李楠
- 作品数：34 被引量：92H指数：6
- 供职机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>
- 发文基金：云南省科技厅科研基金国家自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 西藏环状病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：5
- 2020年
- 建立西藏环状病毒(Tibet orbivirus, TIBOV)RT-PCR诊断方法。根据云南省新分离到的TIBOV Seg-7片段序列设计1套巢式引物为120S7F1/R1、120S7F2/R2。以TIBOV DH13C120株病毒核酸为模板,优化反应条件,建立巢式RT-PCR检测方法,并对云南省新分离的9株TIBOV进行核酸检测。分别采用外引物(120S7F1/R1)和内引物(120S7F2/R2)对TIBOV DH13C120株进行RT-PCR扩增,退火温度分别为52℃和54℃,外引物扩增出片段大小为1 050 bp条带;内引物扩增出的片段大小为500bp,扩增条带大小与设计预期相一致。而蓝舌病毒(BTV)JCC12-7株和阴性对照两轮扩增均为阴性,采用该方法对云南省新分离的9株TIBOV、2株BTV和1株鹿流行性出血热病毒(EHDV)进行检测,9株TIBOV扩增均为阳性,而BTV、EHDV和阴性对照均为阴性。建立了TIBOV巢式RT-PCR检测方法,该方法可用于云南省目前动物或媒介中流行的TIBOV核酸检测。
- 元正菊李楠何于雯孟锦昕王静林
- 云南省师宗县蚊虫中版纳病毒核酸检测及其序列分析
- 2020年
- 为了解云南省师宗县五龙乡和高良乡的蚊虫携带版纳病毒(BAV)情况。2013年7月在师宗县五龙乡和高良乡牛圈、猪圈、羊圈采集蚊虫标本,共采集库蚊、按蚊、伊蚊、Lufzia和阿蚊等5个属的7种蚊虫3705只,分为88批进行研磨,从蚊虫悬液中提取总RNA,反转录合成CDNA,采用版纳病毒12节段特异引物进行检测,其中1批蚊虫样本(SZ32)版纳病毒RT-PCR扩增阳性,扩增阳性产物进行测序,获得849个核苷酸(nt)序列。采用生物信息学软件进行同源性和遗传进化分析,结果显示从SZ32批蚊虫样本获得的序列与云南省和越南分离的版纳病毒位于A1基因亚型的进化分支内,核苷酸和氨基酸同源性分别在93.7%~98.4%、95.6%~98.7%,而与中国北方地区分离的版纳病毒(A2基因亚型病毒)和印度尼西亚分离的版纳病毒(B基因型)位于不同进化分支内,核苷酸同源性低于91.3%,氨基酸同源性低于93.4%,提示SZ32批蚊虫中检测到版纳病毒。表明在云南省师宗县的蚊虫存在A1基因亚型版纳病毒流行,其遗传进化关系与云南省边境地区流行的版纳病毒株较密切。
- 吕顺燕李楠何于雯孟锦昕杨绍昌王静林
- 关键词：版纳病毒蚊虫
- 云南蓝舌病病毒1型毒株M6基因序列分析被引量：8
- 2016年
- 为了解云南蓝舌病病毒（Bluetongue virus,BTV）1型M6基因流行株的遗传变异及其与国内外流行病毒的遗传进化关系,试验从细胞培养物中分别提取4株云南分离株BTV-1（Y863、SZ120169、6-12和7-12）RNA,用M6基因特异引物进行RT-PCR扩增和测序,采用生物信息学软件对获得的M6基因编码区序列进行核苷酸、氨基酸同源性比对及遗传进化分析。