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PRV闽A株gE基因抗原编码区片段在昆虫细胞中的表达研究被引量：4: 2004年; 伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白E是一种在伪狂犬病的根除计划中具有重要作用的糖蛋白。将伪狂犬病病毒闽A株gE基因抗原编码区片段克隆到杆状病毒Bac＿to＿Bac系统表达载体pFastBacHTa中,获得的重组表达载体pFastBacHTa＿FS转化大肠杆菌DH10BAC感受态细胞后,得到的重组BacmidDNA在脂质体介导下转染粉蚊夜蛾Hi5细胞,通过细胞内同源重组,获得了含目的片段的重组病毒。此重组病毒感染Hi5细胞后72h,细胞总蛋白的SDS＿PAGE与Western＿Blot结果表明,gE基因抗原编码区片段在Hi5细胞中得到了正确表达,表达产物约35000,占细胞总蛋白的9 31%。溶解性分析显示该片段在Hi5细胞中为不可溶性表达。; 敖敬群王瑾雯陈新华王珣章龙綮新; 关键词：伪狂犬病病毒杆状病毒基因表达

人白细胞介素12基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达(英文)被引量：5: 2002年; 人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同源交换分别插入酵母基因组AOX1区域 ,构建成含hIL 12双亚基基因的酵母工程菌PichiapastorisX33 p4 0 p35 .经 0 .5 %甲醇诱导 ,p4 0和p35两亚基在同一酵母细胞中得到了表达 ,并组装成具有生物学活性的hIL; 陈新华敖敬群杨林龙綮新王珣章陈曲侯; 关键词：活性表达

伪狂犬病病毒鄂A株囊膜蛋白gD基因在杆状病毒载体系统中的表达研究: 2002年; 克隆了伪狂犬病病毒鄂A株囊膜蛋白gD基因并进行了序列分析 ,与国际标准毒株Rice株相比 ,两者之间核苷酸序列同源性为 98% ,推导氨基酸序列同源性为 97% .利用杆状病毒GST融合载体系统对其进行了高效表达 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹均证明了表达产物为 71ku的GST gD融合蛋白 ,其产量占细胞不溶蛋白量的 2 0 %左右 .以GST gD融合蛋白作为抗原进行小鼠免疫保护实验 ,结果表明表达的GST gD融合蛋白具有较好的免疫原性 ,不仅能诱导小鼠产生血清抗体 (1∶12 8) 。; 陈新华杨林龙綮新王章陈曲侯洪文洲陈焕春; 关键词：伪狂犬病病毒鄂A株免疫原性

人白介素-12(P40)亚基在巴斯德毕赤酵母中的表达: 2001年; 运用PCR技术特异性地扩增了人IL 1 2p4 0亚基cDNA的编码区序列 ,得到 94 0bp的扩增片段 ,将其克隆于毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαC的ClaⅠ ,XbaⅠ位点 ,构建成重组表达质粒pPICZαC p4 0 .经LiCl2 转化 ,Zeocin抗性筛选 ,得到含多拷贝p4 0基因的酵母工程菌PichiapastorisX 3 3 /p4 0 ,在 φ =0 5%甲醇诱导下 ,p4 0基因得到了分泌型表达 ,培养上清的SDS PAGE及Western blot均显示表达产物相对分子质量约 4 40 0 0 ,与预计大小相符 ,薄层凝胶扫描结果表明 ,分泌型表达蛋白占培养上清总蛋白量质量的 4 7% .; 陈新华杨林陈曲侯王珣章龙綮新; 关键词：IL-12 白介素-12 巴斯德毕赤酵母 PCR技术免疫调节因子

伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段在Pichia pastoris中的表达被引量：1: 2003年; 伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白E是一种在伪狂犬病根除计划中具有重要作用的糖蛋白 .将伪狂犬病病毒闽A株 gE基因去信号肽片段克隆到巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαA中 ,获得的重组表达载体pPICZαA FL电击转化野生型酵母菌SMD116 8后 ,得到多株酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL .经高浓度ZeocinTM筛选、表型鉴定、工程菌的诱导表达及表达产物的鉴定 ,最后得到高效表达 gE基因去信号肽片段的酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL 7.工程菌 72h培养上清的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹结果显示 ,gE基因去信号肽片段表达产物大小约为 80ku ,比预期的 6 3 8ku大 .凝胶薄层扫描结合Bradford蛋白质总含量测定结果表明 ,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的 13 4 9% ,表达量可达 11 7mg/L .间接ELISA结果表明重组表达产物具有良好的抗原性。; 敖敬群王瑾雯陈新华王珣章龙綮新娄高明; 关键词：伪狂犬病病毒 GE基因信号肽

伪狂犬病病毒鄂A株包膜糖蛋白gD基因的克隆与表达被引量：3: 2001年; 克隆了伪狂犬病病毒鄂A株编码包膜糖蛋白gD的基因并进行了序列测定 ,与国外报道的Rice株相比 ,其核苷酸序列具有 98%的同源性 ,推导氨基酸序列同源性为 97%。将此基因克隆于具有全期启动子盒的杆状病毒转移载体pSX35A中 ,构建成重组转移质粒pSX35A gD ,与致死缺失型线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV OCC- )基因组DNA一起共转染粉纹夜蛾Hi5细胞 ,经同源重组 ,获得含gD基因的重组病毒AcMNPV OCC+ gD。重组病毒经空斑纯化后感染Hi5细胞进行表达分析 ,细胞裂解物的SDS PAGE及Western Blot ting均显示分子量约 47kD的gD蛋白得到了特异性表达 ,其表达量占细胞总蛋白的 6 2 % ,表达的gD蛋白具有免疫原性。; 陈新华杨林洪文洲陈焕春陈曲侯龙綮新王珣章; 关键词：伪狂犬病病毒 GD基因杆状病毒表达系统包膜糖蛋白

大黄鱼虹彩病毒腺苷三磷酸酶(ATPase)基因的克隆与表达被引量：9: 2004年; The large yellow croaker iridovirus(LYCIV)ATPase gene was cloned via PCR technique.Sequencing result of PCR product showed that it consisted of 720bp nuceleotides,encoding a protein of 240 amino acids in which a typical ATP/GTP binding site motif was contained.Then the LYCIV ATPase gene was highly expressed in Hi5 insect cells using Baculovirus Bac To Bac expressioin system.SDS PAGE analysis indicated the expression product was about 31kD,and accounted for about 12% of the total cellular protein.Recombinant ATPase was purified by Ni NTA column.A good foundation had been laid down for studying of the functions of LYCIV ATPase.; 王小文陈新华; 关键词：大黄鱼虹彩病毒腺苷三磷酸酶 ATPASE 基因致病病原

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陈新华