胡志明
- 作品数：9 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 反相HPLC监控G-CSF工程菌发酵过程中的乙酸含量
- 1998年
- 采用HPLC和GDAS分析测定G－CSF基因工程菌在发酵罐发酵培养过程中产生的乙酸含量。分析确定了乙酸含量与产物表达的量化关系，验证了乙酸抑制产物表达的作用。建立了HPLC测定培养液中乙酸含量的方法，该方法准确快速，检测灵敏度高，仪器分析重现性好，样品回收率高。
- 刁志宏胡志明郭志兵方向东王小宁
- 关键词：G-CSF工程菌发酵HPLC乙酸
- 重组人粒细胞集落刺激因子壳聚糖胶囊在大鼠体内的吸收与药理活性被引量：2
- 2003年
- 目的 :评价重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)壳聚糖胶囊经大鼠口服后的升白细胞作用和生物利用度。方法 :于rhG CSF冻干粉剂壳聚糖胶囊中加入不同量的胆酸钠 (SC)后 ,在轻度乙醚麻醉下通过聚乙烯管给正常大鼠和环磷酰胺(CPA)所致白细胞降低大鼠口服胶囊 ,观察大鼠白细胞总数 (BTL)经时变化规律。用氮兰四唑蓝 (MTT)比色法测定各种rhG CSF制剂的经时血药浓度 ,并计算曲线下面积和相对生物利用度。结果 :口服rhG CSF壳聚糖胶囊能升高大鼠BTL ,同时对CPA诱发的大鼠BTL降低具有恢复作用 ,加入SC能产生协同作用。口服rhG CSF壳聚糖胶囊的生物利用度分别为静脉注射的 8.6%和皮下注射的 17.8%。结论 :口服rhG CSF壳聚糖胶囊在升高白细胞作用中具有潜在的应用前景。
- 李国锋陈志良陈建海肖小燕谭亚非胡志明陈泽洪
- 关键词：重组人粒细胞集落刺激因子壳聚糖胶囊白细胞
- 重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的纯化及复性被引量：8
- 2002年
- 目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具有生物学活性的融合蛋白纯度达到95%,复性回收率为80%。结论此包涵体分离纯化技术简便、实用,可为中试研究和规模化生产提供基础。
- 胡志明林来兴妹周明乾陈泽洪王小宁
- 关键词：重组人白细胞介素-2绿脓杆菌外毒素融合蛋白纯化复性
- 白细胞介素4-绿脓杆菌外毒素冻干保护剂的筛选被引量：1
- 2001年
- 目的筛选白细胞介素4-绿脓杆菌外毒素最佳冻干保护剂配方。方法设计12组不同的保护剂配方,用U251细胞为靶细胞测定冻干品的活性,并对外观、溶解性进行比较。结果使用5％甘露醇+0.004％吐温80组保护剂,冻干品的活性与冻干前没有降低,冻干品外观、溶解性均优于其它配方。结论5％甘露醇0.004％吐温80组保护剂为最佳侯选保护剂配方。
- 胡志明陈泽洪孟晓静李宏增林来兴妹王小宁
- 关键词：保护剂冻干
- 角质细胞生长因子-2的发酵及纯化工艺研究被引量：4
- 2002年
- 目的研究重组人角质细胞生长因子 2 (rhKGF 2 )工程菌的高密度发酵和提纯工艺。方法通过增加培养基营养成分 ,发酵过程补加葡萄糖 ,获得高产率菌体。细菌裂解液经硫酸铵沉淀、分子筛、肝素亲和色谱和离子交换色谱等方法进行纯化 ,电泳分析结果。结果每 1L发酵液可获得菌体 12 .2g ,表达率达 2 8.7%。纯化后rhKGF 2纯度达 97%。结论rhKGF 2工程菌可获得高密度发酵。纯化工艺适用于rhKGF
- 林来兴妹胡志明孟晓静黄树琪王小宁
- 关键词：重组人角质细胞生长因子-2发酵纯化化学诱导可溶性表达
- 重组人白细胞介素-2/粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白的纯化及复性研究被引量：7
- 2001年
