龚志飞
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南京大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项常州市武进区科技局资助项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 重组人抗血栓蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达及纯化被引量：4
- 2011年
- 旨在优化重组人抗血栓蛋白(rHAP)工程菌的自诱导培养基,以提高菌体产量及可溶性的重组rHAP蛋白含量。选取蛋白胨、酵母提取物、甘油、葡萄糖为因素,各取4个水平,采用正交表L16(45)进行试验设计,对影响菌体生长和可溶性rHAP表达水平的乳糖浓度进行了优化。结果表明自诱导培养基碳氮源的最优配比:2%蛋白胨,1.5%酵母,0.5%甘油,0.03%葡萄糖,0.2%乳糖。此时表达菌密度OD600和可溶性rHAP目标蛋白表达量分别是未优化前的2.04倍和2.85倍。在20 L发酵表达时,rHAP工程菌OD600值高达93,菌体湿量为1 620 g/20 L。利用Q-Sepharose和SP-Sepharose纯化,Western blotting结果表明表达蛋白为目的融合蛋白。
- 龚志飞杨翔颜法宝陈强孙小强华子春
- 关键词：发酵纯化
- 重组人抗血栓蛋白(rHAP)工程菌表达条件的优化被引量：1
- 2011年
- 优化重组人抗血栓蛋白(rHAP)工程菌的培养基及培养和表达条件,提高菌体产量及可溶性的重组rHAP蛋白含量。通过单因素及正交实验,对影响重组大肠杆菌生长及rHAP蛋白表达的培养基的组分、诱导剂的浓度、培养温度等工艺条件进行优化。结果表明半合成培养基成分的最优配比:0.5%蔗糖、1%蛋白胨、3%酵母提取物,IPTG诱导剂浓度为0.2 mmol/L,37℃培养4 h,开始诱导5 h,诱导温度为32℃。优化培养基及培养条件提高了菌体的生长密度及可溶性rHAP目标蛋白的表达量,表达菌密度OD600和可溶性rHAP目标蛋白表达量分别是没有优化前的1.85倍和2.59倍。在20 L发酵表达时,rHAP工程菌OD600值高达73,菌体湿量为1 957 g/20 L。
- 龚志飞杨翔颜法宝陈强孙小强华子春
- 关键词：基因工程
