王希庆
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：吉林省教育厅科研项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- ldhL-ldb0094基因敲除对保加利亚乳杆菌产L-乳酸的影响被引量：6
- 2019年
- 以保加利亚乳杆菌Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus CICC21101为出发菌株,利用PCR扩增L-乳酸脱氢酶(ldhL)基因上下游序列ldhL1、ldhL2,获得ldhL基因缺失且包含上下游序列的片段,连接到乳酸菌专用温敏性基因敲除质粒pGhost4,将构建好的敲除载体电转入保加利亚乳杆菌CICC21101,低温筛选。结果表明,成功获得敲除ldhL基因的敲除突变株,敲除后的工程菌D-乳酸产量由30. 5g/L降为4. 8g/L,L-乳酸的产量由25. 4g/L增至58. 3g/L,光学纯度由54. 56%增至90%。同时发现ldhL-ldb0094基因的敲除致使ldhL-ldb1020表达的上调,D-乳酸脱氢酶(ldbD)基因表达量没有变化,ldhL基因敲除株的成功构建将为进一步研究该基因在保加利亚乳杆菌中的功能及后续高光学活性D-乳酸工程菌构建奠定基础。
- 王刚肖雨李义刘志刚裴成利武丽达李艳丽李艳丽王希庆张明磊陈光
- 关键词：保加利亚乳杆菌L-乳酸脱氢酶同源重组
- 基于pGhost4系统保加利亚乳杆菌乙酸激酶敲除载体的构建被引量：2
- 2016年
- 保加利亚乳杆菌凭借其微生物特性和效能优异等特点成为当下产乳酸最重要的微生物菌株之一。乙酸是保加利亚乳杆菌代谢乳酸最主要的副产物,它的大量生成降低葡萄糖的代谢利用率,并且消耗了能量。乙酸激酶是控制乙酸生成的关键酶,敲除乙酸激酶基因,理论上可以阻断戊糖磷酸途径中乙酸的生成,从而优化代谢途径提高葡萄糖代谢乳酸的利用率。研究以Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus ATCC 11842公布的乙酸激酶基因ack序列设计引物,以保加利亚乳杆菌基因组DNA为模板,PCR克隆出ack上下游片段,利用重叠PCR技术将上下游片段拼接在一起,并连入具有温敏性的p Ghost4载体。
- 张明磊武丽达王希庆陈光王刚
- 关键词：保加利亚乳杆菌基因敲除
- 假肠膜明串珠菌D-乳酸脱氢酶基因的克隆与表达
- 2016年
- 利用PCR的方法从假肠膜明串珠菌(Leuconostoc pseudomesenteroides 1159)的DNA中扩增得到D-乳酸脱氢酶基因,构建重组克隆质粒(pMD19-T-DLDH),转化DH5α进行蓝白斑筛选,得到阳性克隆提取质粒双酶切验证。连接pET-32a表达质粒,构建重组表达质粒,提取质粒双酶切、测序验证,测序结果与原序列基本相符。得到重组表达质粒pET-32-DLDH转化BL21大肠杆菌IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示有明显大小约为19 ku的特异蛋白条带。
- 王希庆武丽达张明磊王刚陈光
- 关键词：克隆
- 玉米秸秆同步糖化生物炼制D-乳酸的工艺研究被引量：3
- 2016年
- 近年来随着聚乳酸市场的进一步推广，D-乳酸的需求量日益增加，全球D-乳酸的需求量每年以6％～8％的速度增长。以吉林农业大学生物转化与发酵工程实验室保存的左旋乳酸芽孢杆菌W-1为试验材料，开展了玉米秸秆同步糖化发酵产D-乳酸的工艺研究。结果表明：当葡萄糖质量浓度为90g／L，含氮量5g／L，接种量为10％，高温蒸煮玉米秸秆芯30g／L，纤维素酶添加量300U／L时，37℃发酵6d，产酸量达最大值，为72∥L，较不添加秸秆的产酸量提高142％。
- 王刚武丽达张明磊王希庆陈光
- 关键词：玉米秸秆D-乳酸发酵工艺
- 保加利亚乳杆菌微胶囊化工艺研究被引量：4
- 2018年
- 目的制备保加利亚乳杆菌微胶囊,提高菌株的酸、热耐受性及降低菌体的分离成本。方法以保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)为研究对象,海藻酸钠(SA)为壳材、CaCl2为固化剂,制备保加利亚乳杆菌微胶囊;包埋率、颗粒平均化程度、机械强度等为考核指标,研究保加利亚乳杆菌微胶囊化的工艺。结果当海藻酸钠浓度为0.75%、CaCl2浓度为3%、电压为600V、泵速为1.96mL/min、震动频率为80Hz时,微胶囊化包埋效果最佳,经固定化后的菌微胶囊保持了良好的保加利亚乳杆菌的活性,微囊化保加利亚乳杆菌经过2次连续发酵后的产酸量分别达到59.4g/L和55.8g/L。结论本研究为工业化生产乳酸提供了一条具有经济价值的途径。
- 肖雨王刚于潇萧张明磊王希庆张洁静刘娟张斯童苏英杰李艳丽陈光
- 关键词：益生菌保加利亚乳杆菌微胶囊影响因素活性
