-防御素3(hBD3)与结缔组织生长因子(CTGF)的重组慢病毒,并检测其对骨髓间充质干细胞(BMSC)的转染效率及表达情况。方法体外构建携带hBD3、CTGF和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒表达载体,测定病毒滴度。转染BMSC,确定最适感染倍数(MOI)值。采用荧光显微镜和流式细胞仪检测病毒的转染效率及传代稳定性。Western印迹检测目的蛋白的表达。结果经PCR和测序分析鉴定,成功构建了携带hBD3和CTGF基因的重组慢病毒载体Lenti-CTGF-hBD3-EGFP、Lenti-hBD3-EGFP和Lenti-EGFP,检测病毒滴度分别为3.21×10~8、5.80×10~8和1.16×10~9。病毒转染BMSC最适MOI值为150。荧光显微镜下,转染后BMSC绿色荧光效率高;流式细胞仪检测病毒的转染效率,Lenti-CTGF-hBD3-EGFP为79.72%,Lenti-hBD3-EGFP为83.08%,Lenti-EGFP为84.43%,且都稳定遗传。Western印迹显示目的蛋白表达成功。结论成功构建了共表达hBD3、CTGF的重组慢病毒载体,并能在BMSC中高效、稳定表达,为进一步研究hBD3与CTGF的应用奠定了基础。
- 孙洁钱智勇刘静张欣然刘翠刘东华郭红延郭希民
- 关键词：重组慢病毒结缔组织生长因子骨髓间充质干细胞
- 一种利用三维细胞培养系统促进脐带血造血干细胞快速稳定增殖的细胞培养方法
- 本发明提出了一种利用三维细胞培养系统促进脐带血造血干细胞快速稳定增殖的细胞培养方法，包括下列步骤：1)提取制备共培时作为基质细胞使用的细胞，并用流式细胞术进行鉴定；2)处理三维培养过程中使用的微载体或其他载体等材料，备用...
- 郭希民刘东华钱智勇周勇毛宁
- 文献传递
- 非综合征型先天性多数恒牙缺失伴乳牙滞留1例被引量：3
- 2016年
- 病例报告
患者，女，32岁，发育中等、智力正常。毛发正常，能正常出汗，无指（趾1发育不良。未见颌骨发育异常。口内为混合牙列，11、12、14、16、17、21、22、24、25、26、31、32、33、34、36、41、42、43、46萌出在位。
- 朱彪焦婷刘东华郭希民郭红延
- 关键词：乳牙滞留恒牙缺失
- BMP-7对大鼠骨髓间充质干细胞膜片成骨分化的影响被引量：4
- 2017年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)膜片的生物学性能以及骨形成蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)对BMMSCs膜片成骨分化的影响。方法:分离培养SD大鼠原代BMMSCs,采用维生素C诱导构建大鼠BMMSCs膜片,实验分为自然分化组、添加BMP-7的骨诱导组以及标准骨诱导组,采用HE染色观察,CCK-8检测膜片细胞增殖情况以及RT-PCR检测细胞膜片成骨分化水平。结果:分离大鼠BMMSCs诱导10~14 d后获得白色膜状细胞膜片。镜下观察细胞呈梭形重叠生长,细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌。CCK-8显示膜片细胞密度随时间递增。与BMMSCs膜片相比,BMP-7诱导的细胞膜片高表达ALP、Osteocalcin等成骨基因。结论:BMP-7诱导的大鼠BMMSCs细胞膜片成骨分化能力强,在骨组织工程中优势显著。
- 刘静孙洁何秀叶刘东华郭希民郭红延
- 关键词：骨形成蛋白-7骨髓间充质干细胞骨组织工程
- 兔骨髓间充质干细胞膜片特性及优势研究被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(r BMMSCs)膜片的基本生物学特性及其在组织工程应用中的优势。方法:从日本大耳白兔提取原代骨髓培养r BMMSCs,采用简单制备方法构建r BMMSCs细胞膜片,大体、HE染色观察,MTT、成骨成脂诱导检测膜片增殖分化能力,RT-PCR检测膜片相关优势基因的表达情况。结果:成功分离r BMMSCs,诱导10-14d后获得白色膜状细胞膜片,并可用无菌眼科镊提拉。镜下观察细胞呈梭形重叠生长,HE染色显示细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌;MTT显示膜片细胞密度随时间增加;成骨成脂诱导结果显示其分化能力明显优于普通培养的r BMMSCs;RT-PCR结果显示,与r BMMSCs相比,细胞膜片高表达ColⅠ和Fn。结论:r BMMSCs细胞膜片相比普通培养的r BMMSCs,在组织工程应用中更具优势。
- 刘翠张欣然刘东华翟羽郭希民郭红延
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞外基质
- 氧还蛋白过氧化物2在表皮干细胞向汗腺细胞诱导分化过程中对表型改变的影响被引量：2
- 2017年
- 目的探讨氧还蛋白过氧化物2基因在表皮干细胞向汗腺细胞分化过程中对表型改变的影响。方法分离培养健康包皮获取表皮干细胞，分离培养健康成人皮肤获取汗腺细胞，以免疫荧光细胞化学染色鉴定。慢病毒载体介导的氧还蛋白过氧化物2基因分为过表达组、敲低表皮干细胞组及空白对照组，RT．PCR和WesternBlot技术分别在基因和蛋白水平检测3组的氧还蛋白过氧化物2表达。每组分别通过Transwell板与汗腺细胞共培养，流式细胞术检测共培养前、后表皮干细胞CEA和B1整合素的表达情况。结果表皮干细胞及汗腺细胞符合其相应特异性抗原。共培养前表皮干细胞B1整合素高表达（98．69±0．67）％，CEA几乎不表达（6．20±3．15）％；共培养后B1整合素表达程度：敲低组（19．30±0．53）％〈空白对照组（65．77±2．32）％〈过表达组（92．63±10．97）％；共培养后CEA表达程度：敲低组（95．43±2．36）％〉空白对照组（51．20±0．79）％〉过表达组（45．91±0．93）％。以上结果组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论氧还蛋白过氧化物2基因可抑制表皮干细胞向汗腺细胞分化的表型改变，并可提高保留其本身特异性抗原表达水平的能力。
- 陈甫寰宋慧锋郭希民岳晓彤刘玲英周勇刘东华钱智勇王统民何秀叶
- 关键词：表皮干细胞汗腺细胞分化
- 维生素C对兔骨髓间充质干细胞成脂分化的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨维生素C（vitamin C,Vc）对兔骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成脂分化能力的影响。方法以兔BMSCs为实验对象,添加0~150μg/ml不同浓度的Vc处理后,进行成脂诱导,镜下观察诱导4 d、7 d、10 d、14 d、21 d的脂肪形成情况,并利用油红-O染色提取法检测其脂肪含量,实时荧光定量PCR（q PCR）法检测成脂相关转录因子PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA表达的变化。结果相比未添加Vc组,不同浓度的Vc均能增加BMSCs成脂量和成脂分化相关基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达。其中50μg/ml Vc处理组OD值高达1.373±0.099,高于其他组（0.720±0.011、0.879±0.023、0.915±0.159、1.088±0.066、0.908±0.162）,差异有统计学意义（P〈0.01）,而该组PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达最高水平分别为5.82±0.24、5.41±0.42、5.14±0.54,与其他组差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 Vc可以促进MSCs的成脂分化且最佳浓度为50μg/ml。
- 刘翠张欣然刘东华周勇翟羽郭希民郭红延
- 关键词：维生素C间充质干细胞成脂分化
