孙洁
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：武警总医院更多>>
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- 人β-防御素3与结缔组织生长因子共表达重组慢病毒载体的构建及表达
- 2017年
- 目的体外构建共表达人β-防御素3(hBD3)与结缔组织生长因子(CTGF)的重组慢病毒,并检测其对骨髓间充质干细胞(BMSC)的转染效率及表达情况。方法体外构建携带hBD3、CTGF和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒表达载体,测定病毒滴度。转染BMSC,确定最适感染倍数(MOI)值。采用荧光显微镜和流式细胞仪检测病毒的转染效率及传代稳定性。Western印迹检测目的蛋白的表达。结果经PCR和测序分析鉴定,成功构建了携带hBD3和CTGF基因的重组慢病毒载体Lenti-CTGF-hBD3-EGFP、Lenti-hBD3-EGFP和Lenti-EGFP,检测病毒滴度分别为3.21×10~8、5.80×10~8和1.16×10~9。病毒转染BMSC最适MOI值为150。荧光显微镜下,转染后BMSC绿色荧光效率高;流式细胞仪检测病毒的转染效率,Lenti-CTGF-hBD3-EGFP为79.72%,Lenti-hBD3-EGFP为83.08%,Lenti-EGFP为84.43%,且都稳定遗传。Western印迹显示目的蛋白表达成功。结论成功构建了共表达hBD3、CTGF的重组慢病毒载体,并能在BMSC中高效、稳定表达,为进一步研究hBD3与CTGF的应用奠定了基础。
- 孙洁钱智勇刘静张欣然刘翠刘东华郭红延郭希民
- 关键词：重组慢病毒结缔组织生长因子骨髓间充质干细胞
- BMP-7对大鼠骨髓间充质干细胞膜片成骨分化的影响被引量：4
- 2017年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)膜片的生物学性能以及骨形成蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)对BMMSCs膜片成骨分化的影响。方法:分离培养SD大鼠原代BMMSCs,采用维生素C诱导构建大鼠BMMSCs膜片,实验分为自然分化组、添加BMP-7的骨诱导组以及标准骨诱导组,采用HE染色观察,CCK-8检测膜片细胞增殖情况以及RT-PCR检测细胞膜片成骨分化水平。结果:分离大鼠BMMSCs诱导10~14 d后获得白色膜状细胞膜片。镜下观察细胞呈梭形重叠生长,细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌。CCK-8显示膜片细胞密度随时间递增。与BMMSCs膜片相比,BMP-7诱导的细胞膜片高表达ALP、Osteocalcin等成骨基因。结论:BMP-7诱导的大鼠BMMSCs细胞膜片成骨分化能力强,在骨组织工程中优势显著。
- 刘静孙洁何秀叶刘东华郭希民郭红延
- 关键词：骨形成蛋白-7骨髓间充质干细胞骨组织工程
