安晨
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
- 供职机构：兰州生物制品研究所更多>>
- 发文基金：甘肃省中青年科技研究基金甘肃省科技重大专项计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 冻干人血浆补体的制备及其稳定性被引量：3
- 2016年
- 目的制备冻干人血浆补体,并观察其在4种不同保存温度条件下的稳定性。方法制备3批冻干人血浆补体,将每批样品分别保存在-70、4、25和37℃条件下,采用补体50%溶血试验测定于-70和4℃条件下保存第1、15、30、60、90、120、180、270、365天以及于25和37℃条件下保存第1、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120天的CH_(50);细胞增殖-毒性检测法测定补体对抗CD_(20)抗体CDC活性检测的影响。结果-70和4℃保存的3批冻干人血浆补体,1年内CH_(50)平均下降了19.5%和36.3%,25和37℃保存的3批冻干人血浆补体,3个月CH_(50)平均下降了53.4%和60.7%。与上市补体和CH_(50)为30 U/ml的冻干人血浆补体相比,CH_(50)为15 U/ml的冻干人血浆补体对抗CD_(20)抗体CDC活性检测结果无影响。结论在-70和4℃条件下保存的冻干人血浆补体的CH_(50)相对较稳定,但随着保存温度的升高,CH_(50)下降有加速的趋势。CH_(50)大于15 U/ml的冻干人血浆补体可用于治疗性抗体CDC活性检测。
- 秦海艳熊颖乔玉玲陈继军安晨毛晓燕
- 关键词：血浆冷冻干燥补体稳定性
- 治疗性单克隆抗体表达载体的设计与优化策略被引量：1
- 2014年
- 治疗性单克隆抗体的市场需求日益增长,因此如何分离得到高产的稳定表达细胞株及缩短研发过程成为此类研究的热点。在整个治疗性单克隆抗体的研发过程中,哺乳动物细胞表达载体的设计及其优化作为第一步就显得尤为重要。本文从基因转录水平的作用元件、作用方式、基因扩增与筛选标签及位置效应与整合位点的优化对治疗性单克隆抗体表达载体的设计与优化策略作一综述。
- 安晨毛晓燕
- 关键词：单克隆抗体哺乳动物细胞
- 重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293 EBNA1细胞中的瞬时表达优化被引量：4
- 2015年
- 目的:优化重组抗体在悬浮无血清培养的HEK293 EBNA1瞬时表达,提高重组抗体表达量。方法:将HEK293 EBNA1细胞适应于无血清悬浮培养,筛选适宜的无血清培养基。使用PEI转染质粒进入细胞,瞬时表达重组抗体;使用Modde软件进行实验设计(DOE),优化转染质粒量、轻重链比例、PEI量等影响瞬时表达的条件。培养上清经亲和纯化,获得目标抗体,用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)测定抗体活性,用BCA法测定纯化抗体浓度。结果:293SFMII为适宜的HEK293 EBNA1细胞无血清悬浮培养基。对抗体表达影响最大的因素是轻重链比例(P=0.00000),其次为质粒浓度(P=0.00086),最后为PEI(P=0.00257)。优化的转染条件为:质粒用量0.61μg/106细胞,轻重链比例2:1,PEI 2.67μg/106细胞,优化后抗体表达量有显著提高(P=0.007)。结论:通过DOE优化获得了重组抗狂犬病病毒抗体的高水平表达,抗体表达量提高了至少50倍。
- 陈继军秦海艳安晨乔玉玲李晓进毛晓燕
- 关键词：HEK293EBNA1
- 3种不同Protein A亲和层析填料纯化抗CD52单克隆抗体的比较被引量：3
- 2021年
