龚文杰
- 作品数：21 被引量：30H指数：3
- 供职机构：美国堪萨斯州立大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 狂犬病病毒颗粒的蛋白质组学分析被引量：1
- 2015年
- 狂犬病病毒是一种囊膜RNA病毒,主要侵害中枢神经系统,引起人和哺乳动物致命性的脑脊髓炎。现有研究表明囊膜病毒颗粒从感染的细胞中出芽释放时会携带许多可能在病毒的复制过程中发挥重要作用的宿主蛋白。尽管先前已报道某些宿主蛋白可掺入到狂犬病病毒颗粒上,但还没有系统地鉴定狂犬病病毒颗粒上的蛋白质组成。为了理解病毒与宿主间的相互作用的分子机制,本研究在病毒培养和蔗糖密度梯度超离心纯化的基础上,采用蛋白质组学方法分析了纯化的狂犬病病毒颗粒(SRV9弱毒疫苗株)上的蛋白质组成。除了检测到狂犬病病毒编码的五个结构蛋白以外,我们还检测到了50个宿主编码的蛋白。按功能可将其分成十类:胞内转运蛋白(14%),分子伴侣(12%),细胞骨架蛋白(24%),信号转导蛋白(8%),转录调节蛋白(12%),钙离子结合蛋白(6%),酶结合蛋白(6%),代谢作用蛋白(2%),泛素化蛋白(2%),其他功能的蛋白(14%)。利用免疫印迹方法对病毒颗粒上的4个宿主蛋白(肌动蛋白,微管蛋白,微丝结合蛋白和热应激同源蛋白70)进行了验证。本研究首次鉴定了狂犬病病毒颗粒上的宿主蛋白组成,有助于进一步研究该病毒复制与感染机制。
- 涂忠忠龚文杰张岩冯烨李楠涂长春
- 关键词：狂犬病病毒蛋白质组学宿主蛋白
- 动物狂犬病病毒街毒株的细胞分离鉴定
- 目的N2A细胞和BHK-21细胞用于我国动物狂犬病流行街毒株的分离培养。方法狂犬病发病动物脑组织悬液首先脑内接种乳鼠,再采取Nonclon Delta Tube内置盖玻片法从鼠脑中进行病毒分离培养,脑组织悬液接种细胞后9...
- 龚文杰江禹曾政李茂王莉莉刘浩熊仲良涂长春
- 关键词：细胞
- 文献传递
- 动物狂犬病流行毒株的抗原性差异分析
- 利用9株抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体,通过间接免疫荧光方法对分离的34株传至F6代N2A细胞适应株进行了抗原差异分析。结果表明:这些RABV分离株存在抗原差异,根据病毒与单抗反应的类型,将所分析的病毒株分为6个抗原变异型...
- 龚文杰曾政查云峰邵明富范金红孙彦伟余兴龙江禹涂长春
- 关键词：狂犬病毒抗原性遗传进化分析
- 文献传递
- 蝙蝠——人兽共患病病毒的重要自然宿主动物
- 近年来暴发的亨德拉病,尼帕病和sARs等许多新发传染病与蝙蝠有着直接的关系。蝙蝠是许多重要人兽共患病病毒的自然宿主,目前从蝙蝠体内分离鉴定的病毒多达60多种,其中大部分是高致病性的人兽共患病病毒,因此蝙蝠在新发传染病流行...
