李力
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo^+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS。用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF- 7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS。筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台。
- 贾永侠赵帆马红芳李力黄蓓郑子瑞宋婷魏从文何湘张艳红钟辉
- 关键词：MAVS转录活性
- 线粒体抗病毒信号蛋白MAVS真核表达质粒的构建及表达
- 2008年
- 目的:构建线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)真核表达质粒。方法:从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得MAVS的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆进行测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-MAVS。借助脂质体转染pcDNA3/flag-MAVS质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用β干扰素的荧光素酶报告基因(IFN-β-luc)检测MAVS蛋白活性。结果:Western印迹实验证明pcDNA3/flnag-MAVS可以在HEK293T细胞中表达MAVS,并且能使IFN-β报告基因活性明显增强。结论:构建了重组质粒pcDNA3/flag-MAVS,在细胞中表达MAVS后具有刺激IFN-β转录的生物活性。
- 倪才飞赵帆郑子瑞黄蓓马红芳李力宋婷魏从文何湘张艳红钟辉
- 关键词：MAVSIFN-Β荧光素酶报告基因
- 抗结肠癌抗体重链可变区和κ轻链基因的克隆被引量：2
- 1998年
- 目的：从一株抗结肠癌细胞系ＬＳ１７４Ｔ的单抗细胞株ＣＬ－４中克隆出抗结肠癌抗体重链可变区和κ轻链基因。方法：用一步法提取总ＲＮＡ，逆转录形成ｃＤＮＡ，设计并合成一套扩增小鼠抗体重链可变区和完整κ轻链的通用引物，通过ＰＣＲ扩增基因，分别克隆入ｐＵＣ１９，作核苷酸序列分析。结果：用重链引物扩增获得长约３６０ｂｐ的片段；用轻链引物扩增获得约６４０ｂｐ的片段，序列测定获得它们的ＤＮＡ序列。结论：克隆的重链可变区基因长度为３６０ｂｐ，属于小鼠重链可变区Ｉ（Ｂ）亚族；κ轻链长度为６４２ｂｐ，其中可变区为３２１ｂｐ，属于小鼠κ轻链Ⅴ亚族。
- 李启胜俞炜源王翔王翔李力
- 关键词：结肠肿瘤重链可变区克隆
- 抗结肠癌抗体Fab片段在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 1999年
- 目的：在大肠杆菌中表达抗结肠癌抗体Ｆａｂ片段，比较表达产物和原杂交瘤单克隆抗体的抗原结合特性。方法：以ＤＮＡ重组法构建重组表达质粒，在大肠杆菌中进行表达。对表达产物包涵体进行复性。用ＥＬＩＳＡ法和ＳＡＢＣ法测定复性产物的抗原结合特性。结果：构建了抗结肠癌相关抗原抗体Ｆａｂ片段的重组表达质粒ｐＧＬ４，在大肠杆菌ＪＭ８３中获得表达，表达的Ｆａｂ片段占全菌蛋白的２１％，主要以包涵体形式存在；对包涵体进行分离、变性和复性后得到了有活性的Ｆａｂ分子。结论：复性后的Ｆａｂ具有与原杂交瘤单克隆抗体相同的抗原结合活性。
- 李启胜俞炜源王翔王翔李力
- 关键词：FAB片段大肠杆菌结肠肿瘤
