张昕
- 作品数：25 被引量：39H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生交通运输工程机械工程更多>>
- 一种基于荧光素酶的HIV药物筛选细胞模型
- 目的：构建基于荧光素酶的单次感染HIV药物筛选细胞模型用于抗HIV药物筛选。
方法:构建含荧光素酶报告基因luc的假型慢病毒质粒，将VSV—G外膜糖蛋白的表达质粒，HIV-1 Rev蛋白表达质粒，HIV Gag...
- 张昕张宝中安小平刘大斌王盛李敬云周育森童贻刚
- 关键词：荧光素酶基因HIV感染药物筛选细胞模型
- 文献传递
- 一种HIV药物筛选细胞模型及其专用假型慢病毒
- 本发明公开了一种HIV药物筛选细胞模型及其专用假型慢病毒。本发明构建了表达HIV的Gag基因和Pol基因的重组表达质粒、表达报告基因的重组慢病毒质粒和表达HIV Rev基因的重组质粒。将上述3种质粒和表达疱疹性口炎病毒壳...
- 童贻刚李敬云张昕安小平周育森
- 文献传递
- 用于使活细胞中核与染色体成像的融合蛋白
- 本发明提供用于使活细胞中核与染色体成像的融合蛋白。本发明还提供包含所述融合蛋白的成像剂、编码所述成像剂的核酸、包含所述核酸的核酸构建体、载体，以及包含所述成像剂、核酸、核酸构建体或载体的细胞和包含上述之一的试剂盒。本文所...
- 童贻刚安小平张昕
- 文献传递
- 抗H5N1病毒嵌合IgA抗体基因的构建及其在CHO细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 为了表达具有中和活性的抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,采用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗禽流感H5N1-HA鼠源单克隆抗体的轻重链可变区基因及相应的信号肽编码序列,分别与人免疫球蛋白IgA2重链恒定区、Kappa恒定区基因拼接,构建表达质粒pEF-IGHA9和pEF-IGK9,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO(CHO-dhfr-)细胞,用ELISA检测培养上清中嵌合IgA抗体的表达,对纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western blotting印迹分析。结果成功地在CHO细胞中表达了抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,为制备抗H5N1重组分泌型IgA预防性抗体制剂奠定了良好的基础。
- 张宝中张昕陈万荣刘大斌王盛安小平冉多良赵光宇周育森童贻刚
- 关键词：H5N1病毒免疫球蛋白基因CHO细胞
- 人尿激酶型纤溶酶原激活因子截短型突变体与绿色荧光蛋白在真核细胞HEK293F中的融合表达
- 2013年
- 目的:构建人尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)截短型突变体与绿色荧光蛋白(EGFP)分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达。方法:采用PCR法,分别以质粒pIRES2-EGFP和重组质粒pcDNA3.1(+)/uPA为模板,扩增出带BamHⅠ和XbaⅠ酶切位点的EGFP及带NheⅠ和HindⅢ酶切位点的uPA截短体基因片段,先后将EGFP和截短型uPA基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,转入HEK293F细胞,用G418对转染细胞进行加压筛选,通过共聚焦显微镜观察和ELISA方法鉴定表达产物。结果:DNA测序结果显示,uPA不同截短型突变体基因片段与EGFP基因融合的真核表达载体构建成功,共聚焦显微镜观察发现HEK293F细胞中有绿色荧光且定位于细胞质中,ELISA检测到HEK293F细胞培养上清中分泌型融合蛋白的表达。结论:构建了uPA截短型突变体与EGFP分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达,为后期研究uPA的相互作用蛋白及其生理功能奠定了基础。
