陈坤
- 作品数：9 被引量：34H指数：4
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划天津市科技发展战略研究计划项目国家科技型中小企业技术创新基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程理学农业科学更多>>
- 一种高效表达碱性蛋白酶的新型启动子的筛选及研究被引量：4
- 2018年
- 碱性蛋白酶广泛的应用价值及市场供不应求的现状,旨在构建碱性蛋白酶高效表达系统。通过蛋白电泳和质谱检测的方法,由地衣芽孢杆菌中筛选获得一种新型启动子p Chi,以两种已知强组成型启动子p Shuttle-09和pyxi E为对照,研究其对克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶与地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的表达活性。成功构建了6种重组表达载体及重组菌,结果表明,p Chi的启动强度是p Shuttle-09的1.25倍,pyxi E的2倍,从而为介导枯草芽孢杆菌表达系统中异源基因的表达奠定基础。
- 陈坤袁飞燕柴昊男刘焕王兴吉张会图路福平
- 关键词：碱性蛋白酶启动子异源表达
- 嗜酸乳杆菌LB10.16及枯草芽孢杆菌BS7.29安全性评价被引量：8
- 2011年
- 目的:评价枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性,为其应用研究提供技术支持。方法:本文通过对小鼠灌服、急性攻毒、腹腔注射、小鼠最大耐受剂量、急性攻毒等试验方法进行枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性研究。结果:1×108cfu/kg.bw的LB10.16和5×108cfu/kg.bw的BS7.29能够明显提高肠道推动力,改善小鼠肠道蠕动性。结论:两个菌种急性攻毒试验结果表明属于无毒物质,安全性比较高。
- 李军训高洁陈坤张同存杜连祥
- 关键词：嗜酸乳杆菌枯草芽孢杆菌益生菌安全性
- 高活力液体碱性蛋白酶制备工艺研究
- 2007年
- 为了获得高质量浓缩液体蛋白酶,对提取工艺中不同絮凝剂,不同大小活性炭以及膜过滤条件进行了优化。结果表明0.1%质量分数NaAlO2絮凝剂在pH=8.0时絮凝速度快、效果好;1%中型颗粒活性炭脱色效果明显;聚丙烯膜超滤温度10℃、压力0.05 MPa时酶的回收率最高。优化后的工艺使液体酶活力提高到3.2×105μ/mL,使初始发酵液浓缩了8.3倍,酶回收率达到83.6%。
- 孙同毅李军训殷向彬陈坤路福平杜连祥
- 关键词：絮凝超滤浓缩
- 以β-半乳糖苷酶为报告基因的原核启动子检测体系构建被引量：3
- 2008年
- 目的:以β-半乳糖苷酶为报告基因构建原核启动子检测体系。方法:以由质粒pDL扩增获得的bgaB基因为报告基因,将其克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE2,构建成一个具有启动子活性检测功能的重组质粒pBEB。将组成型启动子P43和诱导型启动子Pspac克隆入pBEB,得到重组表达载体pBEBP43和pBEBPspac,转化至大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。结果:两种不同类型的启动子均能在大肠杆菌BL21和枯草芽孢杆菌1A751中启动bgaB基因的表达。结论:成功构建具有较为广泛适用性的原核启动子检测体系。
- 陈坤黎明樊欣迎路福平
- 关键词：Β-半乳糖苷酶
- 以绿色荧光蛋白为报告基因的原核启动子检测体系构建被引量：5
- 2008年
