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利用乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA构建慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型: 2015年; 目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收集不同时间点的血清和肝组织。利用放射免疫法检测血清样本中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg);荧光定量PCR检测血清和肝组织中HBV DNA拷贝数;免疫组织化学法检测肝组织中HBsAg和乙型肝炎病毒核心抗原(HBc Ag)的表达;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;使用SPSS 17.0对数据进行统计学分析。结果实验组HBsAg和HBeAg表达均呈现4个上升-下降曲线:HBsAg峰值分别出现在第3天、第3周、第7周和第9周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第1周、第4周和第10周。对照组HBsAg和HBeAg表达分别呈现2个或3个明显的峰:HBsAg峰值分别出现在第3天和第8周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第3周和第10周。空白组未检测出HBsAg和HBeAg。实验组HBV DNA拷贝数高于对照组的拷贝数(P<0.01);肝组织中HBV DNA拷贝数高于同期血清中的拷贝数(P<0.01);实验组和对照组的肝组织中均有HBsAg和HBc Ag的表达;实验组与对照组出现肝脏细胞炎症、肝细胞纤维化、肝细胞坏死等病理变化,而空白组正常。结论利用水动力法向C57BL/6小鼠体内转入HBV cccDNA,成功建立了慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型,与对照组比较,新建立的小鼠乙肝模型具有更高的HBV表达,动物模型为研究乙型肝炎病毒HBV cccDNA的感染及其引起肝损伤的机制奠定了基础。; 严磊赵婷婷王会娟李小松黄爱龙谭毅赖国旗; 关键词：乙型肝炎病毒小鼠模型

体内转导HBVcccDNA法建立HBV慢性感染的小鼠模型被引量：7: 2014年; 目的通过体内转导乙型肝炎病毒（HBV）cccDNA，建立持续表达HBV抗原的小鼠乙型肝炎模型。方法取10只裸小鼠，将HBVcccDNA以3μg／只、2μg／只、1ug／只分别注射实验组，同时以2ml等渗盐水注射空白组，分别于第1、3天，第1、2、3、4、5、6、8、10周进行尾静脉采血。用放射免疫法检测血清中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）浓度的变化；荧光定量PCR检测血清和肝组织中HBVDNA拷贝数；免疫组织化学法检测肝组织中HBV抗原特异性;苏木素-伊红（HE）染色观察肝组织病理变化。使用SPSS17．0对数据间相关性进行线性相关分析。结果小鼠在注射cccDNA后，从第1天开始于血液中检测到HBsAg和HBeAg的表达，两者均于第1周内迅速升高达到最高值，并持续至第10周；其中HBsAg的表达水平经历了两个先上升再下降的过程（第4周为较低水平，第8周为较高水平），而HBeAg的表达水平经历了三个先上升再下降的过程（第2周、第4周为较低水平，第3周、第6周为较高水平）；荧光定量PCR结果表明，10周后肝组织中HBVDNA的拷贝数随着高、中、低剂量组而递减，每克肝组织中HBVDNA拷贝数[（1．14E＋07）±（6．51E＋06）、（9．81E＋06）±（9．32E＋06）、（3．72E＋06）±（2．35E＋06）]与注射的cccDNA浓度（1．5、1．0、0．5μg／m1）呈正相关（皮尔森相关系数，=0．979）。10周后血清中HBVDNA的拷贝数为中剂量组最高，其次为高剂量组，同时，各组血清中的HBVDNA拷贝数较肝组织中的低；免疫组织化学结果显示，实验组裸小鼠肝组织中存在HBsAg和HBcAg的表达，HE染色结果显示肝组织脂肪样或空泡样变性严重，肝小叶组织结构不明显。结论本研究利用HBVcccDNA质粒体内转导裸小鼠，成功建立了HBV在肝组织稳定复制并持续表达HBV抗原的裸小鼠模型，为进一步研究HBVcccDNA慢性持续感染; 赵婷婷李小松殷文伟蔡雪飞张文露陈飞兰赖国旗黄爱龙

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李小松

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