结果表明,分别获得4株云南分离株BTV-1 M6基因1 763bp序列;4株云南分离株BTV-1核苷酸同源性在95.2%-99.9%之间,氨基酸同源性在97.6%-99.8%之间,1979年师宗分离的Y863病毒毒株与2012年师宗（SZ120169）、2013年江城（6-12、7-12）分离的3株病毒毒株核苷酸同源性分别为95.5%、95.2%和95.2%,氨基酸同源性分别为97.6%、98.4%和98.2%,而近两年（2012、2013）分离病毒核苷酸和氨基酸同源性较高,分别在96.9%-99.9%和99.1%-99.8%之间;遗传进化分析发现,4株云南分离株BTV-1为Eastern基因群病毒,它们之间核苷酸和氨基酸同源性分别为95.2%-99.9%和97.6%-99.8%;进一步分析发现4株云南分离株BTV-1与希腊及澳大利亚BTV-1型毒株亲缘关系较近,核苷酸和氨基酸同源性分别为90.4%-95.6%和95.1%-99.1%,而与地中海国家（意大利、法国、阿尔及利亚、摩洛哥和突尼斯）和南非毒株关系较远,核苷酸和氨基酸同源性分别在83.8%和95.7%以下。4株云南分离株BTV-1属于Eastern基因群病毒,云南分离株BTV-1 M6基因在自然进化中发生遗传变异缓慢,该基因可以用来进行BTV-1基因群分布及毒株的地理区域来源相关的研究。
- 李楠朱建波肖雷李乐杨恒孟锦昕何于雯李华春
- 关键词：蓝舌病病毒
- 云南省德宏州东方库蠓中西藏环状病毒的分离鉴定被引量：1
- 2022年
- 目的了解云南省德宏傣族景颇族自治州(德宏州)芒市采集库蠓携带西藏环状病毒(TIBOV)情况及其潜在传播媒介,丰富云南边境地区环状病毒的研究。方法2016年8月在德宏州芒市郊区的牛舍和羊舍用诱蚊灯夜间采集蠓,对采集到的蠓在显微镜下进行初步分类,采用金黄地鼠肾细胞(BHK-21)和白纹伊蚊卵细胞(C6/36)进行病毒分离,阳性分离物分别使用甲病毒属、黄病毒属、TIBOV S7和S10特异引物进行鉴定,对阳性扩增产物测序,采用MEGAⅩ等生物信息软件进行序列分析。同时,提取相应库蠓基因组DNA,采用细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)特异引物鉴定库蠓种类。结果将采集到的库蠓分44批研磨,获得1株可引起BHK-21和C6/36细胞病变的毒株(编号:DHC217-11),接种标本研磨的上清液48 h后,BHK-21细胞出现明显病变;接种标本研磨的上清液72 h后,C6/36细胞出现明显病变。甲病毒属、黄病毒属引物扩增均为阴性,TIBOV S7和S10引物扩增均为阳性,测序后分别获得新分离病毒第7节段(S7)1085 bp和第10节段(S10)723 bp序列。序列分析结果显示,新分离DHC217-11株病毒在S7和S10基因序列构建的遗传进化树上,与6株TIBOV位于同一个进化分支内,它们之间的核苷酸同源性分别为93.4%~99.5%(S7)和81.3%~97.1%(S10),而与蓝舌病毒、鹿流行性出血热病毒等其他环状病毒位于不同进化分支,核苷酸同源性低于62.7%(S7)和58.9%(S10);进一步分析发现新分离DHC217-11株病毒S7基因序列与2013年芒市库蠓分离TIBOV DH13C120株核苷酸同源性最高,为99.5%,S10基因序列与2017年西双版纳傣族自治州分离的TIBOV SX-2017a株核苷酸同源性最高,为97.1%,提示新分离DHC217-11株病毒为TIBOV。采用库蠓COⅠ基因引物对DHC217-11批库蠓进行分子鉴定,序列分析结果显示DHC217-11批库蠓COⅠ基因序列与东方库蠓遗传进化关系较近,它们之间核苷酸同源性最高为99.8%,提示该批库蠓为东方库
- 杨怡铃何于雯李楠孟锦昕殷建忠王静林
- 关键词：遗传进化分析
- 蓝舌病自然感染病毒核酸、抗体转阳和病毒分离相关性研究
- 为了提高蓝舌病病毒分离效率,本实验2015年在师宗县设置监控点,选择蓝舌病抗体阴性的10头牛和5只羊作为监控动物,5月-10月每周采血1次,每次每头动物分别采集肝素抗凝血、EDTA抗凝血和常规全血各1份,分别检测蓝舌病抗...