- 目的 研究重组人白细胞介素－２／粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＩＬ－２／ＧＭ－ＣＳＦ）融合蛋白纯化及复性的最佳条 件。方法 常规方法提取包涵体，用本室专利技术提纯，复性后样品经 ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ离子交换层析，获得融合蛋 白。结果获得具有生物活性的融合蛋白，其纯度达到９５％。结论 此工艺操作简便，纯化效果好，获得率高。
- 林来兴妹周明乾陈泽洪胡志明刘菁黄树琪王小宁
- 关键词：包涵体纯化复性
- 可溶性HLA-A2-肽组装复合物的研制及初步鉴定
- 2003年
- 目的:诱导表达HLA-A2的两个亚基-重链(HC)和轻链β2m,并将其纯化产物和特异性肽段结合为HLA-A2-肽复合体。方法:将HC工程菌和β2m工程菌经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h。经超声破菌及专利技术处理获得精制包涵体,再复性、 超滤浓缩后,用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进行纯化。然后,将HC、β2m与两条特异性肽段分别结合,用Superdex 75凝胶过滤纯化,并用其天然结构的单克隆抗体(mAb)W6/32进行初步鉴定。结果:HC工程菌和β2m工程菌诱导表达的水平分别为43％和47％,HC和β2m纯化后的纯度均达到95％。两条特异性肽段与HC和β2m可组装成HLA-A2-肽复合体,纯化的HLA-A2-肽复合物在4℃可保存2个月左右,并可与mAb W6/32特异性结合。结论:HLA-A2的HC工程菌和轻链β2m工程菌均具有较高的表达水平,与相应的特异性肽段可形成稳定的可溶性HLA-A2-肽复合物,为进一步研究细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的识别和应答奠定了基础。
- 孟晓静林来兴妹孟民杰胡志明王小宁
- 关键词：Β2微球蛋白
- hIL-2/mGM-CSF融合蛋白的构建及表达被引量：5
- 2001年
- 目的 :构建hIL 2 /mGM CSF原核表达载体 ,获得具有hIL 2和mGM CSF活性的hIL 2 /mGM CSF融合蛋白。方法 :利用PCR重叠延伸术 ,将人白细胞介素 2 (hIL 2 )和鼠粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因 ,通过 2个脯氨酸 (Pro)基因的中间接头连接起来 ,扩增出hIL 2 /mGM CSF融合基因 ,并克隆于表达载体pBV2 2 0和pLY4中。结果 :获得序列正确的hIL 2 /mGM CSF融合基因 ,并在大肠杆菌中成功表达 ,表达率在 2 0 %左右。活性测定其hIL 2活性为 4 5×10 5U/mg ,mGM CSF活性为 3 85× 10 6U/mg。结论 :获得了具有hIL 2和mGM CSF活性的hIL 2 /mGM CSF融合蛋白 ,为研究hIL 2 /mGM CSF融合蛋白的新生物学功能奠定基础。
- 夏荣林来兴妹周宏伟周明乾陈泽洪胡志明王小宁
- 关键词：白细胞介素-2细胞因子融合蛋白大肠杆菌
- 大肠杆菌表达重组人粒细胞集落刺激因子工程菌DH5α的发酵工艺研究被引量：7
- 1999年
- 研究大肠杆菌表达重组人粒细胞集落刺激；因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）工程菌ＤＨ５α的发酵工艺。方法：采用发酵罐发酵，对影响工程菌生长和目标蛋白的表达条件如：工程菌发酵的培养基配方、ｐＨ值、诱导时间、分批补加营养物质等进行了优化。结果：根据优化的条件，２０Ｌ罐发酵工程菌，菌体收得量可达湿重１５．６ｇ／Ｌ。目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的３０％。结论：此发酵工艺可以提高ｒｈＧ－ＣＳＦ工程菌菌体的得率和目标蛋白的表达。
- 胡志明于琳刁志宏郭志兵车小燕王小宁
- 关键词：发酵大肠杆菌
