李茂玉
- 作品数：53 被引量：173H指数：7
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金教育部跨世纪优秀人才培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌蛋白质表达谱的建立被引量：4
- 2009年
- 目的:建立鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)蛋白质表达谱,为NPC蛋白质组学研究奠定基础。方法:应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术从NPC组织纯化NPC细胞,应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM纯化NPC细胞的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质,利用生物信息学资源构建NPC的2-DE蛋白质组数据库。结果:建立了NPC蛋白质2-DE参考图谱,2-DE图谱共显示(1312±30)个蛋白质点,共鉴定了427个蛋白质点,包括241个非冗余蛋白质,并构建了NPC的2-DE蛋白质组数据库,这些数据可从本实验室网站(http://www.xyproteomics.org)上进行查询。结论:首次建立了LCM纯化NPC细胞2-DE蛋白质表达谱,为NPC蛋白质组学研究提供了重要的信息和资料。
- 彭芳汤参娥李茂玉李萃程爱兰李峰张鹏飞李美香肖志强陈主初
- 关键词：鼻咽癌蛋白质表达谱激光捕获显微切割二维凝胶电泳质谱
- 采用血清蛋白质组学方法筛选能诱发自身抗体的鼻咽癌相关抗原被引量：4
- 2009年
- 目的采用血清蛋白质组学方法筛选能诱发机体产生自身抗体的鼻咽癌（NPC）相关抗原，以便为NPC诊断和治疗提供候选标志。方法收集19份NPC组织，采用二维凝胶电泳（2-DE）技术分离组织总蛋白质，每份组织样本同时做3块2-DE胶，其中将1块2-DE胶作为制备胶进行考马斯亮蓝染色，另2块2-DE胶采用半干式电转法将胶中的蛋白转至PVDF膜上，并分别与NPC患者自身的血清和健康人血清进行2-DE免疫印迹分析，识别能与多数NPC患者血清反应而不与或很少与健康人血清反应的蛋白质点，再从制备2-DE胶中切取相应蛋白质点，进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MOLDI—TOFMS）和电喷雾电离四级杆飞行时间质谱（ESI-Q—TOFMS／MS）分析，获取肽质量指纹图和肽序列标签，数据库搜索鉴定蛋白质。结果鉴定了13个能诱发机体产生自身抗体的NPC相关抗原：热休克蛋白70（HSP70）、人血清白蛋白（HAS）、热休克蛋白60（HSP60）、细胞角蛋白15（CK15）、亮氨酸氨基肽酶（LAP3）、α-烯醇化酶（Ot—enolase）、ErbB3结合蛋白（EBP1）、细胞角蛋白19（CK19）、核糖体蛋白P0（RPP0）、丙酮酸脱氢酶E1（PDE1）、GTP结合调节蛋白（GNBP）、抗增殖蛋白（prohibitin）和RhoGDP解离抑制因子2（Rho—GDI2），13种蛋白质点在21％的鼻咽癌患者中可见，而健康人中缺乏或出现频率较低。结论本研究筛选到13个NPC相关抗原，这些抗原能诱导患者产生自身抗体，这些抗体有可能成为NPC诊断标志和治疗靶标。
- 易斌陈颖李萃张鹏飞李茂玉易红彭芳陈主初肖志强
- 关键词：鼻咽肿瘤蛋白质组学抗原肿瘤自身抗体肿瘤标记
- 激光捕获显微切割纯化的人结肠癌组织的定量蛋白质组学研究被引量：3
- 2017年
- 为分析结肠上皮癌变进程中的差异表达蛋白质,筛选结肠癌诊断候选标志物,先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化人正常结肠组织和结肠癌组织,再采用同位素标记对蛋白质进行相对和绝对定量(i TRAQ),然后结合强阳离子柱分离和反相液质联用(2D-LC-MS/MS)鉴定差异表达蛋白质。试验共鉴定了1 042个非冗余蛋白,筛选出与人结肠癌变相关的差异蛋白162个,其中在结肠癌中表达上调的蛋白质68个,表达下调的蛋白质94个,功能分析表明,这些差异蛋白质涉及内质网蛋白质加工、糖酵解/糖原异生、黏着斑细胞连接、调节微丝组装和细胞外基质受体相互作用等分子功能。进一步采用Western blotting及免疫组织化学技术(IHC)验证了其中差异蛋白S100A9的表达,证实了定量蛋白质组学结果的可靠性。研究表明:差异表达蛋白质与结肠癌变相关,并有可能成为结肠癌诊断的候选分子标志物,为进一步深入研究这些蛋白质在结肠癌发生和发展进程中的分子机制,为结肠癌的发病机制研究提供新线索。
- 李国庆李园园李茂玉梁旭俊肖哲锋邵美英彭芳张鹏飞陈永恒陈主初
- 关键词：结肠癌生物标志物激光捕获显微切割技术
- 18O标记技术改良和分析工具开发及在鼻咽癌转移相关膜蛋白组研究中的应用
- 蛋白质组学已经成为当前生命科学研究的重要内容，已广泛应用于生命科学各个领域。由于基因在转录、翻译后产生蛋白质的过程中，存在着转录水平、翻译水平的调控，同时还存在着蛋白质的翻译后修饰，因而蛋白质组研究要比基因组研究复杂得多...
