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猪瘟病毒Npro蛋白及细胞内环境改变对其IRES活性的影响: 位于猪瘟病毒(CSFV)基因组5’端非翻译区(UTR)的内部核糖体进入位点(IRES)在调控CSFV基因组的翻译中发挥重要的作用,IRES可与宿主细胞中的翻译起始因子3(e IF3)结合,开始CSFV m RNA的翻译,...; 罗庆华贾俊杰张必凯米士江张莉谢金鑫刘艳涂长春; 关键词：猪瘟病毒 IRES 细胞内环境; 文献传递

猪瘟病毒亚基因复制子及其细胞系的构建被引量：3: 2016年; 为探索猪瘟病毒(CSFV)的复制机理,本实验在前期CSFV流行株GD53全基因组测序的基础上,利用新霉素抗性基因(Neor)替换病毒结构蛋白基因以构建CSFV GD53株的亚基因组复制子(GD53-SGR)。首先构建含有T7-5'UTR-N^(pro)-Neor-EMCV/IRES-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-3'UTR的重组质粒pc DNA-GD53-SGR,将其利用T7 RNA聚合酶经体外转录制备的RNA转录本转染猪睾丸细胞系(ST)后,利用G418筛选含有GD53-SGR的ST细胞,构建ST-GD53-SGR细胞系。酶切鉴定及测序结果表明,重组质粒pc DNA-GD53-SGR构建正确,利用T7 RNA聚合酶体外转录后获得了与预期大小一致的GD53-SGR RNA。经RT-PCR和间接免疫荧光鉴定结果表明,获得了含有GD53-SGR的ST细胞系。本研究构建的CSFV ST-GD53-SGR细胞系有助于进一步了解CSFV非结构蛋白的功能,同时为CSFV的复制机制研究及抗病毒药物的研发奠定基础。; 张莉谢金鑫蒋大良余兴龙贾俊杰郭焕成龚文杰涂长春; 关键词：猪瘟病毒 ST细胞

猪瘟病毒N^(pro)蛋白及细胞内环境改变对其IRES活性的影响: 2016年; 位于猪瘟病毒(CSFV)基因组5'端非翻译区(UTR)的内部核糖体进入位点(IRES)在调控CSFV基因组的翻译中发挥重要的作用,为探索CSFV自身蛋白以及细胞内环境改变对IRES活性的影响,本研究构建了包含CSFV IRES在内的荧光素酶报告基因质粒,采用编码CSFV非结构蛋白N^(pro)和NS5A蛋白表达重组质粒转染细胞,或通过葡萄糖剥夺、氨基酸剥夺、氧化应激、血清饥饿等条件分别处理细胞,结果显示N^(pro)蛋白比之前报道的NS5A蛋白具有更显著的IRES抑制效果,并且抑制程度呈浓度依赖性;氨基酸剥夺、氧化应激及血清饥饿时可以显著降低CSFV IRES的活性,而葡萄糖剥夺对其活性无显著影响。本研究明确了CSFV非结构蛋白N^(pro)以及细胞内环境的改变可以调控IRES的活性,为进一步阐明CSFV复制增殖的分子机制提供新的实验依据。; 罗庆华贾俊杰张必凯米士江张莉谢金鑫刘艳涂长春; 关键词：猪瘟病毒 IRES 细胞内环境

信号肽调节猪瘟病毒Erns蛋白、糖基化修饰和胞外分泌: 猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的以免疫抑制、高死亡率为主要特征的急性热性传染病,每年给养猪业带来巨大经济损失.CSFV囊膜蛋白Erns是一个高度糖基化的病毒结构蛋...; 贾俊杰龚文杰蒋大良涂长春

猪瘟病毒Npro蛋白及细胞内环境改变对其IRES活性的影响: 位于猪瘟病毒(CSFV)基因组5’端非翻译区(UTR)的内部核糖体进入位点(IRES)在调控CSFV基因组的翻译中发挥重要的作用,IRES可与宿主细胞中的翻译起始因子3(eIF3)结合,开始CSFV mRNA的翻译,启动...; 罗庆华贾俊杰张必凯米士江张莉谢金鑫刘艳涂长春; 关键词：猪瘟病毒 IRES 细胞内环境

猪瘟病毒E0蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：3: 2016年; 为表达猪瘟病毒E0蛋白并制备其多克隆抗体,本研究构建E0蛋白的原核表达载体,转化至BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达,亲和层析及切胶回收纯化重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot分析显示E0重组蛋白主要以包涵体形式表达,亲和层析纯化获得了E0重组蛋白,用其免疫Balb/c小鼠4次制备E0重组蛋白的多克隆抗体。间接ELISA显示,免疫小鼠血清中E0蛋白抗体效价为1∶50 000。获得的E0蛋白多抗能与病毒感染细胞及E0-EGFP融合表达细胞中天然结构的E0蛋白发生特异性反应。本研究制备的E0重组蛋白及其多克隆抗体为进一步研究E0蛋白的功能和免疫原性奠定了基础。; 贾俊杰张必凯张莉谢金鑫郭焕成龚文杰涂长春; 关键词：猪瘟病毒原核表达多克隆抗体

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贾俊杰