齐宗利
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：陕西师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其病毒制备被引量：3
- 2008年
- 目的：利用HEK293细胞内同源重组法构建带有绿色荧光蛋白报告基因的人血管能抑素（canstatin）重组腺病毒载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法：PCR法扩增canstatin全长基因,克隆至pGEM-T载体,经酶切和测序证实后,亚克隆到穿梭质粒pAd5-CMV中,获得穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin.用PacI酶单独酶切穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin和腺病毒E3区带有绿色荧光蛋白表达元件的腺病毒骨架载体,采用标准的磷酸钙方法共转染HEK293细胞.7~10d后收获细胞裂解物,在HEK293细胞中扩增,病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,分光光度计检测重组病毒滴度.结果：测序证实pEGM-T/canstatin基因片段与GenBank公布的can-statin基因序列一致.重组腺病毒质粒转染293细胞后24h观察到绿色荧光,病毒纯化后制备出高滴度重组腺病毒（病毒滴度为2.0×1015pt/L）.结论：成功构建了表达canstatin基因的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒颗粒,为研究该基因在肿瘤治疗中的作用奠定了基础.
- 齐宗利李慧瑾王东阳赵俊丽边晔冯真真蒋羽清郑晓晶夏海滨
- 关键词：腺病毒载体血管能抑素绿色荧光蛋白质类
- 人endostatin、K5及endostatin-K5重组腺病毒载体的构建及其表达被引量：3
- 2009年
- 目的:人endostatin、K5及endostatin-K5基因克隆,重组腺病毒载体的构建及其表达产物体外活性检测。方法:采用PCR方法扩增基因,通过酶切连接方法将3种基因片段克隆到腺病毒shuttle载体pAd5-CMV-H1H2-MCS-6His中;用磷酸钙沉淀法分别将经PacI酶切的表达人endostatin、K5及endostatin-K5的腺病毒shuttle载体与PacI酶切的腺病毒骨架共转染HEK293细胞;用CsCl密度梯度离心法纯化制备病毒;用重组腺病毒感染HeLa细胞并在不同时间点收获蛋白,Western blot检测24h、48h和72h的蛋白表达量;通过MTT方法检测蛋白对ECV-304生长抑制作用。结果:成功制备表达人endostatin、K5及endostatin-K5重组腺病毒载体;Westernblot可以检测到蛋白表达,蛋白表达量随病毒感染HeLa细胞的时间延长而逐渐增高;由重组腺病毒所表达的3种蛋白对ECV304细胞均有明显的生长抑制作用。结论:由含有人en-dostatin、K5及endostatin-K5基因的重组腺病毒载体所表达的蛋白对ECV-304生长具有明显的抑制作用。
- 李慧瑾张伟锋王东阳李荣华齐宗利赵俊丽夏海滨
- 关键词：ENDOSTATINK5腺病毒载体MTT检测肿瘤
- RGD修饰携带tumstatin及eGFP新型腺病毒载体的构建及其表达研究
- 2010年
- 目的构建RGD修饰表达绿色荧光蛋白（eGFP）和肿瘤抑素（tumstatin）的新型腺病毒载体。方法PCR扩增tttrnstatin基因，经克隆后构建pAd5CMV／tumstatin穿梭载体。重叠PCR方法将RGD序列插入到Ad5纤维蛋白的HI环中，获得pMfiber-RGD穿梭载体。穿梭载体与腺病毒骨架载体线性化后共转化EcoliBJ5183，构建pAd-RGD-eGFP骨架载体。最后，使用磷酸钙法将pAd5-CMV／tumstatin穿梭载体和pAd-RGD-eGFP骨架载体共转化HEK293细胞。7-10d后收集细胞裂解物得到Ad—RGD-tumstatin／eGFP病毒。将经过修饰的Ad-RGD-tumstatin／eGFP和未修饰的Ad—WT-tumstatin／eGFP病毒分别感染脑胶质瘤U87MG细胞（病毒剂量分别为1、10、100Vp／细胞），通过观察其荧光强度评估其感染效率。以上两种病毒分别感染HeLa细胞，并分别采用RT-PCR及Western blotting检测tumstatin细胞mRNA及培养上清中蛋白的表达水平。结果病毒感染48h后，可观察到修饰后的腺病毒Ad-RGD-tumstatin／eGFP对U87MG细胞的感染效率明显高于未修饰的腺病毒斛WT-tumstatin／eOFP。RT-PCR及Western blotting可检测到感染Ad-RGD-tumstatin／eGFP后的HeLa细胞中tumstatin的转录和表达。结论成功构建经RGD修饰并表达tumstatin和eGFP基因的新型腺病毒载体，为进一步研究turnstatin在低表达柯萨奇一腺病毒受体的肿瘤中的作用奠定了良好基础。
- 齐宗利王东阳边晔赵俊丽孙晓聪夏海滨
- 关键词：RGD腺病毒科肿瘤抑素
