张国利
- 作品数：13 被引量：35H指数：4
- 供职机构：解放军军需大学军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划国家重点科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- EGF-PE40抗原性检定
- 2001年
- :EGF-PE4 0是由人表皮生长因子 ( EGF)基因与绿脓杆菌外毒素 A( PEA)的跨膜亚单位和毒力亚单位( PE4 0 )基因融合 ,在大肠杆菌内表达的重组毒素。它可以特异性识别 EGF受体过度表达的癌细胞 ,具有特异杀伤癌细胞的作用。该融合蛋白的 Mr为 4 .55× 1 0 4,如作为药物长期静注可能致使病人体内抗体水平增高 ,从而影响其药效。本试验以家兔为模型 ,连续 2 8d( 1个疗程 )静注 EGF-PE4 0纯品 ,应用 ELISA和琼扩分别测定了其血清中结合抗体水平和中和抗体水平的动态变化。结果显示 ,血清结合抗体水平随静注时间的延长而增高 ,2 8d时最高可达 1∶ 2 1 2 ;在静注 EGF-PE4 0的同时 ,静注 2倍于人体剂量的免疫抑制剂环磷酰胺 ,其血清结合抗体水平与不用环磷酰胺组相比虽略有降低 ,但经 F检验 ,二者无显著性差异 ;应用试验 2 8d结合抗体水平最高的兔血清与不同质量浓度 ( 80、4 0、2 0、1 0、5、2 .5mg/ L)的 EGF-PE4 0进行琼扩 ,均无沉淀线产生 ;被检血清、健兔血清和阳性对照血清分别与质量浓度为 1 0 5、35、2 8mg/ L的 EGF作用 2 4 h后 ,再与阳性对照血清进行琼扩反应 ,结果除阳性对照血清与 1 0 5mg/ L EGF-PE4 0的反应物无沉淀生成外 ,其余各孔均有沉淀线生成 ,表明连续 2 8d用药未在兔体内产生可检测到的中?
- 董冰朱平张国利李树民
- 关键词：抗原性中和抗体环磷酰胺
- 抗隐孢子虫子孢子表膜单链抗体基因的克隆和核苷酸序列分析被引量：9
- 2003年
- 应用 RT- PCR技术 ,从分泌具有抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 3D6中扩增出抗体VH 和 VL 基因 ,用 linker(Gly4 Ser) 3基因 ,将 VH 和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆至 p MD- 18T载体中。经核苷酸序列分析证实 ,VH、VL 基因和 linker基因拼接正确 ,基因全长为 72 0 bp。经计算机分析 ,VH 和 VL 基因均为新发现的基因序列 ,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。VH和 VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链 (A)和轻链 κ 家族。
- 尹继刚张西臣朱平张国利李建华何宏轩田宗成杨举
- 关键词：隐孢子虫子孢子单链抗体基因克隆核苷酸序列
- 抗隐孢子虫ScFv-PE40重组毒素表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达
- 利用RT-PCR技术,从分泌抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D6中,扩增出轻重链可变区基因,通过linker将其连接成单链抗体基因,并将其克隆到PMD-18T载体中,进行序列测定。结果表明,扩增的ScFv基...
