李晓峰
- 作品数：56 被引量：58H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种重组乙型脑炎病毒及其应用
- 本发明公开了一种重组乙型脑炎病毒及其应用。本发明提供了一种蛋白质，是将序列表的序列3所示蛋白质自N末端第218位氨基酸残基由极性氨基酸突变为非极性氨基酸后得到的蛋白质。本发明还保护编码所述蛋白质的基因、含有所述基因的重组...
- 秦成峰史佩勇李世华李晓峰赵慧秦鄂德
- 文献传递
- 登革2型病毒中国株3′非编码区RNA元件对翻译的影响被引量：2
- 2008年
- 【目的】探讨登革病毒(dengue virus,DEN)3′非编码区(untranslated region,UTR)RNA元件(VR、RCS2、CS2、CS1和SL)对基因组翻译的影响。【方法】首先构建登革2型病毒中国株(DEN2-43)UTR与萤火虫荧光素酶基因(LUC)组成的病毒诱导报告基因(virus induced reporter gene,VIRG),在此基础上分别构建包含DEN2-433′UTR不同RNA元件的VIRG,并通过LUC检测、实时RT-PCR和Western blot方法分析含有不同元件VIRG对翻译效率的影响。【结果】发现完整的3′UTR缺失可显著抑制翻译,含有病毒VR元件VIRG的翻译水平与完整3′UTR的VIRG相似,RCS2或CS2元件可提高VIRG的翻译效率,CS1或SL元件可降低VIRG的翻译效率。【结论】DEN2-43病毒基因组3′UTR参与了报告基因的翻译,其不同元件具有可上调和下调报告基因翻译效率的作用。
- 尉雁姜涛李晓峰赵慧刘忠钰邓永强刘然秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革病毒翻译调控
- 一种蛋白及其编码基因以及疫苗和它们在制备用于预防寨卡病毒感染的疫苗中的应用
- 本发明公开了一种蛋白及其编码基因以及疫苗和它们在制备用于预防寨卡病毒感染的疫苗中的应用。具体地，本发明公开了一种蛋白，其中，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还公开了编码上述蛋白的基因，和含有所述基因...
- 秦成峰韩剑峰李晓峰赵慧邓永强姜涛
- 文献传递
- 用于鉴定森林脑炎病毒的引物组合物以及它们的应用
- 本发明公开了一种用于鉴定森林脑炎病毒的引物组合物以及它们的应用。本发明提供的引物组合物，包括DNA片段-Ⅰ、DNA片段-Ⅱ、DNA片段-Ⅲ和DNA片段-Ⅳ；所述DNA片段-Ⅰ包括序列表的序列1所示的核苷酸序列，所述DNA...
- 秦成峰姜涛刘娟李晓峰邓永强秦鄂德
- 文献传递
- 流行性乙型脑炎活疫苗SA14-14-2减毒的分子机制
- 李世华李晓峰赵慧姜涛邓永强秦鄂德秦成峰
- 登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用。方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase,R.luc)报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6)。将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R.luc报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测。结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调。结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用。
- 于学东姜涛陈水平邓永强韩剑峰赵慧李晓峰刘然于曼秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革病毒复制子报告基因翻译
- 西尼罗病毒RNA复制子系统的建立与应用
- 2013年
- 目的构建具有复制和表达活性的RNA形式的西尼罗病毒(WNV)复制子。方法在DNA形式的WNV复制子pWNrep的基础上,将其CMV启动子替换成SP6启动子,并在3'UTR端引入PacⅠ酶切位点,构建复制子克隆pSP6-WNrep。同时,将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)和海肾荧光素酶(R.luc)报告基因分别插入上述复制子质粒中,获得含有报告基因的复制子pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.luc。将上述克隆线性化后进行体外转录,将转录体RNA转染BHK-21细胞,观察不同时间点绿色荧光蛋白(GFP)的活性和R.luc活性。结果与结论获得了WNV复制子pSP6-WNrep、pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.luc,酶切和测序鉴定结果显示,序列与预期一致。将含有报告基因的复制子转染细胞72 h后仍能观察到荧光信号,R.luc的活性随时间延长而增强。本研究成功构建了WNV Chin-01株的RNA复制子,该复制子能够在哺乳动物细胞中有效复制并表达外源蛋白,为下一步构建WNV单轮感染病毒样颗粒奠定了基础。
- 张富军李晓峰曹飞赵慧邓永强朱舜亚姜涛秦鄂德秦成峰
- 关键词：RNA西尼罗病毒复制子转染
- 携带基因型位点突变物质及其作为乙型脑炎疫苗的应用
- 本发明携带基因型位点突变物质及其作为乙型脑炎疫苗的应用。本发明提供了重组乙型脑炎病毒，为将乙型脑炎病毒包膜蛋白E第327位的丝氨酸突变为苏氨酸，且保持其余序列不变，得到的乙型脑炎病毒。本发明提供的携带包膜糖蛋白氨基酸突变...
- 秦成峰李晓峰叶青徐炎鹏
- 文献传递
- 一种乙脑/西尼罗嵌合病毒及其应用
- 本发明公开了一种乙脑病毒减毒株为基因骨架的乙脑/西尼罗嵌合病毒及其应用。本发明所提供的乙脑/西尼罗嵌合病毒，是将乙脑病毒基因组RNA中编码乙脑病毒prM-EΔ3蛋白的脱氧核糖核苷酸片段替换为西尼罗病毒基因组RNA中编码西...
- 李晓峰秦成峰赵慧邓永强姜涛秦鄂德
- 文献传递
- 含有海肾萤光素酶报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子的构建被引量：6
- 2008年
- 目的：构建含有海肾萤光素酶（Renilla luciferase，R．luc）报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子。为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段。方法：利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型病毒亚基因组复制子（DENRP），用顺式水解酶元件（cis-acting hydrolase element，CHYSEL）技术将R．luc报告基因插入到DENRP缺失的结构基因区，构建含有R．1uc报告基因的复制子（DEN-R．luc2A-RP）。将构建的复制子线性化并体外转录成RNA后，经电穿孔转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光、RT．PCR和R．luc检测技术对复制子进行鉴定。结果：所构建的prM-E基因缺失的复制子和含有海肾萤光素酶报告基因的复制子，均可在BHK-21细胞中自主复制并稳定表达病毒特异蛋白。DEN-R．luc2A-RP可持续表达外源R．luc报告基因21d，在转染后24～96h R．luc荧光信号呈线性增强。在该区间进行实时检测可显示复制子复制和翻译水平的变化。结论：获得了两株可在BHK-21细胞中稳定表达的复制子，为进一步研究登革4型病毒复制和翻译机制奠定了基础。
- 于学东秦成峰姜涛陈水平邓永强刘然赵慧李晓峰朱武洋于曼秦鄂德
- 关键词：登革病毒复制子