- 以质粒pMUTIN-GFP+扩增获得的gfp+基因为报告基因,将其克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pBE2,构建成一个具有启动子活性检测功能的重组质粒pBE2-GFP+。将组成型启动子P43和诱导型启动子Pspac克隆入pBE2-GFP+,得到重组表达载体pBE-GFP-P43和pBE-GFP-Pspac,转化至大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。荧光显微镜检测GFP+蛋白的表达情况。结果表明,2种不同类型的启动子均能在大肠杆菌BL21和枯草芽孢杆菌1A751中启动gfp+基因的表达。
- 陈坤黎明高伟路福平
- 嗜碱性芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶分别在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中表达被引量：5
- 2007年
- 从Bacillus alcalophillus PB92中扩增出碱性蛋白酶基因Mapr,Mapr分别插入到大肠杆菌载体pET-22b(+)和枯草芽孢杆菌载体pWB980中构建成重组分泌型表达载体pET22b(+)-Mapr、pWB980-Mapr。碱性蛋白酶基因分别在大肠杆菌宿主BL21和枯草芽孢杆菌DB104中得到表达。SDS-PAGE分析,重组蛋白酶的分子量为28kD。在大肠杆菌,所得酶活为231U/ml,而在枯草芽孢杆菌,其酶活为1563U/ml。大概是由于碱性蛋白酶在枯草芽孢杆菌折叠成熟机制与大肠杆菌的不同造成的。
- 孙同毅陈坤郝继兴路福平杜连祥
- 关键词：嗜碱芽孢杆菌碱性蛋白酶大肠杆菌枯草芽孢杆菌
- 高活力碱性蛋白酶产生菌的选育与发酵放大被引量：7
- 2009年
- 为了选育高活力碱性蛋白酶产生菌株。采用复合诱变(紫外照射、NTG、离子注入)方法,结合平板初筛与摇瓶复筛。获得一株高产突变株HAPN-169,其酶活力为3.5×10u/mL。高产菌株HAPN-169根据气液接触中体积传氧系数kLa相同的原则发酵放大(7L,30L,200L),其发酵参数为:温度34℃,装液系数0.7,接种量5%,使溶氧维持在20～30%,控制发酵过程pH不低于7.0。在7L发酵罐,发酵时间为54小时,酶活力为3.6×104u/mL;在30L发酵罐,发酵时间为50小时,酶活力为3.86×104u/mL;在200L发酵罐,发酵时间为36小时,酶活力为4.2×104u/mL。发酵液pH在7.5左右时,酶活力在峰值,发酵终点一到,必须马上下罐。该结果对为我国碱性蛋白酶工业发展提供一定的基础。
- 孙同毅殷向斌郝继兴陈坤路福平杜连祥
- 关键词：碱性蛋白酶离子注入
- 乳酸菌细胞壁结合蛋白酶的研究进展
- 乳酸菌是研究较为广泛的微生物种群之一。在生长和发酵过程中,乳酸菌对相关蛋白的水解对其自身营养供给以及相关功能物质的生成起到关键作用。模式菌乳酸乳球菌的蛋白水解体系是乳酸菌中研究最为彻底的,目前已建立包括酪蛋白水解、运输和...
- 韩钊陈坤田华李军训张同存
- 关键词：乳酸菌酪蛋白生物活性肽微生物种群
- 文献传递
- 嗜碱芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶基因启动子的克隆及应用被引量：2
- 2008年
- 利用TAIL-PCR方法从嗜碱芽孢杆菌PB92基因组中扩增出碱性蛋白酶基因上游启动子活性片段,测序分析后登录GenBank(EU130686)。此序列具有多个启动子特征区域,且在-538～-370 bp和-275～-128 bp两个区域存在反向读码框。对启动子片段进行功能缺失的分析结果表明,TSS上游105 bp片段具有明显启动子活性,但以长为414 bp～619 bp时活性更为显著。此外,对PB92碱性蛋白酶的信号肽分析结果表明,此信号肽具有典型分泌型(Sec-type)信号肽结构。将PB92碱性蛋白酶基因启动子和信号肽序列克隆入pBE2,构建成表达载体pBEAC,并以其为载体实现了植物甜蛋白monellin基因在枯草芽孢杆菌1A751中的高效表达。
- 陈坤黎明成堃杜连祥张同存路福平
- 关键词：TAIL-PCR信号肽