- 尹继刚张西臣李建华朱平柳增善杨举张国利
- 关键词：隐孢子虫表达质粒
- 文献传递
- 绿脓杆菌外毒素A与人组蛋白H_4嵌合蛋白基因克隆及其原核表达载体的构建被引量：1
- 2002年
- 设计引物以pCDPT2质粒(含PEA全序列)为模板亚克隆获得PEA功能区Ⅰa及功能区Ⅱ基因片段(1100 bp); 提取人染色体DNA作为模板,利用一对设计引物扩增获得了人组蛋白H4基因片段(316 bp);将两基因片段连接,构建了融合基因中间载体pMD-18T-PEA-H4;融合基因经NcoⅠ及XhoⅠ酶切,以正确阅读框架插入相同酶切的pET-28A中,经酶切分析及PCR扩增检测,筛选到阳性克隆,其质粒测序结果表明成功地构建了毒性基因缺失的PEA与人组蛋白H4融合基因的原核表达载体,为进一步表达并获得大量的融合蛋白奠定了基础。
- 邓景致欧阳红生涂长春朱平张国利廖晓萍薛崧
- 关键词：基因克隆原核表达载体绿脓杆菌外毒素A嵌合蛋白真核细胞
- EGF-Ang融合蛋白的构建、表达及活性研究被引量：3
- 2002年
- 目的:构建由人表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和人血管生成素(angiogenin,Ang)组成的人源化的融合蛋白,并检测其对肿瘤细胞的靶向杀伤能力。方法:利用基因工程技术将EGF和Ang基因连接起来,克隆到高效表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pEGF-Ang,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白(EGF-Ang)。经DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱层析纯化后,用MTT法检测复性蛋白的细胞毒性。结果:SDS-PAGE和薄层扫描分析表明外源蛋白的表达量占菌体裂解蛋白总量的18.6％。细胞活性检测表明EGF-Ang重组蛋白能明显地抑制Hep2细胞的生长,而不影响MA104细胞的正常生长。结论:融合蛋白EGF-Ang在体外对过度表达EGFR的Hep2细胞具有明显的杀伤作用。
- 岳玉环朱平朱冬冬张国利李树民李铁征
- 关键词：表皮生长因子血管生成素融合蛋白细胞毒性EGF
- 白喉毒素(Gly_4Ser)_2-人表皮生长因子融合蛋白的纯化及其特异性细胞毒性研究被引量：6
- 2004年
- 张国利吴广谋李俊植岳玉环李树民朱平
- 关键词：白喉毒素特异性细胞毒性DT
- 肉毒梭菌毒素(Clostridium botulinum)的研究进展
- 肉毒毒素是肉毒梭菌产生的细菌毒素,本文就肉毒梭菌毒素的基因、致病性,免疫学、分子生物学检测等研究进展进行了综述与讨论.
- 张国利冯书章
- 关键词：肉毒梭菌毒素基因免疫学分子生物学检测噬菌体
- 文献传递
- LHRH-PE40对荷瘤BALB/c小鼠抗肿瘤效果的实验研究被引量：4
- 2002年
- 目的 观察LHRH-PE40对小鼠腹水瘤及实体瘤的治疗效果,为确定药理、毒理学实验剂量提供依据。方法 分别给BALB/c小鼠腹腔内和背部皮下接种骨髓瘤SP2/0细胞,接种后第4d和第9d,分别腹腔注射LHRH-PE40,并设空白对照组,停药后第5d处死,观察两组小鼠腹水和腹腔内肿瘤生长情况,称量瘤重,计算抑瘤率。结果 腹水瘤实验组所有小鼠腹部未见腹水,腹腔未见肿瘤。实体瘤实验组抑瘤率为54％。结论LHRH-PE40可以有效地抑制荷瘤小鼠实体瘤的生长。
- 李树民李俊植吴广谋张国利朱平
- 关键词：LHRH-PE40抗肿瘤效果免疫毒素
- LHRH-PE40工程菌发酵条件的初步研究被引量：1
- 2003年
- 利用摇瓶在温度、pH范围、诱导剂量及诱导时间等不同因素变化时,进行了重组毒素LHRH-PE40工程菌发酵条件的初步探索.结果表明,工程菌优化的发酵条件为:pH范围7.3～7.5,诱导温度为34 ℃.诱导时菌密度A600=0.8,诱导时间为4～4.5 h,诱导剂(IPTG)浓度为0.5 mmol/L.
- 李立全许松山吴广谋张国利朱平
- 关键词：重组毒素工程菌发酵LHRH-PE40导向药物
- 白喉毒素-(Gly4Ser)2-人表皮生长因子融合蛋白的基因构建与表达纯化及其特异性细胞毒性研究
- 为了获得高活性的白喉毒素与表皮生长因子重组毒素用于肿瘤治疗,在二者之间加入柔性连接Linker,然后在原核表达系统中进行表达并纯化。基本方法是利用PCR技术从克隆有白喉毒素全基因的pGEM-T Vector中扩增出DDA...
- 张国利刘雨玲吴广谋李俊植李树民岳玉环朱平
- 文献传递
