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杨晓
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1
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供职机构:
广东出入境检验检疫局
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发文基金:
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相关领域:
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合作作者
武婕
广东省疾病预防控制中心
师永霞
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广东出入境检验检疫局
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广东出入境检验检疫局
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中华微生物学...
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2009
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抗人禽流感病毒H5N1人源化单链抗体噬菌体文库的构建和筛选
2009年
目的利用抗人禽流感病毒H5N1 IgG抗体阳性的人禽流感康复患者外周血淋巴细胞,构建人源化Fv段单链抗体(scFv)噬菌体文库,并筛选与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库。方法提取人外周血淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA,以其为模板,利用家族特异性IgG基因的引物,扩增重链和轻链的可变区基因,并用合成的连接子将轻链和重链基因连接成单链抗体片段后,重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中。将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌TG1,酶切和PCR鉴定抗体库的重组率,通过测定噬菌体抗体库的滴度计算抗体库的库容,用特异性禽流感病毒相关蛋白筛选表达的单链抗体。结果构建了源于人禽流感康复患者血清的scFv抗体文库,库容为3.75×10^4;筛选出与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库。结论成功构建了抗人禽流感病毒H5N1的人源scFv噬菌体抗体库,并筛选出特异性结合人禽流感病毒相关蛋白的单链抗体,为进一步制备快速检测试剂和治疗研究提供了基础数据。
黄吉城
武婕
郭波旋
张宏斌
相大鹏
师永霞
李小波
洪烨
郑夔
幸芦琴
杨晓
关键词:
噬菌体文库
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