张莉
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪瘟病毒亚基因复制子及其细胞系的构建被引量：3
- 2016年
- 为探索猪瘟病毒(CSFV)的复制机理,本实验在前期CSFV流行株GD53全基因组测序的基础上,利用新霉素抗性基因(Neor)替换病毒结构蛋白基因以构建CSFV GD53株的亚基因组复制子(GD53-SGR)。首先构建含有T7-5'UTR-N^(pro)-Neor-EMCV/IRES-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-3'UTR的重组质粒pc DNA-GD53-SGR,将其利用T7 RNA聚合酶经体外转录制备的RNA转录本转染猪睾丸细胞系(ST)后,利用G418筛选含有GD53-SGR的ST细胞,构建ST-GD53-SGR细胞系。酶切鉴定及测序结果表明,重组质粒pc DNA-GD53-SGR构建正确,利用T7 RNA聚合酶体外转录后获得了与预期大小一致的GD53-SGR RNA。经RT-PCR和间接免疫荧光鉴定结果表明,获得了含有GD53-SGR的ST细胞系。本研究构建的CSFV ST-GD53-SGR细胞系有助于进一步了解CSFV非结构蛋白的功能,同时为CSFV的复制机制研究及抗病毒药物的研发奠定基础。
- 张莉谢金鑫蒋大良余兴龙贾俊杰郭焕成龚文杰涂长春
- 关键词：猪瘟病毒ST细胞
- 猪瘟病毒N^(pro)蛋白及细胞内环境改变对其IRES活性的影响
- 2016年
- 位于猪瘟病毒(CSFV)基因组5'端非翻译区(UTR)的内部核糖体进入位点(IRES)在调控CSFV基因组的翻译中发挥重要的作用,为探索CSFV自身蛋白以及细胞内环境改变对IRES活性的影响,本研究构建了包含CSFV IRES在内的荧光素酶报告基因质粒,采用编码CSFV非结构蛋白N^(pro)和NS5A蛋白表达重组质粒转染细胞,或通过葡萄糖剥夺、氨基酸剥夺、氧化应激、血清饥饿等条件分别处理细胞,结果显示N^(pro)蛋白比之前报道的NS5A蛋白具有更显著的IRES抑制效果,并且抑制程度呈浓度依赖性;氨基酸剥夺、氧化应激及血清饥饿时可以显著降低CSFV IRES的活性,而葡萄糖剥夺对其活性无显著影响。本研究明确了CSFV非结构蛋白N^(pro)以及细胞内环境的改变可以调控IRES的活性,为进一步阐明CSFV复制增殖的分子机制提供新的实验依据。
- 罗庆华贾俊杰张必凯米士江张莉谢金鑫刘艳涂长春
- 关键词：猪瘟病毒IRES细胞内环境
- 猪瘟病毒2.1b基因亚亚型野毒株的体外细胞传代适应与全基因组序列分析被引量：2
- 2015年
- 利用RT-PCR从广东某猪场疑似猪瘟(Classical swine fever,CSF)病例中检测出CSFV,并对扩增的E2全长基因进行了序列测定和系统进化分析。结果表明:引发该起猪瘟疫情的毒株属于CSFV 2.1b基因亚亚型,命名为GD176。为了进一步了解该毒株的复制特点,利用PK-15细胞对GD176进行了体外细胞适应性传代,并对获得的细胞适应毒GD176-F46进行了全基因组测序。结果表明:GD176通过在PK-15上不断传代,最终获得了高滴度的适应毒株,其滴度从第6代的102.61TCID50/m L提高至第46代的108.06TCID50/m L。病毒生长动力学结果显示,GD176-F46在感染后72 h病毒滴度达到最高值(108.17TCID50/m L)。为进一步分析GD176在细胞传代适应过程中的稳定性,对不同代次细胞毒的E2全长基因进行扩增和序列测定,结果发现:GD176-F0与GD176-F6、F10、F15、F20、F25、F30、F35、F40和F46的E2基因序列完全一致,这表明囊膜蛋白E2在病毒适应PK-15细胞过程中非常稳定。通过比对GD176和其他2.1亚型毒株各蛋白的氨基酸序列发现,不同毒株之间同源性最小的病毒蛋白是NS5A,低于病毒囊膜糖蛋白E2。获得了高度适应PK-15细胞的GD176细胞毒,为进行病毒毒力评价、复制和致病特性研究奠定了基础。
- 谢晓明张莉吕宗吉龚文杰郭焕成涂长春王全凯
- 关键词：猪瘟病毒全基因组
- 我国首次出现草原型毒株引起的动物狂犬病疫情
- 2013年2月，我国新疆塔城地区发生一起羊狂犬病疫情，共造成26只羊死亡.4月，内蒙古锡林郭勒盟发生牛、羊狂犬病疫情，造成1只山羊和1头牛犊死亡.以上动物脑组织均送我们世界动物卫生组织(OIE)狂犬病参考实验室确诊.据宿...
- 冯烨苏南张莉许炜迪涂长春
- 猪瘟病毒E0蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：3
- 2016年
- 为表达猪瘟病毒E0蛋白并制备其多克隆抗体,本研究构建E0蛋白的原核表达载体,转化至BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达,亲和层析及切胶回收纯化重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot分析显示E0重组蛋白主要以包涵体形式表达,亲和层析纯化获得了E0重组蛋白,用其免疫Balb/c小鼠4次制备E0重组蛋白的多克隆抗体。间接ELISA显示,免疫小鼠血清中E0蛋白抗体效价为1∶50 000。获得的E0蛋白多抗能与病毒感染细胞及E0-EGFP融合表达细胞中天然结构的E0蛋白发生特异性反应。本研究制备的E0重组蛋白及其多克隆抗体为进一步研究E0蛋白的功能和免疫原性奠定了基础。
- 贾俊杰张必凯张莉谢金鑫郭焕成龚文杰涂长春
- 关键词：猪瘟病毒原核表达多克隆抗体
- 猪瘟病毒通过HSP27/AKT/mTOR途径诱导细胞自噬促进病毒复制的机制研究
- 猪瘟病毒是一种重要的致病性RNA病毒，可导致严重的高热、多发性出血及呼吸和消化系统症状，但其在宿主细胞内复制的机制目前尚不十分清楚。自噬是真核生物中高度保守的细胞内容物降解过程，在维持细胞的内环境稳定中发挥重要作用，已有...
- 刘艳张莉龚文杰贾俊杰谢金鑫涂长春