- 李茂玉
- 关键词：鼻咽癌
- 激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞的比较蛋白质组学研究被引量：7
- 2008年
- 为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western blot检测差异蛋白cytokeratin8(CK8)在LCM纯化的NPC细胞和NNEC以及具有不同分化程度或转移潜能的4株NPC细胞中的表达,免疫组织化学检测CK8在63例NPC、28例NNET及20例颈淋巴结转移NPC组织中的表达水平.建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了29个差异蛋白质,其中15个蛋白质只在NPC表达或表达明显增高,14个蛋白质在NPC中表达下调或缺失;Western blot结果显示,CK8的表达水平在NPC中较NNET明显下调,并与NPC细胞株的分化程度和转移潜能有关;免疫组织化学结果显示,CK8在NPC组织中的表达较NNET明显下调,在颈淋巴结转移NPC中的表达较原发NPC明显上调.研究结果提示,CK8与NPC分化及淋巴结转移相关,有望成为预测NPC转移和区别NPC分化程度的分子标志物.
- 程爱兰黄卫国张鹏飞李茂玉彭芳李峰李萃易红李美香陈主初肖志强
- 关键词：激光捕获显微切割鼻咽癌二维凝胶电泳基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
- 一种人肺腺癌蛋白质标志物Flotillin-1的应用方法
- 本发明提供了一种人肺腺癌蛋白质标志物Flotillin-1的应用方法，用于制备诊断、预测、检测或筛查肺腺癌的制剂；还可以用于制备诊断、预测、检测或筛查肺腺癌癌细胞扩散、肺腺癌淋巴结转移、肺腺癌临床分期、肺腺癌患者复发的制...
- 张鹏飞肖志强陈主初李萃易红李茂玉彭芳
- 文献传递
- 小细胞肺癌细胞系NCI-H446蛋白质表达谱的建立被引量：22
- 2004年
- 背景与目的:小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)是一种侵袭性极强的恶性肿瘤,具有增长迅速、早期转移等特点。目前公开的数据库中尚未见到小细胞肺癌的双向电泳参考图谱及其蛋白表达谱。本研究目的是建立高分辨率的小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞双向凝胶电泳图谱,并初步分析其蛋白质表达情况。方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳技术(IPG-DALT)分离NCI-H446细胞总蛋白,凝胶银染显色,ImageMaster2D图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术和数据库搜索鉴定蛋白质。结果:获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,三块胶平均蛋白质点数为1506±74,匹配点数为1412±56,匹配率达93.4%,三块胶蛋白质点在位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向偏差是(0.96±0.27)mm,在SDS-PAGE方向偏差是(1.24±0.41)mm。胶内酶解-肽质指纹图分析鉴定了58个蛋白质,其中有原癌蛋白、细胞周期调控和信号转导相关蛋白质。结论:建立了小细胞肺癌细胞系NCI-H446双向电泳参考图谱,并应用质谱技术鉴定了部分蛋白质点,为进一步构建其蛋白质表达数据库提供了基础。
- 李茂玉肖志强李萃吴晓英冯雪萍易红李建玲陈主初陈平梁宋平
- 关键词：NCI癌细胞系蛋白质表达谱双向凝胶电泳固相PH梯度MALDI-TOF
- 人支气管上皮癌变备阶段组织2-DE图谱的建立
- 支气管上皮细胞的癌变是一个多基因参与、多阶段的复杂过程,但癌变机理仍然不大清楚,应用新兴的蛋白质组学技术研究此过程有可能识别癌变相关蛋白质,对揭示肺鳞癌癌变机制具有重要的意义。为此,本研究收集、筛选人支气管正常上皮、鳞状...