- 目的比较3种Protein A亲和层析填料MabSelect SuRe、Protein A Diamond及UniMab 50纯化抗CD52单克隆抗体的载量及纯化效果。方法将浓度为1.24 mg/mL的抗CD52单克隆抗体分别流经3种Protein A亲和层析填料,确保保留时间一致,检测流穿液的抗体浓度,以流穿液中抗体浓度达10%上样浓度时的上样量确定填料的最大动态载量。3种填料均按80%最大载量上样,纯化3批抗CD52单克隆抗体培养上清样品,比较洗脱体积、抗体回收率及洗脱收集液中抗体浓度、抗体纯度、电荷异质性、宿主蛋白残余量、宿主DNA残余量、填料配基Protein A脱落量。结果填料MabSelect SuRe与Protein A Diamond在载量、宿主蛋白残余量、填料配基Protein A脱落量方面接近;在抗体纯度、电荷异质性、宿主DNA残余量方面,3种填料表现相当;在抗体回收率、洗脱体积及抗体浓度方面,UniMab 50表现最佳。结论 3种填料亲和纯化抗CD52单克隆抗体的效果各有优劣,但均可满足该纯化步骤的要求,可根据实际工艺状况及质控要求进行选择。
- 南建军秦海艳宋宪铭安晨宋兰兰赵晓瑞陈继军
- 关键词：载量
- 不同通气方式对抗破伤风毒素抗体工程细胞株生长及蛋白表达的影响被引量：1
- 2020年
- 目的探讨生物反应器不同通气方式对抗破伤风毒素抗体的CHO工程细胞株生长、代谢及目的蛋白表达的影响。方法在3个3 L生物反应器中,分别选用微泡、大泡和膜供氧的通气方式,以相同的初始密度接种CHO种子细胞,设置相同的温度、pH、搅拌速度、溶氧(dissolved oxygen,DO)等关键培养参数,采用补料分批培养模式进行培养。每日取样,分别检测培养液的活细胞密度(viable cell density,VCD)、细胞活率、渗透压及葡萄糖、乳酸、NH4+和抗体蛋白浓度。筛选细胞生长较好及乳酸等代谢副产物累积较少且蛋白表达量高的一种通气方式。结果微泡通气方式下,CHO细胞生长缓慢,最高VCD为7.63×10^6个/mL,接种后细胞活率一直低于90%且下降较快,培养8 d,抗体蛋白浓度为76 mg/L。大泡通气方式下,最高VCD为12.45×10^6个/mL,培养1~6 d细胞活率均高于90%,培养第8天乳酸浓度开始下降,培养10 d,抗体蛋白浓度为534 mg/L。膜供氧通气方式下,最高VCD为13.54×10^6个/mL,培养1~8 d细胞活率均高于90%,培养第8天乳酸浓度开始下降,培养10 d,抗体蛋白浓度为755 mg/L。结论大泡及膜供氧通气方式下细胞生长和蛋白表达情况均较好,选取易进行工艺放大的大泡通气方式进行后续培养工艺的建立。
- 宋兰兰安晨南建军叶星郭岚毛晓燕
- 关键词：通气方式细胞代谢蛋白表达
- 抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方的初步筛选被引量：1
- 2020年
- 目的初步筛选抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方组成。方法以PBS为缓冲体系,聚山梨酯-80(Tween-80)为表面活性剂,乙二胺四乙酸(EDTA)为抗氧化剂及溶液不同pH值为关键因素,实验设计(Design of Experiment,DOE)10组抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方,分别进行加速稳定性试验[40℃保存0、1、7及14 d],分析单克隆抗体主要质量属性[分子排阻-高效液相色谱(size-exclusive-high performance chromatography,SEC-HPLC)和毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)分析纯度,毛细管等点聚焦(capillary isoelectric focusing,cIEF)分析电荷变异体,动物实验检测抗体效价)]变化,初步确定制剂最适配方。结果单克隆抗体制剂经SEC-HPLC分析,1、2、9及10制剂配方组纯度较好,经CE-SDS分析,1、2、7~10制剂配方组纯度较好;经cIEF分析电荷变异体,2及9制剂配方组保护效果较好;经动物实验检测,1、2、7~10制剂配方组抗体效价较好;初步确定2及9制剂配方组为最适制剂配方。结论初步筛选出2组抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方,Tween-80浓度及制剂溶液pH值可能是影响抗体稳定的主要因素。本研究为单克隆抗体制剂的进一步优化提供了方向及依据。
- 王建锋叶星南建军安晨宋兰兰毛晓燕
- 关键词：单克隆抗体
