张萌萌
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 供职机构：南京农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛肌内前体脂肪细胞的分离培养及分化相关基因的表达规律研究被引量：10
- 2018年
- 旨在建立肉牛肌内前体脂肪细胞的体外培养体系,从细胞和分子水平探索肉牛肌内脂肪组织增殖和分化的生物学特征。采集成年牛背最长肌,分离肌内脂肪组织,采用Ⅰ型胶原酶分离获得前体脂肪细胞,进行前体脂肪细胞的原代和传代培养,并对其进行形态学观察、生长曲线测定、油红O染色鉴定及脂质含量的测定,且采用实时荧光定量RT-PCR的方法检测脂肪细胞分化关键基因PPARγ、C/EBPα、FABP4、ADIPOQ、ATGL、HSL、LPL mRNA在牛肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达。结果：分离的牛原代前体脂肪细胞约6 h开始贴壁,贴壁的细胞呈小梭形或不规则的三角形,经传代后成分均一,贴壁良好,呈成纤维细胞样形态,第5-11天细胞进入指数生长期,细胞生长曲线近似S形;诱导培养第8天细胞充脂率高,油红O染色呈红色,细胞内脂质含量显著高于未诱导组,具有前体脂肪细胞的典型特征;PPARγ、C/EBPα、FABP4、ADIPOQ和ATGL的表达量随着分化过程增强,HSL的表达量随着分化过程逐渐降低,而LPL的表达量在分化早期逐渐升高,分化后期逐渐下降。综上,本研究成功建立了牛肌内前体脂肪细胞的培养方法和诱导分化方法,揭示了分化关键基因在此过程中的表达规律,为进一步研究肉牛肌内脂肪沉积和改善肉品质奠定基础。
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- 关键词：分化
- 夏季和冬季肉牛棚舍发酵床饲养模式的研究被引量：6
- 2017年
- 本试验旨在通过对肉牛棚舍发酵床饲养模式调查,以期为牛用发酵床的应用提供理论依据。研究分为冬夏两期,夏季评价发酵床饲养模式对畜舍环境及肉牛生理指标的影响;冬季测试发酵床状态对其床体不同深度温度变化的影响,依据不同发酵状态区分为高温组、中温度组、低温度组,剖析其不同深度的温度变化特性。结果表明,夏季发酵床组相对湿度与温湿指数显著高于水泥地面组(P<0.05);肉牛的呼吸数、皮温和直肠温度亦显著高于水泥地面组(P<0.05)。因此,夏季发酵床会加重高温的影响。冬季发酵床不同深度的温度呈现出先升高后降低的趋势。高温组20~60 cm深度区域的温度大于35℃,显著高于0~10 cm表层(P<0.01);中温组25~45 cm区域的温度高于25℃,显著高于0~10cm和65~80 cm区域的温度(P<0.05)。床温可反应发酵实态,调查结果提示,20~45 cm区域为发酵床进行有氧发酵的主要区域。
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- 关键词：发酵床肉牛发酵
- 旋毛虫果糖-1,6-二磷酸酶基因的克隆表达及生物学特性分析
- <正>根据GenBank公布的旋毛虫果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)基因序列,设计1对特异性引物,以旋毛虫总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增出1条约为1 kb的DNA片段。测序结果表明该片段包含FBP的完整ORF,长...
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- 文献传递
- 梅山猪前体脂肪细胞的分离培养及分化相关基因的表达规律研究被引量：5
- 2017年
- 本试验旨在建立梅山猪前体脂肪细胞的体外培养体系,从细胞和分子水平探索梅山猪脂肪组织增生的生物学特征。采集3日龄梅山猪仔猪颈、背部皮下脂肪组织,采用Ⅰ型胶原酶分离前体脂肪细胞,进行前体脂肪细胞的原代和传代培养,并对其进行形态学观察、生长曲线测定、油红O染色鉴定及脂肪含量的测定,且采用实时荧光定量RT-PCR的方法检测脂肪细胞分化关键基因PPARγ、CEBPα、LPL、DLK1、FABP4及ADIPOQ mRNA在梅山猪前体脂肪细胞分化过程中的表达。结果表明:分离的梅山猪原代前体脂肪细胞约6 h开始贴壁,贴壁的细胞呈小梭形或不规则的三角形,经传代后成分均一,贴壁良好,呈成纤维细胞样形态,第1~9天细胞进入指数生长期,细胞生长曲线近似S形;诱导培养第11天细胞充脂率高,油红O染色呈红色,细胞内脂肪含量显著高于未诱导组,具有前体脂肪细胞的典型特征;PPARγ在猪前体脂肪细胞分化早期就有表达,分化第3天高度表达,CEBPα和LPL随着分化过程表达量逐渐增加,而DLK1表达量逐渐下降,FABP4和ADIPOQ在第6天高度表达。综上,本研究成功建立了梅山猪前脂肪细胞的培养方法和诱导分化方法,为进一步研究梅山猪体脂沉积和改善肉品质奠定基础。
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- 关键词：梅山猪前体脂肪细胞细胞培养诱导分化
- 旋毛虫果糖-1,6-二磷酸酶基因的克隆表达及生物学特性分析被引量：1
- 2015年
- 根据Gen Bank公布的旋毛虫果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)基因序列,设计1对特异性引物,以旋毛虫总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增出1条约为1 kb的DNA片段。测序结果表明该片段包含FBP的完整ORF,长1 026 bp,编码341个氨基酸。BLAST分析发现其核酸和氨基酸序列与已知旋毛虫FBP的基因和氨基酸序列的相似性分别为99%和100%。将该ORF亚克隆到p ET-32a(+)载体中,酶切鉴定正确后转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,结果表明该融合蛋白大小为55.4 ku,重组蛋白主要以包涵体的形式表达。Western blot结果显示该重组蛋白能被旋毛虫感染小鼠血清识别。对纯化、复性的重组蛋白进行了酶活性测定,结果发现该重组酶的最适p H为7.0,最适温度为37℃。
- 张萌萌徐立新宋小凯李祥瑞严若峰
- 关键词：旋毛虫原核表达