- 张连成高丽华张昕潘芸高招刚李伊培胡显文陈惠鹏
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活因子绿色荧光蛋白真核表达融合蛋白
- 基于XcmⅠ酶切的高效TA克隆载体的构建被引量：7
- 2008年
- 目的:制备基于XcmⅠ酶切的高效TA克隆载体,并检测其克隆PCR产物的效果。方法:设计一对互补配对的寡核苷酸,经过变性及退火后插入质粒pUC19的多克隆位点,从而在该多克隆位点中引入2个XcmⅠ酶切位点,用XcmⅠ酶切后即获得含有3'突出T碱基的T载体;为了提高该T载体的克隆效率,优化了2个XcmⅠ酶切位点之间的碱基数目,排除了载体自连产生白色克隆的可能性,使假阳性大大减少;此外,为了便于完全酶切与未完全酶切载体的分离,在2个XcmⅠ之间插入了一段无关DNA片段。结果:改进得到的T载体可以有效克隆PCR产物,其阳性克隆率可达95%。结论:构建了基于XcmⅠ酶切的TA克隆载体,经过改进的T载体具有很高的克隆效率。
- 顾頠张昕安小平陈锦辉刘大斌张宝中周育森童贻刚
- 关键词：T载体聚合酶链反应
- 细胞疾病靶标的负选择
- 本发明涉及细胞疾病靶标的负选择，更具体地说，本发明涉及使用基于RNAi的负筛选测定来鉴定参与活化调节元件的基因。
- 童贻刚安小平张昕
- 文献传递
- 抗人整合素αvβ3-组织因子融合蛋白基因的构建和表达被引量：1
- 2010年
- 目的:利用基因工程技术构建和表达抗人整合素αvβ3单链抗体(scFv)与人可溶性组织因子(sTF)的融合蛋白scFv-sTF。方法:用重叠延伸PCR技术扩增scFv基因,同时用组装PCR方法人工合成sTF基因,然后以酶切连接方式融合2个基因,并克隆至原核表达载体pQE80L中,构建表达质粒pQE80L-scFv-sTF,以重组子转化大肠杆菌M15诱导目的基因表达。结果:SDS-PAGE分析显示工程菌可以表达相对分子质量约55×103的融合蛋白scFv-sTF,Western印迹分析证实表达的目的蛋白具有6×His标签;经低剂量IPTG诱导和较低温度培养,scFv-sTF获得了可溶性表达;纯化回收目的蛋白,ELISA试验证实,该重组抗体分子具有良好的抗原结合活性。结论:构建并表达了抗人整合素αvβ3的单链抗体融合蛋白scFv-sTF,并验证了其抗原结合活性,初步证明它可以与抗原特异性结合,为进一步研究其抗肿瘤作用打下了基础。
- 刘大斌张昕安小平张宝中王盛周育森童贻刚
- 关键词：整合素ΑVΒ3单链抗体融合蛋白
- HIV毒株耐药表型分析细胞模型及其专用假型慢病毒
- 本发明公开了一种HIV毒株耐药表型分析细胞模型及其专用假型慢病毒。本发明构建了表达HIV Gag蛋白的质粒、表达报告基因的重组慢病毒质粒和表达HIV Rev蛋白的辅助质粒。所述三种质粒和从毒株中扩增的HIV逆转录酶和蛋白...
- 童贻刚李敬云张昕安小平周育森
- 文献传递
- 肝特异性假病毒转运系统的构建被引量：2
- 2007年
- 目的:探索一种针对慢性乙型肝炎的特异性长效基因治疗手段。方法:改造乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)为基因治疗载体,敲除其所有的开放阅读框(open reading frames,ORFs),同时保留包装信号序列,并且插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)作为报告基因。同时构建辅助细胞系,为上述病毒载体(假病毒)提供包装所需要的病毒蛋白。以该假病毒载体转染辅助细胞系,以酶联免疫方法检测细胞培养上清中乙型肝炎病毒抗原,并在荧光显微镜下观察EGFP的表达,用透射电镜观察培养上清中的病毒颗粒,同时用实时定量PCR的方法对分泌到细胞培养上清中的假病毒进行了定量检测。结果与结论:以假病毒载体转染辅助细胞后,电镜观察到培养上清中乙肝病毒的丹氏粒(Dane particle)。实时定量PCR分析结果显示,细胞分泌到培养上清的假病毒含量达103拷贝/μl。ELISA结果显示该上清中同时表达了HBV表面抗原和e抗原,通过荧光显微镜观察发现外源基因绿色荧光蛋白获得有效表达。
- 安小平朱晓峰张昕陈锦辉陈士华周育森童贻刚
- 关键词：病毒载体乙型肝炎病毒