- 李楠孟锦昕肖雷苗海生高林宋建领李华春
- 关键词：反刍动物蓝舌病自然感染抗体检测病毒分离
- 云南省双江县4种多足摇蚊翅膀形态特征及COI基因序列分析被引量：1
- 2021年
- 明确云南省双江县布京村大勐峨组黄牛养殖场采集的4种多足摇蚊翅膀形态特征和COI基因序列分子特征。2020年4月在云南省双江县采集摇蚊标本,采用体视显微镜根据虫体形态学特征对采集到的摇蚊进行初步鉴定,选取11只摇蚊进行翅膀形态特征观察,同时提取这11只摇蚊基因组DNA,采用COI基因特异引物进行PCR扩增,测序,采用DNA Star、MEGA X等软件进行核苷酸同源性和系统进化分析。共采集摇蚊标本160只,其中雄虫9只(5.6%)、雌虫151只(94.4%)。根据翅膀淡斑和暗斑的数量、形态、大小、位置分为4类,分子鉴定结果显示本次双江采集的摇蚊也分为4种,即Polypedilum sp 3 SC(KU497064)、Polypedilum sp 2 SC(KU497084)、P.japonicum和P.scalaenum,其构成比分别为81.25%、11.25%、3.75%和3.75%。结论:双江县可能存在4种多足摇蚊属摇蚊,Polypedilum sp 3 SC(KU497064)摇蚊为优势摇蚊。
- 杨绍昌浦朝忠何于雯孟锦昕李楠王静林
- 关键词：摇蚊形态学鉴定COI基因
- 昆明地区尖音库蚊复合组蚊虫分子鉴定被引量：2
- 2021年
- 从分子水平明确云南省昆明地区尖音库蚊复合组蚊虫分类,为媒介及其传播虫媒病毒病控制提供依据。2017年5月在昆明市青龙山云南省畜牧兽医科学院家属区室内采集蚊虫标本,根据形态学和分子生物学方法对蚊虫标本进行种类鉴定。2017年5月17日—22日5 d共采集到蚊虫标本50只,均为雌虫,在体视显微镜下观察50只蚊虫形态特征均相同,具有虫体中等大小,淡棕色;喙无清楚界限的白环,腹节背板有淡色基带,平齐和侧板相连,各足跗节全部色暗、无淡色环等形态特征。COI、COII和ITS 3个基因遗传进化分析结果显示:昆明采集蚊虫M1与尖音库蚊复合组的尖音库蚊、骚扰库蚊、淡色库蚊和致倦库蚊遗传进化关系密切,核苷酸同源性均在96.4%~100%;在ITS基因构建的系统进化树上,昆明采集蚊虫M1与尖音库蚊和骚扰库蚊位于同一进化分支内,核苷酸同源性也较高,在99.1%~99.9%,而与淡色库蚊和致倦库蚊位于不同进化分支,核苷酸同源性也较低,在96.4%~96.6%。通过形态学和分子生物学方法鉴定了昆明地区存在与尖音库蚊和骚扰库蚊遗传进化关系密切的库蚊。
- 王娟元正菊何于雯李楠孟锦昕王静林
- 关键词：尖音库蚊复合组分子生物学鉴定
- 昆明缘腹细蜂科昆虫形态描述与 CO Ⅰ 基因序列分析
- 2022年
- 2022年4月,在昆明市金殿青龙山采集到一只小型膜翅目昆虫,体长约2 mm,虫体为黑色,触角12节,柄节和梗节之间呈膝状弯曲,第3-7节念珠状,第8-11节较大、圆隆,第12节呈圆锥形;胸有翅2对,翅大部分无色透明,前翅有痣脉;胸部与腹部连接处收缩为细腰状,产卵器从尾部末端伸出。采用昆虫线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异引物进行扩增测序,用MEGA 6.0等生物信息学软件进行序列分析。结果显示,该昆虫与缘腹细蜂科的粒卵蜂属、黑卵蜂属同处一个进化分支,与广腹细蜂科分属不同进化分支,提示昆明采集的昆虫为缘腹细蜂科昆虫。本研究对采集的昆虫进行了形态学描述及遗传进化关系分析,为缘腹细蜂科和膜翅目昆虫的研究提供新的资料。
- 李苏胜孟锦昕何于雯杨振兴李楠王静林
- 关键词：形态学
