彭蔚宇
- 作品数：10 被引量：11H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析
- 2017年
- 目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。
- 王丽廷王兴童杨柳彭蔚宇孟兴陈洪岩高文伟韩凌霞
- 关键词：原核表达
- B19单倍型鸡BNK蛋白单克隆抗体的制备被引量：1
- 2015年
- 目的体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞(Natural killer,NK)BNK蛋白的细胞系,制备BNK蛋白的单克隆抗体,为鸡BNK蛋白及NK细胞的研究提供便利。方法利用BNK19原核表达产物免疫BALB/c小鼠,体外稳定表达疫病敏感性B19单倍型鸡BNK蛋白(BNK19)的真核细胞系筛选单克隆抗体。结果用稳定表达BNK蛋白的真核细胞系筛选到2株BNK19特异性单克隆抗体。结论获得的单克隆抗体经鉴定具有免疫学活性,为鸡BNK蛋白及NK细胞的作用机制研究提供了条件。
- 吴少莲彭蔚宇王兴童文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞
- 关键词：单克隆抗体
- 去除信号肽有利鸡白细胞介素-10在真核细胞胞浆的积聚
- 目的 分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,获得稳定表达chIL-10的细胞系.方法 采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴...
- 韩凌霞杨柳彭蔚宇王丽廷王兴童陈洪岩
- 关键词：信号肽真核表达CHO-K1细胞
- 去除信号肽有利鸡白细胞介素-10 在真核细胞胞浆的积聚
- 目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞...
- 韩凌霞杨柳彭蔚宇王丽廷王兴童陈洪岩
- 关键词：信号肽真核表达CHO-K1细胞
- MHC单倍型影响鸡NK的杀伤性
- 背景:鸡是非哺乳类重要模式动物,其自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK)细胞研究甚少。鸡马立克氏病毒(MDV)对鸡的致病性与宿主的主要组织相容性复合体(MHC)单倍型密切相关,人类MHC-1类抗原分...
- 韩凌霞杨超吴少莲彭蔚宇廉传江
- 文献传递
- HBK-SPF鸭MHCI区域微卫星标记分析被引量：4
- 2015年
- 禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8 kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,分为B和Q 2个品系,已封闭繁育了7个世代。本文在鸭MHC I区域筛选了4个微卫星位点,通过单链构象多态性分析和聚合酶链式反应直接测序,发现A位点具有多态性,为(GT)n的重复结构,第6代HBK-B和HBK-Q的31个个体和第7代的140个个体进行聚合酶链式反应,结果直接测序,在重复结构之前的108bp中,发现了4种纯合单倍型和6种杂合单倍型;B位点未得到目的产物;C位点位于MHC I拷贝基因UDA和UEA之间,扩增结果与UAA和UBA之间序列高度同源,无法判断基因型;D位点表现为单态,为(ATA)15的固定重复结构。本研究为进一步研究鸭MHC I基因结构和建立家系提供了依据。
- 韩凌霞武永淑吴少莲彭蔚宇王兴童韩建林陈洪岩
- 关键词：无特定病原体微卫星标记
- G2系和G5系鸡感染马立克氏病毒早期细胞因子转录水平的变化被引量：3
- 2015年
- 为研究主要组织相容性抗原(MHC)不同的G2系和G5系鸡在感染马立克氏病毒(MDV)后立即早期病毒复制及细胞因子转录水平的动态变化,本实验对14日龄G2和G5系SPF鸡滴鼻接种超强毒(vv MDV)Md5株,以28S r RNA基因为内参,利用双重荧光定量RT-PCR(dq RT-PCR)方法对接种后4 h、24 h、48 h和96 h肺淋巴细胞、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中MDV meq、IFN-γ、IL-18、IL-4和IL-10的m RNA含量进行检测。结果显示,接种后96 h仅在两品系感染鸡的肺淋巴细胞和脾脏中检测到了meq m RNA,G2系鸡群肺淋巴细胞中病毒m RNA含量高于G5系,但脾脏中较低。96 h肺淋巴细胞和脾脏中IFN-γ、IL-4和IL-10转录水平大幅上调,并且G2系鸡群均略高于G5。本研究结果提示G2系对MDV的抵抗能力强于G5,这两种品系鸡感染MDV后可能主要启动以Th2型为主的细胞免疫反应,为研究MDV对不同MHC单倍型鸡的致病性提供了实验依据。
- 蔡文博吴少莲彭蔚宇王丽廷陈洪岩韩凌霞
- 关键词：马立克氏病毒IL-18IL-4
- 鸡IL-10原核表达抗血清用于体内实验的初步分析
- 目的 获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10 的反应原性.方法 采用RT-PCR 从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10 的基...
- 韩凌霞杨柳彭蔚宇王丽廷王兴童陈洪岩
- 关键词：原核表达
- MHC单倍型影响鸡NK的杀伤性
- 背景：鸡是非哺乳类重要模式动物,其自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK)细胞研究甚少。鸡马立克氏病毒(MDV)对鸡的致病性与宿主的主要组织相容性复合体(MHC)单倍型密切相关,人类MHC-1类抗原分...
- 韩凌霞杨超吴少莲彭蔚宇廉传江
- 去除信号肽有利鸡白细胞介素-10在哺乳动物细胞胞浆的表达被引量：3
- 2017年
- 目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-10M)的chIL-10编码基因,克隆入含有报告基因e GFP和新霉素抗性基因(neo)的真核表达载体pEGFP-N1中,获得重组质粒N1-euchIL-10F和N1-euchIL-10M。分别转染中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1),经G418加压筛选、纯化,获得稳定表达chIL-10蛋白的CHO-K1细胞系,利用激光共聚焦试验观察外源蛋白的细胞定位。结果通过RT-PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验,表明euchIL-10F和euchIL-10M均整合入细胞基因组中,且N1-euchIL-10M在胞浆大量表达较强的绿色荧光,而N1-euchIL-10F表达的荧光较弱,且胞浆内含量很低。结论去除信号肽利于chIL-10基因在体外真核细胞胞浆的表达。
- 彭蔚宇王丽廷王兴童杨柳孟兴陈洪岩韩凌霞
- 关键词：信号肽真核表达CHO-K1细胞