- 涂长春肖昌龚文杰
- 关键词：蝙蝠
- 文献传递
- Shotgun质谱筛选与猪瘟病毒囊膜蛋白E^rns相互作用的候选宿主蛋白
- 2013年
- 猪瘟病毒(CSFV)Erns蛋白是瘟病毒属成员特有的囊膜糖蛋白,在病毒吸附和侵入靶细胞过程中发挥重要作用。本研究利用Erns特异性抗体对CSFV石门强毒株感染的PK-15细胞进行免疫共沉淀(Co-IP),对获得的蛋白复合物进行Shotgun质谱鉴定。结果显示,与阴性对照相比,病毒感染细胞样品中含有199种差异蛋白,其中可能包含与Erns作用的宿主细胞蛋白。同时,实验还对Co-IP蛋白样品进行SDS-PAGE,切取差异条带进行质谱分析以进一步验证Shotgun技术的蛋白筛选结果。通过Co-IP和Shotgun质谱分析,本研究筛选出一些可能在CSFV生命周期中与Erns互作用的宿主蛋白,为进一步研究CSFV在宿主细胞中的感染和复制的分子机制奠定基础。
- 尹凝蒋大良龚文杰郭焕成谢金鑫夏乐乐余兴龙涂长春
- 关键词：猪瘟病毒蛋白质相互作用SHOTGUN
- 猪瘟病毒亚基因复制子及其细胞系的构建被引量：3
- 2016年
- 为探索猪瘟病毒(CSFV)的复制机理,本实验在前期CSFV流行株GD53全基因组测序的基础上,利用新霉素抗性基因(Neor)替换病毒结构蛋白基因以构建CSFV GD53株的亚基因组复制子(GD53-SGR)。首先构建含有T7-5'UTR-N^(pro)-Neor-EMCV/IRES-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-3'UTR的重组质粒pc DNA-GD53-SGR,将其利用T7 RNA聚合酶经体外转录制备的RNA转录本转染猪睾丸细胞系(ST)后,利用G418筛选含有GD53-SGR的ST细胞,构建ST-GD53-SGR细胞系。酶切鉴定及测序结果表明,重组质粒pc DNA-GD53-SGR构建正确,利用T7 RNA聚合酶体外转录后获得了与预期大小一致的GD53-SGR RNA。经RT-PCR和间接免疫荧光鉴定结果表明,获得了含有GD53-SGR的ST细胞系。本研究构建的CSFV ST-GD53-SGR细胞系有助于进一步了解CSFV非结构蛋白的功能,同时为CSFV的复制机制研究及抗病毒药物的研发奠定基础。
- 张莉谢金鑫蒋大良余兴龙贾俊杰郭焕成龚文杰涂长春
- 关键词：猪瘟病毒ST细胞
- 蝙蝠——人兽共患病病毒的重要自然宿主动物
- 近年来暴发的亨德拉,尼帕和SARS等许多新发传染病与蝙蝠有着直接的关系。蝙蝠是许多重要人兽共患病病毒的自然宿主,目前从蝙蝠体内分离鉴定的病毒多达60多种,其中大部分是高致病性的人兽共患病病毒,因此蝙蝠在新发传染病流行中具...
- 涂长春肖昌龚文杰
- 关键词：蝙蝠
- 文献传递
- 用TAP方法筛选与狂犬病毒N蛋白和P蛋白相互作用宿主蛋白的初步研究
- 狂犬病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属，单股负链的RNA病毒。它作为一个典型的嗜神经病毒，可在哺乳动物中引起致命性的脑脊髓炎，从而引起一种严重侵害大脑中枢神经的重要人兽共患传染病一狂犬病。狂犬病具有广泛的动物宿主，其病死率高达...
- 涂忠忠龚文杰涂长春
- 猪瘟病毒2.1b基因亚亚型野毒株的体外细胞传代适应与全基因组序列分析被引量：2
- 2015年
- 利用RT-PCR从广东某猪场疑似猪瘟(Classical swine fever,CSF)病例中检测出CSFV,并对扩增的E2全长基因进行了序列测定和系统进化分析。结果表明:引发该起猪瘟疫情的毒株属于CSFV 2.1b基因亚亚型,命名为GD176。为了进一步了解该毒株的复制特点,利用PK-15细胞对GD176进行了体外细胞适应性传代,并对获得的细胞适应毒GD176-F46进行了全基因组测序。结果表明:GD176通过在PK-15上不断传代,最终获得了高滴度的适应毒株,其滴度从第6代的102.61TCID50/m L提高至第46代的108.06TCID50/m L。病毒生长动力学结果显示,GD176-F46在感染后72 h病毒滴度达到最高值(108.17TCID50/m L)。为进一步分析GD176在细胞传代适应过程中的稳定性,对不同代次细胞毒的E2全长基因进行扩增和序列测定,结果发现:GD176-F0与GD176-F6、F10、F15、F20、F25、F30、F35、F40和F46的E2基因序列完全一致,这表明囊膜蛋白E2在病毒适应PK-15细胞过程中非常稳定。通过比对GD176和其他2.1亚型毒株各蛋白的氨基酸序列发现,不同毒株之间同源性最小的病毒蛋白是NS5A,低于病毒囊膜糖蛋白E2。获得了高度适应PK-15细胞的GD176细胞毒,为进行病毒毒力评价、复制和致病特性研究奠定了基础。
- 谢晓明张莉吕宗吉龚文杰郭焕成涂长春王全凯
- 关键词：猪瘟病毒全基因组
- 用TAP方法筛选与狂犬病毒N蛋白和P蛋白相互作用宿主蛋白的初步研究
- 狂犬病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属,单股负链的RNA病毒。它作为一个典型的嗜神经病毒,可在哺乳动物中引起致命性的脑脊髓炎,从而引起一种严重侵害大脑中枢神经的重要人兽共患传染病一狂犬病。狂犬病具有广泛的动物宿主,其病死率高达...
- 涂忠忠龚文杰涂长春