- 吴晓英肖志强陈主初李萃李建玲冯雪萍易红李茂玉
- 文献传递
- 中药益气解毒颗粒对鼻咽癌裸鼠移植瘤蛋白质表达的影响被引量：16
- 2004年
- 目的 :探讨中药复方益气解毒颗粒抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤生长的分子机制。方法 :将鼻咽癌细胞系HNE1接种至BABL/c裸小鼠 ,2 0只 ,每只 0 .5× 10 7个 ,待移植瘤生长至一定大小 (约 1cm× 1cm× 1cm) ,随机分为两组。中药组灌喂益气解毒颗粒药液 ,对照组灌喂生理盐水 ,30d后处死裸鼠 ,解剖获取肿瘤组织 ,测量瘤体体积大小 ,称量瘤体重量。取 10 0mg瘤体组织 ,常规提取总蛋白质 ,用固相 pH梯度双向凝胶电泳分离移植瘤组织的总蛋白质 ,银染显色 ,ImageMaster 2DElite 4 .0 1软件分析差异蛋白质点。随机选取表达差异点共 19个 ,4个点为只在中药组表达 ,4个点仅在对照中表达 ,余下 11个为表达相差 5倍以上的点 ,进行质谱鉴定和生物信息学分析。结果 :益气解毒颗粒药液能明显抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长 ,灌喂中药组瘤体积和重量分别为 (0 .2 0 7± 0 .0 2 3)cm3和 (0 .132± 0 .0 2 1) g ,对照组为 (1.342± 0 .2 98)cm3 和 (1.0 17± 0 .0 15 ) g(P <0 .0 5 ) ;制率为 84 .5 8%。双向电泳图像分析蛋白质表达 ,益气解毒颗粒药物处理组平均蛋白质数为 5 6 7± 4 9,未处理组的平均蛋白质数为 6 79± 5 9;差异蛋白质有 2 4 3个 ,其中有 112个表达增强 ,有 131蛋白质表达下降 ;差异蛋白质的质谱鉴定和生物?
- 唐发清田道法邓富良龚志君周辉梁湘辉李茂玉肖志强
- 关键词：益气解毒中药裸鼠移植瘤药组蛋白质表达蛋白质固相PH梯度
- 应用蛋白质组学和RNAi技术筛选鼻咽癌细胞中p53功能相关蛋白质被引量：5
- 2007年
- 为了阐明鼻咽癌中高表达的p53蛋白聚集与失活的机制,高通量地检测与p53功能相关的蛋白质,首先采用RNA干扰(RNAi)技术稳定沉默鼻咽癌细胞系CNE2的p53基因表达,然后用蛋白质组技术研究稳定沉默该基因对鼻咽癌蛋白质表达谱的影响.通过对稳定干扰p53基因后鼻咽癌细胞系CNE2的蛋白质表达谱改变的研究,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析和电喷雾串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)验证鉴定了22个差异表达蛋白质.在这些差异表达蛋白质中,有些是已经报道的p53功能相关蛋白质,如热休克蛋白27(HSP27)、异质性胞核核糖核蛋白K(hnRNPK)、14-3-3σ等,其他可能是新的p53功能相关蛋白质,如eIF4B、TPT1、hnRNPH3、SFRS1等.部分差异表达蛋白质如HSP27、14-3-3σ和GRP75经蛋白质印迹分析技术进行了验证,同时pcDNA3.1-FLAG-p53质粒转染CNE2细胞引起了HSP27、14-3-3σ表达下调,GRP75表达上调.在鼻咽癌细胞中鉴定的22个差异表达蛋白质大致可以分为5类,包括信号传导相关蛋白质、分子伴侣、与转录和翻译相关蛋白质、代谢相关蛋白和细胞结构相关蛋白质,涉及到细胞周期的调控、分子基因表达调控、细胞黏附、细胞代谢等众多事件,它们可能作为p53功能相关蛋白质,为阐明鼻咽癌中p53蛋白聚集及失活的机制提供了重要依据和线索.
- 孙懿易红杨轶轩张鹏飞李茂玉李建玲杨芳肖志强陈主初
- 关键词：鼻咽癌蛋白质组学双向电泳MALDI-TOF-MS
