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瑟氏泰勒虫感染的牛外周血单个核细胞酵母双杂交cDNA文库构建及鉴定被引量：3: 2015年; 为了研究牛瑟氏泰勒虫与牛外周血单个核细胞之间蛋白的相互作用,以自然感染瑟氏泰勒虫的牛外周血单个核细胞为材料,纯化并提取总RNA,应用SMART技术合成双链cD NA（ds cD NA）。利用纯化柱纯化ds cD NA,并与线性化的p GADT7-Rec共转化酵母菌Y187,以同源重组的方式在酵母细胞内构建牛外周血单个细胞的酵母双杂交cD NA表达文库。结果显示,文库容量为4.0×108CFU/mL,随机挑取单克隆进行菌落PCR检测,插入的双链cD NA片段大小集中在0.4-2.0 kb,文库重组率为95%。表明此文库达到要求,可用于酵母双杂交筛选。; 董亮张守发许应天于龙政李积旭贾立军薛书江; 关键词：瑟氏泰勒虫外周血单个核细胞酵母双杂交 CDNA文库

基于Prime-Boost免疫策略的猪附红细胞体eno基因免疫效果评价被引量：1: 2022年; 为了评估猪附红细胞体eno基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗采用Prime-Boost免疫策略对小鼠的免疫效果,本研究应用pVAX1-eno核酸疫苗和Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗免疫接种小鼠,将20只BALB/c小鼠随机分为4组:Prime-Boost策略组、Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组、pVAX1-eno核酸疫苗组及PBS对照组。通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)抗体水平及IFN-γ、IL-4细胞因子水平,三免后测定小鼠脾脏细胞中CD4^(+)、CD8^(+)的含量,对试验数据进行统计分析。结果显示,Prime-Boost策略组接种的小鼠血清中抗猪附红细胞体特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)抗体水平均显著高于Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组(P<0.05),极显著高于pVAX1-eno核酸疫苗组(P<0.01);Prime-Boost策略组的IL-4与IFN-γ细胞因子水平、CD4^(+)与CD8^(+)水平显著高于Ad5-M/eno疫苗组和pVAX1-eno核酸疫苗组(P<0.05)。试验结果表明,与猪附红细胞体Ad5-M/eno,PVAX1-eno单疫苗相比,采用Prime-Boost免疫策略更能显著提高小鼠体液免疫水平与细胞免疫水平。; 李明宣董亮相思宇闫可心许应天薛书江; 关键词：猪附红细胞体免疫水平

猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及真核表达被引量：3: 2018年; 为构建猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒,试验根据GenBank中登录的猪附红细胞体ENO基因序列(登录号:CP002525.1)设计特异性引物,对ENO基因进行PCR扩增,并将纯化后的PCR产物克隆到pMD19-T载体中。用KpnⅠ和XhoⅠ对pMD19T-ENO进行双酶切后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体PCR^259中,构建PCR^259-ENO重组质粒,提取重组质粒进行鉴定。应用脂质体介导转染法将鉴定正确的PCR^259-ENO重组穿梭质粒转染293细胞,应用间接免疫荧光法(IFTA)检测ENO基因在293细胞中的表达。结果显示,试验克隆的ENO基因长为1 182bp,编码393个氨基酸,与GenBank中ENO基因序列(登录号:CP002525.1)同源性为99%。构建的重组腺病毒穿梭质粒PCR^259-ENO经PCR和酶切鉴定正确,并且能在293细胞中表达,表明ENO基因成功插入腺病毒穿梭质粒PCR^259中,重组腺病毒穿梭质粒PCR^259-ENO构建成功。; 王淼倪婷婷伍生军赵云宋建臣董亮薛书江; 关键词：猪附红细胞体

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董亮