- 广东蚊东南亚十二节段病毒属芒市病毒的分离与鉴定被引量：6
- 2020年
- 为了解广东蚊携带虫媒病毒的情况,2014年6月在汕头市濠江区采集蚊标本,用细胞培养法分离病毒,对病毒分离物进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定,测定S1、S2、S3片段序列,并对序列进行同源性和系统进化分析。从采集到的蚊中分离到2株致C6/36细胞产生病变的分离物(编号为GD1和GD7)。电镜观察显示,完整病毒颗粒呈球形,直径约66 nm,无包膜。琼脂糖凝胶电泳结果显示,GD1和GD7两株新分离病毒基因组为12节段,其带型与2015年仅在云南新分离出的东南亚十二节段病毒属芒市病毒相似。新分离的2株病毒GD1和GD7的S1、S2、S3片段核苷酸序列同源性均为100%,与芒市病毒DH13M041核苷酸序列同源性最高,均为98.2%、99.2%、98.5%,而与十二节段病毒属中其他病毒如版纳病毒、辽宁病毒、卡皮罗病毒和Balaton病毒核苷酸序列同源性分别低于69.1%、62.7%、57.6%。GD1和GD7两株病毒S1、S2、S3片段核苷酸序列系统进化分析结果均显示,2株新分离病毒的亲缘关系最近,且与芒市病毒DH13M041位于同一分支上,亲缘关系较近,而与东南亚十二节段病毒属其他病毒具有明显差异。提示这2株广东新分离病毒为芒市病毒,这是除云南以外地区首次分离到该病毒,此次在广东分离到芒市病毒扩大了对东南亚十二节段病毒属病毒地域分布的了解。
- 李楠何于雯孟锦昕王静林
- 关键词：系统进化分析
- 云南省墨江县库蠓中一株西藏环状病毒的分离及全基因组序列分析被引量：1
- 2022年
- 西藏环状病毒(Tibet orbivirus,TIBOV)于2009年首次从中国西藏自治区采集的圆斑按蚊中分离出,目前在中国的云南省、广东省、湖南省和临国日本均有分离报道。2017年我们从云南省墨江县采集的库蠓样品中分离到一株病毒(MJC1-7),接种BHK-21和C6/36细胞后均可产生聚集、皱缩和脱落等明显细胞病变。1%的琼脂糖凝胶电泳显示,病毒基因组为十节段的双链RNA,呈现“3-3-3-1”的带型。通过病毒全长cDNA扩增和测序获取MJC1-7毒株的全基因组核苷酸序列,病毒基因组全长为19260 bp(包括编码区18495 bp和非编码区735 bp),由Seg-1(3950 bp)至Seg-10(832 bp)的10个基因节段构成,可编码6165个氨基酸残基。对环状病毒保守的VP1(Pol)、VP3(T2)和VP7(T13)蛋白氨基酸序列及系统发育分析显示,MJC1-7毒株与TIBOV亲缘关系最近,氨基酸序列相似度为95.4%~99.7%。对决定环状病毒血清型VP2(OC1)蛋白氨基酸序列与系统发育分析显示,MJC1-7与云南(SX-2017a、DH13C120和YN15-283-01)和广东(D181/2008)分离的TIBOV毒株聚为一簇,氨基酸序列相似度为97.3%~98.6%,而中国西藏毒株(XZ0906)和日本毒株(KSB-8/C/09和KSB-3/C/10)形成了另外3个独立的进化分支,MJC1-7与其相似度仅为27.8%~41.8%,以上结果表明MJC1-7毒株与云南和广东毒株有更近的亲缘关系,而中国西藏和日本毒株可能为Seg-2(OC1)基因变异较大毒株。本研究报道了一株TIBOV在我国云南省墨江县库蠓上的分离以及全基因组序列分析,研究结果进一步丰富了我们对TIBOV的认知,为深入研究我国TIBOV的分布、致病性与病原学检测技术提供了基础数据。
- 杨振兴孟锦昕何于雯李楠王静林
- 关键词：库蠓病毒分离
